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关键词： 急性B淋巴细胞白血病   精子相关抗原6   细胞增殖   耐药   NF-κB/TNFα  

摘要： 目的探究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)对急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞增殖及耐药的相关作用机制。方法纳入2019年1月至2023年12月重庆医科大学附属第一医院血液内科收治的56例B-ALL患者和15例缺铁性贫血(iron-deficiency anemia,IDA)患者,将B-ALL患者作为实验组,IDA患者作为对照组。收集B-ALL患者骨髓组织并提取其骨髓单个核细胞,RT-qPCR检测SPAG6的mRNA表达情况并对B-ALL患者进行分层分析,分为新诊断病例组(New-diag)、完全缓解组(complete remission,CR)、微小残留病(minimal residual disease,MRD)阳性组(MRD+)和复发组(Relapse);使用慢病毒感染构建SPAG6基因过表达(SPAG6-OE)和敲低(SPAG6-KD)的B-ALL细胞系,CCK-8和基于甲基纤维素的集落形成实验检测各组细胞的存活、增殖和成集落潜能;CCK-8检测化疗药物柔红霉素(daunorubicin,DNR)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理后细胞存活率(可反映其药物敏感性和IC50);从TARGET数据库获取B-ALL患者的mRNA-seq图谱,通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探索与SPAG6相关的信号通路并进行实验验证;NF-κB激活剂PMA和抑制剂BAY-11-7082作用后,通过CCK-8检测细胞存活率以及对化疗药物的敏感性,Western blot检测通路相关蛋白NF-κB P65、p-NF-κB P65、TNF-α等的表达情况;构建小鼠异种移植瘤模型,-/+敲低SPAG6组腹腔注射生理盐水作为对照组,-/+敲低SPAG6组腹腔注射DNR作为实验组,免疫组化检测NF-κB信号通路在组织中的表达情况。结果B-ALL患者SPAG6 mRNA表达明显高于IDA组(P<0.05),同时与CR组比较,SPAG6高表达于MRD+组(P=0.001)和复发组(P=0.003)。对比不同SPAG6表达水平细胞对化疗药物的反应,CCK-8实验证实SPAG6促进B-ALL细胞增殖(P<0.05),并降低其对DNR和MTX的敏感性(P均<0.05);机制上,GSEA结果提示NF-κB通路在B-ALL富集,实验证实SPAG6通过激活NF-κB/TNF-α通路增强B-ALL细胞对化疗药物的耐药。在体内,敲低SPAG6明显减小小鼠移植瘤体积(P<0.05),并在联合DNR治疗组观察到肿瘤体积额外减小(P<0.05)。此外,免疫组化结果提示联合DNR治疗组NF-κB P65和p-IKBα水平降低。结论SPAG6通过NF-κB/TNF-α通路促进B-ALL细胞增殖,降低其化疗敏感性,提示SPAG6与B-ALL患者的治疗效果和预后密切相关。

关键词： 非小细胞肺癌   扶正祛邪方   肿瘤预后   免疫功能   中医药疗法   临床试验  

摘要： 目的观察扶正祛邪方治疗ⅠB~ⅡB期非小细胞肺癌(NSCLC)术后患者的临床疗效及其对机体体液免疫功能的影响。方法将符合纳入标准的190例ⅠB~ⅡB期肺腺癌术后患者随机分为治疗组和对照组,每组各95例。对照组患者在完成西医标准治疗方案后,仅进行随访观察;治疗组在对照组治疗基础上,加用扶正祛邪方颗粒治疗,疗程为3个月。比较两组术后无病生存期、肿瘤标志物、免疫指标以及生活质量评分的变化。结果①最终完成试验者183例,治疗组91例、对照组92例。②治疗组1年和2年无病生存率显著高于对照组(P<0.05)。③治疗前后组内比较,两组糖类抗原242(CA242)、细胞角蛋白19片段(CY-211)水平差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组CA242水平较对照组下降(P<0.05)。④治疗前后组内比较,两组外周血补体C3、补体C4、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及CD4^(+)T细胞水平差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组外周血补体C3、补体C4、IL-6及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞水平较对照组下降,TNF-α及自然杀伤细胞水平较对照组升高(P<0.05)。⑤治疗前后组内比较,治疗组总体健康状况、功能相关领域各评分均上升及一般临床症状各个症状评分均降低(P<0.05),特征性子症状咳嗽、气促、胸痛、手臂或肩膀疼痛以及其他部位疼痛评分降低(P<0.05);对照组仅角色功能评分上升(P<0.05),而总体健康状况评分降低(P<0.05),一般临床症状中疼痛、气促、失眠、食欲丧失评分降低(P<0.05),特征性子症状气促和手臂或肩膀疼痛评分下降(P<0.05)。组间治疗后比较,治疗组总体健康状况、功能相关领域各评分以及一般临床症状中疲倦、恶心呕吐、疼痛、气促、失眠、食欲丧失、便秘评分均优于对照组(P<0.05),特征性子症状咳嗽评分优于对照组(P<0.05)。结论扶正祛邪方能有效延长ⅠB~ⅡB期NSCLC患者的无病生存期,显著降低外周血补体C3、补体C4、IL-6和TNF-α的表达水平,纠正机体的免疫紊乱,改善患者的生活质量。

