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关键词： 白细胞介素33   肺腺癌   M2型巨噬细胞   极化   肿瘤相关巨噬细胞  

摘要： 目的观察白细胞介素33(IL-33)在肺腺癌组织中的表达变化及其对肺腺癌PC-9细胞增殖能力的影响,并探讨其机制是否与影响肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化、CD8+T淋巴细胞杀伤作用有关。方法选择行肺癌根治术并经病理确诊的肺腺癌患者91例,术中收集其肺腺癌及癌旁组织,采用免疫组化法及Western blotting法检测IL-33、M2型TAM表面标志物CD206表达,比较不同临床特征患者的IL-33、CD206阳性表达率,分析二者相关性,比较IL-33阳性及阴性肺腺癌组织CD206+巨噬细胞浸润情况(以CD206特异性荧光强度表示)。取对数生长期的人单核细胞白血病细胞株(THP-1),加入佛波酯诱导为M0型TAM,随机分为A、B、C、D组,分别加入0、5、10、15 ng/mL IL-33培养2 d,采用流式细胞术检测各组M2型TAM表面标志物CD206、CD163及M1型巨噬细胞标志物CD80、CD86表达率。将肺腺癌PC-9细胞与各组TAM上清液共培养2 d,采用流式细胞术检测肺腺癌PC-9细胞Ki67表达。分离CD8+T淋巴细胞,与各组TAM共培养72 h,采用流式细胞术检测CD8^(+)T淋巴细胞干扰素γ(IFN-γ)、穿孔素(Perforin)和颗粒酶B(Gzmb)阳性率。结果肺腺癌组织中IL-33、CD206阳性表达率及蛋白相对表达量均高于癌旁组织,IL-33、CD206蛋白相对表达量呈正相关关系(r=0.617),P均<0.05。分化程度为低分化、淋巴结转移N1~3期、临床分期Ⅲ期的肺腺癌患者癌组织IL-33、CD206阳性表达率均高于分化程度为中/高分化、淋巴结转移N0期、临床分期Ⅰ/Ⅱ期者(P均<0.05)。IL-33阳性、阴性的肺腺癌组织CD206特异性荧光强度分别为12.42±1.46、4.23±1.01,二者比较P均<0.05。A、B、C、D组TAM CD206、CD163表达率均依次升高,CD80、CD86表达率均依次降低(P均<0.05)。与A、B、C、D组TAM上清共培养的肺腺癌PC-9细胞Ki67表达率依次升高,与A、B、C、D组TAM共培养的CD8+T淋巴细胞IFN-γ、Perforin、Gzmb阳性率依次降低(P均<0.05)。结论肺腺癌组织IL-33表达升高并与疾病进展有关,IL-33可促进肺腺癌细胞增殖,其机制可能与诱导M0型TAM极化为M2型、抑制CD8+T淋巴细胞杀伤作用有关。

关键词： 青少年抑郁症   淋巴细胞亚群   免疫表型   流式细胞技术  

摘要： 目的探究青少年抑郁症患者与正常组的淋巴细胞亚群免疫表型的差异,为抑郁症的诊疗提供更多免疫学思路和实验室依据。方法分别对50例青少年抑郁症患者(患者组)和50例健康人群(对照组)通过流式细胞术进行淋巴细胞亚群检测,对检测结果进行分析比较。结果患者组总T淋巴细胞(CD3^(+))、辅助T细胞(CD3^(+)/CD4^(+))、抑制T细胞(CD3^(+)/CD8^(+))、总B细胞(CD3-/CD19^(+))及淋巴值显著高于对照组,CD4/CD8及NK细胞(CD3-/CD16^(+)/CD56^(+))表达显著低于对照组(均P<0.05)。结论青少年抑郁症患者可能存在免疫系统的失衡,特别是T细胞和B细胞的异常免疫反应。

关键词： 动脉粥样硬化   巨噬细胞极化   中医药   信号通路   细胞因子   抗炎   作用机制   研究进展  

摘要： 不同微环境作用下的巨噬细胞极化在动脉粥样硬化形成发展过程中发挥了重要作用,如何调控M1/M2型巨噬细胞极化方向干预炎症反应已然成为防治动脉粥样硬化的研究热点。近年来,大量的动物实验以及细胞实验发现关于中医药调控巨噬细胞极化防治动脉粥样硬化的机制与多条信号通路以及细胞因子等密切相关。本文将以信号通路为引,总结JAK-STAT、Notch、MAPKs、PI3K/Akt、NF-κB、AMPK-mTORC1等多条信号通路与巨噬细胞极化之间关系以及中药单体和复方均可通过抑制相关信号通路进而抑制炎症反应发挥稳定、延缓进展等作用,为中医药靶向调节巨噬细胞极化治疗动脉粥样硬化提供理论依据参考。

