课程文献中心 更多>>

关键词： 活动性肺结核   γ干扰素诱导蛋白10   白细胞介素-2   单核细胞趋化因子-1   干扰素-γ  

摘要： 目的探讨γ干扰素诱导蛋白10(interferonγ-inducible protein-10,IP-10)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)血液浓度检测在活动性肺结核(active tuberculosis,ATB)诊断中的应用。方法回顾性分析2023年11月~2024年11月在洪雅县中医医院就诊的110例ATB患者的临床资料作为观察组,另选择同期90例其他肺部疾病患者作为肺病组,60例健康体检者作为对照组。对比3组的IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ血液浓度,分析IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ与ATB的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线探讨IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ诊断ATB的价值。结果观察组的IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ高于肺病组、对照组(P<0.05);肺病组的IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ联合诊断ATB的效能(AUC:0.813,95%CI:0.784~0.842)优于IP-10(AUC:0.663,95%CI:0.645~0.681)、IL-2(AUC:0.627,95%CI:0.611~0.643)、MCP-1(AUC:0.721,95%CI:0.685~0.757)、INF-γ(AUC:0.734,95%CI:0.692~0.776)单一指标(P<0.05)。Logistic分析显示IP-10升高(OR:3.435,95%CI:1.874~4.996)、IL-2升高(OR:1.314,95%CI:1.264~6.178)、MCP-1升高(OR:3.691,95%CI:2.521~5.561)、INF-γ升高(OR:3.710,95%CI:1.584~5.836)是ATB发生的独立危险因素(P<0.05)。结论IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ在ATB中呈高表达,IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ水平升高为ATB发生的危险因素,将IP-10、IL-2、MCP-1、INF-γ联用于ATB诊断中能提高结果的准确性。

关键词： 妊娠期糖尿病   社交行为   细胞因子  

摘要： 目的探究妊娠期糖尿病(GDM)对子代社交行为的影响。方法4周龄雌性SD大鼠,根据体重随机分为空白对照(CON)组和妊娠期糖尿病(GDM)组,各组孕鼠受孕后,GDM组采用高脂膳食(HFD)辅以小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg·bw)注射的方法建立疾病模型。各组孕鼠自然分娩,子代分别在分娩后第21天(PND 21,断乳)、PND 56(性成熟期)、PND 98(成年期)三个时期开展旷场实验(OFT)、高架十字迷宫实验(EPM)、新物体识别实验(NOR)和三箱社交实验(3-CST)来评估大鼠的社交行为,并在各个时期测定子代海马组织中的关键蛋白表达情况,以及白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-4、IL-6、IL-10等细胞因子浓度。结果与CON组相比:GDM雌性子代在PND 98的旷场实验自主活动得分显著降低(P<0.05);GDM雄性子代在PND 98的高架十字迷宫实验中,开放臂停留时间百分比显著降低(P<0.05)。新物体识别实验中GDM雌性子代在PND 21的新物体偏爱指数显著降低(P<0.05);三箱社交实验中,GDM雌性子代在PND 21和GDM雄性子代在PND 98的社交倾向指数显著降低(P<0.05);GDM雌雄子代在PND 98的社交新奇偏好指数也显著降低(P<0.05)。与CON组相比:GDM雌性子代在PND 21的p-ERK、p-CREB表达显著上调,BDNF表达显著下调(P<0.05),在PND 56的p-TrkB表达显著下调(P<0.05),在PND 98的p-ERK、BDNF表达显著下调(P<0.05);GDM雄性子代在PND 21的p-ERK表达显著上调(P<0.05),p-CREB表达显著下调(P<0.05),在PND 56的p-TrkB表达显著下调(P<0.05),在PND 98的p-ERK表达显著下调(P<0.05)。与CON组相比:GDM雌性子代在PND 21的海马IL-1β、IL-4、IL-6浓度显著下降(P<0.05),在PND 56的海马IL-6浓度显著升高(P<0.05),在PND 98的海马IL-4浓度显著降低,IL-10浓度显著升高(P<0.05);GDM雄性子代在PND 21的海马IL-4、IL-6、IL-10浓度显著下降(P<0.05),在PND 56的海马IL-1β、IL-10浓度显著升高(P<0.05),在PND 98的海马IL-4浓度显著降低,IL-6浓度显著升高(P<0.05)。结论GDM子代的社交行为在生命早期无明显改变,在成年期出现较为明显的社交障碍,且该种作用不具有明显的性别特异性。