关键词： 肠道菌群   骨质疏松   骨代谢   免疫   T淋巴细胞  

摘要： 肠道菌群是寄生于肠道中的共生细菌,具有很多重要的功能,包括调节宿主的新陈代谢和机体免疫稳态。近年来,有充分的证据表明肠道菌群可以调节骨量,主要是通过其代谢产物、与机体内分泌系统和免疫系统的相互作用介导的。该文结合国内外最新的相关文献报道就肠道菌群如何通过免疫系统影响机体骨代谢作一综述。

关键词： 金刚烷胺   恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)   帕金森   神经递质   PARK7   RANTES  

摘要： 目的:研究金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)对帕金森病患者认知功能及血清相关细胞因子水平的影响。方法:以2021年3月-2022年2月我院收治的70例帕金森病患者为观察对象,采用随机数字表法将患者分为B组和A组,每组35例。B组采用恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗,A组采用金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗。比较两组临床疗效,治疗前、治疗3个月后统一帕金森病评分量表(UPDRES)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评定量表(MoCA)评分、血清神经递质水平[5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、中枢神经特异蛋白(S100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]、血清胱抑素-C(Cys-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、活化T细胞趋化因子(RANTES)水平及不良反应。结果:A组临床总有效率高于B组(P<0.05);治疗3个月后A组UPDRES评分低于B组,MMSE、MoCA评分高于B组(P<0.05);治疗3个月后A组血清5-HT、DA水平高于B组,血清S100β、NSE水平低于B组(P<0.05);治疗3个月后A组血清Cys-C、PARK7、RANTES水平低于B组,血清SOD高于B组(P<0.05);两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗帕金森病患者疗效显著,可有效缓解临床症状,调节神经递质水平,促进病情恢复。

关键词： 附子煎剂   不同剂量   不同煎煮时间   非特异性免疫   毒性  

摘要： 目的:分析附子煎剂的剂量不同和煎煮时间不同对小鼠非特异性免疫和毒性的影响。方法:选取240只昆明种健康雄性小鼠,随机分为24组(正常组、模型组、匹多莫德、不同剂量和煎煮时间附片组),每组10只小鼠,除正常组外,均应用环磷酰胺诱导成为免疫低下模型。正常组和模型组每天给予相应剂量的自来水,其他22组按照分组的药物种类、剂量和煎煮时间给药。将毒性情况和单核巨噬细胞的吞噬能力作为观察指标,借助Bliss法进行半数致死量(LD50)的检测。结果:用药剂量与安全性呈负相关,煎煮时间与安全性呈正相关。与模型组相比,附片60 g煎1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h组及高压1.0组的脾指数较高(P<0.05)。与模型组相比,附片100 g煎0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h组的脾指数较高(P<0.05)。与模型组相比,附片30 g煎3.0 h组的胸腺指数更高(P<0.05)。与模型组相比,附片30 g煎0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h组和附片60 g煎0.5 h组的粒廓清指数K和吞噬指数α较高(P<0.05)。结论:附子煎剂的用药剂量与安全性呈负相关,煎煮时间与安全性呈正相关。通过科学的用药策略和规范的管理,可以在充分发挥附子疗效的同时,最大限度地降低其毒性风险。

关键词： 息肉状脉络膜血管病变   细胞因子   血管内皮生长因子   近远期预后   影响因素  

摘要： 目的:探讨息肉状脉络膜血管病变抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗前后细胞因子的变化及近远期预后影响因素。方法:选取2020.1-2023.1收治的86例息肉状脉络膜血管病变患者,均采取抗VEGF治疗,随访12个月,对比相关指标。依照随访结果分为近期BCVA提高组、近期BCVA未提高组及远期BCVA提高组、远期BCVA未提高组,进行因素分析。结果:治疗后12个月VEGF、bFGF、IL-6、IL-8、VCAM低于治疗前及治疗后3个月,IL-10高于治疗前及治疗后3个月(P<0.05);治疗后12个月BCVA、CRT均低于治疗前及治疗后3个月(P<0.05);病程、GLD、bFGF、IL-6、IL-8、IL-10、VCAM为息肉状脉络膜血管病变抗变VEGF治疗远期预后独立影响因素(P<0.05)。结论:针对息肉状脉络膜血管病变患者采取抗VEGF治疗可改善其视力水平与CRT厚度,治疗前后房水中VEGF、bFGF、IL-6、IL-8、IL-10、VCAM相关细胞因子浓度可发生变化,且上述细胞因子可为息肉状脉络膜血管病变近远期预后预测提供重要参考价值。