关键词： 嗜水气单胞菌   O-抗原糖基转移酶   环境适应性   毒力  

摘要： [目的]本文旨在探究4种O-抗原糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)对嗜水气单胞菌NJ-35环境适应性和毒力的影响。[方法]采用同源重组技术构建GT基因缺失株ΔGT-1、ΔGT-2、ΔGT-3和ΔGT-4,比较缺失株与野生株在体外生长、抗应激、抗吞噬、细胞黏附能力、对斑马鱼毒力以及脂多糖(LPS)表达量等方面的差异。[结果]在含有20 g·L^(-1)NaCl的高渗LB(Luria-Bertani)培养基中,相比野生(WT)菌株,4个缺失株生长均未发生明显变化;在2 mmol·L^(-1)H _(2)O_(2)的强氧化应激条件下,4个缺失株抗氧化能力显著降低,特别是缺失株ΔGT-3存活率下降90%,ΔGT-4存活率下降86.5%,另外2株缺失株存活率下降近40%;在LB培养基(pH5.0)中作用30 min,4个缺失株存活率相比野生株均明显降低,其中ΔGT-3存活率下降近30%;4个缺失株对上皮细胞的黏附能力均显著降低,抗吞噬能力均显著增强;相比野生株,ΔGT-4对斑马鱼半数致死量(LD 50)上升近20倍,其他缺失株的毒力无明显变化;4个缺失株的LPS表达量均降低,且ΔGT-1和ΔGT-4的LPS最高分子质量条带出现缺失。[结论]O-抗原糖基转移酶有助于嗜水气单胞菌抵抗酸应激和氧化应激环境,并在该菌的黏附和毒力上发挥重要作用。

关键词： 糖尿病,妊娠   T淋巴细胞亚群   妊娠结局   预测  

摘要： 目的分析妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血T淋巴细胞亚群与妊娠结局的关系及其对不良妊娠结局的预测价值。方法回顾性分析2020年1月至2022年10月攀枝花市仁和区人民医院收治的518例孕妇的临床资料,根据是否患有GDM分为GDM组(113例)和非GDM组(405)例。两组均在妊娠24~28周时检测外周血T淋巴细胞亚群百分比,并随访孕妇妊娠结局。以发生剖宫产、早产、大于胎龄儿(LGA)、子痫前期等其中任一事件认定为不良妊娠复合终点事件。采用Logistic回归分析不良妊娠复合终点事件的影响因素,采用受试者工作特征曲线分析T淋巴细胞亚群对不良妊娠结局的预测价值。结果单因素Logisitc回归分析结果显示,CD_(4)^(+)T淋巴细胞升高、CD_(8)^(+)T淋巴细胞降低和CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)升高是GDM孕妇发生不良妊娠复合终点事件的危险因素(P<0.05)。多因素Logisitc回归分析结果显示,CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)升高是GDM孕妇发生不良妊娠复合终点事件的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)预测GDM孕妇不良妊娠复合终点事件的曲线下面积(AUC)为0.798(95%CI 0.713~0.868),特异度为61.7%,灵敏度为93.8%;CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)预测GDM孕妇剖宫产、早产、LGA、子痫前期的AUC分别为0.737、0.772、0.712、0.718。结论CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)升高是GDM孕妇不良妊娠的危险因素,可作为GDM孕妇不良妊娠结局的预测指标。