摘要：

关键词： 型草鱼呼肠孤病毒   VP4蛋白   单个B细胞技术   单克隆抗体制备  

摘要： 【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-ⅡVP4基因表达载体,在真核表达系统中制备重组VP4蛋白;将纯化后的重组蛋白作为免疫原多次免疫新西兰白兔,分离出脾脏单个抗原特异性记忆B细胞;随后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增抗体可变区、恒定区基因片段,构建重组表达载体并转染HEK293F细胞进行单克隆抗体表达。最终通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光分析(IF)评估抗体的抗原结合特性。【结果】通过对分离培养的单个B细胞上清液进行筛选,利用ELISA筛选出对VP4蛋白具有较好结合能力的三种B细胞克隆(1D5、1F9、1H1),并结合IF实验验证了其能结合病毒感染组织中的VP4抗原。进一步通过抗体重组表达获得了三株抗VP4重组单克隆抗体(1D5、1F9、1H1),其ELISA效价均达1∶128000。Westernblot分析结果显示,1D5、1F9和1H1单克隆抗体能特异性识别GCRV-YX246感染的脑细胞中65.4kDa的蛋白质条带,该分子量大小与病毒VP4蛋白理论分子量一致。IF实验结果也进一步证实1D5、1F9和1H1可特异性识别GCRV-YX246毒株感染的草鱼头肾组织切片中的病毒抗原。【结论】本研究成功制备并筛选出抗GCRV-ⅡVP4重组单克隆抗体,为GCRV-Ⅱ病毒快速诊断试剂盒的研发和VP4蛋白功能研究奠定基础。

关键词： 肿瘤浸润淋巴细胞   三阴性乳腺癌   新辅助化疗   Meta分析   病理完全缓解  

摘要： 目的通过系统评价与Meta分析,探讨肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)患者新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)疗效的预测价值。方法检索The Cochrane Library、PubMed、EMbase外文数据库及中国知网(CNKI),万方数据知识服务平台(Wan Fang Data)、维普网(VIP)及参考文献中有关TILs对TNBC患者新辅助化疗疗效预测价值的文献,时间截至2024年4月。英文检索词为:“Triple Negative Breast Neoplasms”or“Triple negative breast cancer”in combination with“Lymphocytes,Tumor-Infiltrating”in combination with“Neoadjuvant Therapy”。中文检索词为:“三阴性乳腺癌”合并“肿瘤浸润淋巴细胞”合并“新辅助化疗”。用Stata16.0软件对符合要求的文献进行Meta分析,根据纳入研究的异质性,采用固定效应或随机效应模型。结局指标为病理完全缓解率(pathologic complete response,pCR)。合并的效应量比值比(odds ratio,OR)和其95%置信区间(confidence interval,CI)表示。结果此研究共纳入了19项符合纳入标准的文献,其中包含17项队列研究,2项随机对照试验,共3961例患者。9项研究的TILs截断值为10%,5项研究以20%作为TILs的截断值,4项研究以per 10%作为TILs截断值。研究结果显示:sTILs高表达的TNBC患者NAC后的p CR率明显高于sTILs低表达的TNBC患者(OR=1.67,95%CI:1.45~1.92,Z=7.22,P=0.000)。研究之间异质性存在统计学差异(I^(2)=83.1%,P=0.000)。亚组分析显示:对于不同的sTILs截断值(per10%、10%、20%),sTILs高表达组与低表达组TNBC患者NAC后的p CR存在统计学差异(OR=1.07,95%CI:1.04~1.10,P=0.000;OR=1.19,95%CI:1.13~1.25,P=0.000;OR=1.60,95%CI:1.33~1.92,P=0.000)。且各亚组间异质性存在统计学差异(P=0.000)。敏感性分析结果显示,本次Meta分析所得的合并效应值具有稳健性,合并OR值为0.16(95%CI:0.13~0.20),差异具有统计学意义。Egger's和Begg's检验数据表明(P=0.000)研究存在发表偏倚,剪补法分析结果表明异质性检验显著(Q=211.917,P<0.001),且在应用随机效应模型后,综合效应量指标结果仍有统计学意义(log OR=1.159,95%CI:1.012~1.328,P=0.034),表明Meta合并结果在此研究分析中是稳定的。结论sTILs可作为TNBC患者NAC后pCR的预测指标,sTILs阈值≥20%可作为TNBC患者NAC后疗效预测指标。