关键词： 干眼   结膜上皮细胞   泪液   缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)   白细胞介素-17(IL-17)  

摘要： 目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、白细胞介素-17(IL-17)在干眼患者结膜上皮细胞及泪液中的表达水平及临床意义。方法:回顾性研究。选取2021-02/2023-03在本院收治的干眼患者183例183眼,选择同期在本院体检健康的181例181眼作为对照组(均选取左眼入组)。检测两组参与者结膜上皮细胞和泪液中HIF-1α、IL-17表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析结膜上皮细胞和泪液中HIF-1α、IL-17检测对干眼检测的诊断价值。结果:与对照组相比,干眼组患者结膜上皮细胞中HIF-1α、IL-17表达水平升高(均P<0.01);泪液中HIF-1α、IL-17表达水平升高(均P<0.01)。Pearson相关性分析显示,干眼组患者结膜上皮细胞和泪液中HIF-1α、IL-17均与BUT及泪液分泌试验Ⅰ(SⅠt)负相关,与角膜荧光素染色评分正相关(均P<0.05);干眼组患者结膜上皮细胞和泪液中HIF-1α、IL-17表达水平呈现正相关(均P<0.001)。ROC曲线下面积显示,结膜上皮细胞中HIF-1α、IL-17联合检测诊断的AUC显著大于结膜上皮细胞中HIF-1α单独检测诊断的AUC(Z=5.574,P<0.001),结膜上皮细胞中IL-17单独检测诊断的AUC(Z=4.351,P<0.001),泪液中HIF-1α、IL-17联合检测诊断的AUC显著大于HIF-1α单独检测诊断的AUC(Z=3.583,P<0.001),IL-17单独检测诊断的AUC(Z=4.303,P<0.001)。结论:干眼患者结膜上皮细胞及泪液中HIF-1α、IL-17表达水平升高,联合检测HIF-1α、IL-17表达水平对干眼的诊断具有重要价值。

关键词： 单克隆抗体   修饰变异体分析   样品前处理   基于质谱的蛋白质组学策略   液质联用技术  

摘要： 治疗性单克隆抗体(mAbs)因具有靶向性高、药效作用强等优点而广泛应用于恶性肿瘤和自身免疫性疾病的高效治疗,成为全球新药研发热点。由于抗体药物自身结构复杂,尤其在生产、储存等过程甚至在病人体内易出现各种修饰变化,如氧化、脱酰胺化、糖基化等,这些修饰不仅会增加mAbs的异质性,还会影响其稳定性和生物活性,因此监测mAbs体内外修饰变化情况,对于药物研发、生产及体内命运动态变化分析意义重大。液质联用技术(LC-MS)通过将液相色谱分离和质谱检测相结合已成为抗体质量研究和临床监测的重要分析手段,而mAbs体内分析的生物样本前处理面临着基质干扰严重以及血药浓度低等分析挑战。系统总结了抗体修饰变异体分析技术涉及的样本前处理过程和LC-MS技术的应用进展。

关键词： 牛乳腺炎   粪肠球菌   溶血素cylA基因   细胞因子   p38 MAPK  

摘要： 为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cylA基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cylA组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与BME1708组相比,BME1708△cylA组IL-10表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNF-α的表达水平降低,但是差异不显著;对p38 MAPK磷酸化检测结果显示,粪肠球菌cylA基因可以激活p38 MAPK信号通路并使其磷酸化;在PD 169316孵育后,与未添加抑制剂组相比,添加抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

关键词： 轮状病毒性腹泻   降钙素原   白细胞介素-6   C反应蛋白   白细胞计数  

摘要： 探讨轮状病毒性儿童腹泻诊断中降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)联合白细胞计数(WBC)检测的意义。方法 本次研究的方法主要是采用了回顾性分析法,即对2021年2月至2024年2月期间的轮状病毒性腹泻患儿80例和非感染性腹泻患儿80例进行回顾性的对比分析:两组采集空腹静脉血进行PCT、IL-6、CRP、WBC检测,比较两组各指标水平,比较观察组不同腹泻程度患儿各指标水平,并以轮状病毒感染抗原检测结果为金标准,评估PCT、IL-6、CRP、WBC单一检测及联合检测对轮状病毒性腹泻的诊断有效性。结果 通过对两组患儿的数据对比发现:观察组患儿的PCT、IL-6、CRP、WBC水平明显高于对照组(P<0.05)。观察组患儿不同腹泻程度的PCT、IL-6、CRP、WBC水平差异明显,而且重度>中度>轻度(P<0.05)。PCT、IL-6、CRP、WBC联合检测诊断轮状病毒性腹泻的敏感度91.25%、特异度93.75%、准确度92.50%高于 PCT、IL-6、CRP、WBC单一检测(P<0.05)。结论 轮状病毒性腹泻患儿PCT、IL-6、CRP、WBC超出正常范围,可通过联合诊断可保证高度的敏感度、特异度和准确度,同时各指标水平与腹泻程度成正比。