关键词： PRRSV   抗原   抗体   细胞因子   复方中药  

摘要： 为了考察替米考星联合复方中药对母猪蓝耳病的治疗效果,本试验选择福建省莆田市某猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阳性猪场,将3栋PRRS阳性猪舍分为3组(对照组、试验Ι组、试验Ⅱ组),每组80头,共240头。试验Ι组、试验Ⅱ组母猪分别给予低剂量复方中药提取物+替米考星、高剂量复方中药提取物+替米考星,从产前21 d连续拌料饲喂至分娩。统计试验组母猪的生产性能,包括发病率、死亡率、产仔率等。于给药前和给药结束后,分2次对母猪采血,分娩后采集仔猪脐带血,测定母猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原、抗体、细胞因子(IL-6、IL-1β、IL-10、TNF-α)以及氧化应激因子(MDA、SOD、GSH-Px)水平,并通过qPCR方法检测仔猪脐带血中PRRSV载毒量。结果显示,试验Ⅱ组母猪发病率和死亡率低于对照组,分娩率、产仔数和健仔数高于对照组,但均差异不显著(P>0.05);试验Ⅱ组母猪抗原阳性率和抗体(PRRSV N蛋白抗体)离散度低于对照组(P>0.05);试验Ⅱ组母猪血清中IL-6(P<0.01)、IL-1β(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)水平均显著或极显著低于对照组,IL-10(P<0.05)、SOD(P<0.01)和GSH-Px(P<0.01)水平均显著或极显著高于对照组;仔猪脐带血中均未检测出PRRSV。综上所述,替米考星联合复方中药可更好改善母猪的生产性能,降低PRRSV载量和促炎细胞因子含量,从而防止由PRRSV引起的继发感染和细胞因子风暴。

关键词： Anguilla japonica   IKKε   TypeⅠIFN   IRF3   NF-κB   MAPK  

摘要： IKKε is an IκB kinase participating in the control of NF-κB and type Ⅰ IFN signal pathways in ***,the function of IKKε in regulating immune response is largely unknown in ***,an IKKε homologue named AjIKKε was characterized in Japanese eel(Anguilla japonica).AjIKKε has an N-terminal kinase domain,a ubiquitin-like domain,and a coiled coil-containing domain(CC),which is conserved and similar to its counterpart in *** analysis showed that AjIKKεcould be up-regulated in kidney,spleen,and particularly in liver under the stimulation of poly Ⅰ:C,LPS,and Aeromonas hydrophila *** vitro,the mRNA levels of AjIKKεwere significantly provoked in eel liver cells stimulated by LPS and poly I:C,or the different concentrations of *** overexpression of AjIKKε could not only induce a significantly higher level of promoter activity of human NF-κB,AP-1,and IFN-β in a dose-dependent manner but also up-regulate the activation of promoters of Japanese eel cRel,AP1,IL6,IFN4,IRF3,and IRF7 in HEK293 *** studies showed that after AjIKKε was knocked down,the expression levels of IL1,IL6,TNFα,c-Jun,IFN2,IFN3,MX1,MX2,and IRF3 genes were significantly down-regulated in liver,spleen,and kidney of Japanese *** addition,the mutants of AjIKKε-K39A,AjIKKε-S174A,and AjIKKε-ΔCC failed to activate Japanese eel IFN4,IRF3 and human IFN-β promoters in HEK293 ***,these results suggest that AjIKKεmay function as a positive regulator of NF-κB,MAPK,and IRF3-mediated type Ⅰ IFN signaling pathways related to immune response evoked by bacterial and viral infection.

关键词： Combination therapies   HSA-IL-2 fusion protein   Immunotherapy   α-PD-L1  

摘要： Interleukin 2 (IL-2) is a multifunctional cytokine that is crucial for T-lymphocytes proliferation and differentiation. However, IL-2 binds to IL-2Rα (CD25) subunit preferentially and tends to stimulate regulatory T cells (Tregs), which express high-affinity trimeric receptors (IL-2Rαβγ), resulting in immunosuppressive effects. Therefore, development of methods that enhance IL-2/CD122 interactions and activate immune responses without affecting therapeutic efficacy of IL-2 may be desirable. In this work, we constructed a recombinant IL-2 fusion protein (HSA-IL-2), comprising human serum albumin (HSA) and IL-2, there was a new interaction interface between HSA domain and CD122 in HSA-IL-2 fusion protein predicted by AlphaFold2, and followed by determining binding affinity between HSA-IL-2 and CD122 through ForteBio's Bio-Layer Interferometry technology. Strikingly, HSA did promoted interactions between HSA-IL-2 fusion protein and CD122 compared with wild-type IL-2. In vivo experiments, HSA-IL-2 fusion protein had capacity to promote CD8⁺ T cells infiltration while reducing Treg cells infiltration for boosting immunotherapeutic efficacy. Furthermore, it facilitated synergistic therapeutic effect with α-PD-L1 to inhibit tumor growth. Overall, our research unveiled an enhanced binding affinity method underlying interactions between IL-2 and CD122 via fusing albumin, and propose a promising therapeutic strategy to facilitate IL-2 administration and broaden its clinical use. © 2024 The Authors

关键词： B细胞发育相关基因   急性B淋巴细胞白血病   预后   儿童  

摘要： 目的:分析B细胞发育相关基因在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达,探索B细胞发育相关基因与B-ALL患儿预后的相关性。方法:基于GEO和TARGET数据库,分析健康对照者与B-ALL患儿差异表达的B细胞发育相关基因及其在B-ALL复发组和未复发组的差异表达。采用Cox单因素回归及Lasso回归方法筛选候选基因并构建B-ALL特异性的B细胞发育相关基因的预后模型。通过Cox多因素回归评估所构建的预后模型的应用价值,并分析B-ALL不同亚型的风险评分情况。在真实世界中,通过B-ALL患儿转录组测序结果验证B细胞发育相关基因预后模型与临床结局之间的相关性。此外,还分析了该预后模型与其他B-ALL预后模型的相关性。最后,采用Metascape评估与该预后模型相关基因的信号通路及功能富集状态,以探究其潜在机制。结果:在B-ALL中特异性表达且与B细胞发育相关的基因共1097个,其中27个基因在B-ALL复发组中表达上调,37个基因在B-ALL复发组中表达下调。采用Cox单因素回归及Lasso回归方法,筛选出14个基因纳入B细胞发育相关基因的预后模型(CDC25B、CKAP4、DSTN、IGF2R、NDUFA4、ODC1、PAX5、SH3BP4、SLC27A5、APAF1、ARRB2、HHEX、IL13RA1、UVRAG)。基于14个基因的预后模型对TARGET数据库中134例B-ALL患儿进行风险评分,高风险评分组(评分>0.11)的患儿预后差于低风险评分组(评分≤0.11)的患儿。Cox多因素分析显示,该B细胞发育相关基因的风险评分可作为B-ALL患儿独立预后因素,并且低风险评分组中高二倍体阳性患儿的比例显著高于高风险评分组,而高风险评分组中TCF3/PBX1阳性患儿的比例显著高于低风险评分组。同时,真实世界数据显示,高风险评分组的B-ALL患儿预后差于低风险评分组的患儿,且B-ALL死亡组患儿B细胞发育相关基因的风险评分高于B-ALL未死亡组。此外,根据代谢相关基因预后积分系统计算的风险评分与该B细胞发育相关基因预后模型计算的风险评分具有正相关性。最后,差异基因的功能富集分析提示,B-ALL患儿的预后风险与胚胎向各系统发育分化过程,尤其与B细胞受体信号通路相关。结论:在B-ALL中特异性表达的B细胞发育相关基因与B-ALL患儿的预后相关,其中14个基因构成的预后模型有望成为儿童B-ALL新的预后判断标志。

关键词： 桂枝新加汤   颈椎病   网络药理学   疼痛   炎症因子  

摘要： 目的依据前期桂枝新加汤治疗颈椎病网络药理学研究结果,在动物实验中对桂枝新加汤治疗颈椎病的作用机制进行初步验证。方法前期网络药理学筛选出桂枝新加汤治疗颈椎病有关的磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol 4,5-diphosphate 3-kinase catalytic subunitα,PIK3CA)、信号转导和转录激活因子3(signal transduction and transcription activator 3,STAT3)、肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、丝裂原激活蛋白激酶14(mitogen activated protein kinase 14,MAPK14)等主要作用靶点,涉及MAPK、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等多条与炎症调节相关通路。在动物实验中,采用动静力失衡法构建颈椎间盘退变大鼠模型,观察桂枝新加汤对模型大鼠疼痛阈值、椎间盘组织HE染色、椎间盘内TNF-α及外周血清TNF-α、P物质(substance P,SP)、前列腺素E_(2)(prostaglandin E_(2),PGE_(2))等炎症因子的影响,初步验证桂枝新加汤治疗颈椎病的作用机制。结果与模型组比较,桂枝新加汤干预颈椎间盘退变大鼠模型2、4、8周,降低外周血清PGE_(2)、SP、TNF-α含量(P<0.01);桂枝新加汤干预8周,能有效的降低颈椎间盘TNF-α水平(P<0.05)。结论桂枝新加汤能提高机械刺激疼痛阈值,降低颈椎间盘退变大鼠血清中SP、PGE_(2)、TNF-α及颈椎间盘内TNF-α表达,起到缓解颈椎病疼痛的作用,成功验证了网络药理学部分结果。