关键词： 儿童急性淋巴细胞白血病   大剂量甲氨蝶呤   浓度监测   药代动力学   药物基因组学  

摘要： 儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是儿童较常见的恶性血液病,占儿童白血病的75%~80%。近年来,随着化疗方案优化和个体化治疗发展,儿童ALL的治愈率已达到80%~90%[1]。甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)是治疗儿童ALL的重要抗代谢药物之一,通过抑制二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR),阻断嘌呤和嘧啶的合成,从而抑制DNA合成和细胞增殖[2]。

关键词： 猪圆环病毒4型(PCV4)   Cap蛋白   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap),并制备其多克隆抗体,为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得PCV4 ORF2基因序列,并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-ORF2;将经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pET-28a-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达重组Cap蛋白,利用SDS-PAGE分析诱导的重组蛋白产物。利用尿素纯化重组Cap蛋白并通过Western blotting鉴定;将纯化的重组Cap蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并进行Western blotting鉴定,应用间接ELISA法检测兔血清抗体效价。【结果】PCR扩增出大小为414 bp的PCV4 ORF 2基因片段,成功构建重组表达质粒pET-28a-ORF2。SDS-PAGE分析结果显示,诱导表达的重组Cap蛋白大小为16 ku;Western blotting结果表明制备的兔源多克隆抗体具有良好的免疫原性。间接ELISA检测显示,制备的兔血清抗体效价达1∶12800。【结论】本研究利用原核表达系统成功表达了PCV4 Cap蛋白并制备了多克隆抗体,试验结果为PCV4 Cap蛋白的深入研究以及后续开发PCV4基因工程亚单位疫苗、血清学诊断试剂等提供了物质基础。

关键词： 高邮鸭   整合素α8亚基蛋白   多克隆抗体  

摘要： 旨在制备针对高邮鸭整合素α8亚基(ITGA8)蛋白的多克隆抗体,以研究其在卵巢发育过程中的作用机制。通过生物信息学分析,筛选ITGA8的高免疫原区域,克隆高邮鸭ITGA8基因,并在原核表达系统中成功表达与纯化ITGA8蛋白免疫原。利用该免疫原免疫新西兰白兔,制备出效价达1∶102 400的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验结果验证了该抗体的高特异性。综上,本试验制备的ITGA8多克隆抗体具有良好的特异性和应用潜力,为深入探讨ITGA8在高邮鸭卵巢发育中的作用机制提供了重要的试验工具。

关键词： 肠道菌群   肿瘤免疫   结直肠癌   仙连解毒方   中医药  

摘要： 目的:探究仙连解毒方调控肠道菌群介导的CD8^(+)T细胞抗肿瘤免疫反应对结直肠癌(CRC)的影响。方法:30只雄性BALB/c小鼠分为正常组、模型组、奥沙利铂组[8×10^(-3)g·kg^(-1)·(3 d)^(-1)]、仙连解毒方高、低剂量组(12.9、6.45 g·kg^(-1)·d^(-1)),通过皮下注射CT-26细胞构建CRC移植瘤模型,分别给予相应干预。另一方面,取10只雄性BALB/c小鼠分为仙连解毒方粪菌移植组(XFMT)及模型粪菌移植组(MFMT),通过四联抗生素混合溶液清除小鼠肠道定植菌,然后通过皮下注射CT-26细胞构建伪无菌CRC移植瘤小鼠。收集上述模型组和仙连解毒方高剂量组的小鼠粪便用于制备粪菌液。XFMT组灌胃仙连解毒方高剂量组治疗后CRC小鼠的粪菌液,MFMT组灌胃模型组CRC小鼠的粪菌液。观察记录小鼠肿瘤体积变化;苏木素-伊红(HE)染色评估小鼠肿瘤组织的病理形态学改变;通过PacBio全长多样性测序分析肠道菌群的变化;流式细胞术和免疫荧光染色评估肿瘤组织中T细胞浸润变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)的含量差异。结果:与模型组比较,奥沙利铂组、仙连解毒方高、低剂量组小鼠的移植瘤体积均显著减小(P<0.01)。HE染色显示,与模型组比较,奥沙利铂组和仙连解毒方高剂量组的肿瘤组织内坏死面积增多,细胞排列变稀疏,细胞核分裂象减少。肠道菌群测序分析表明,与模型组比较,仙连解毒方高剂量组的Chao1、ACE、Shannon及Simpson指数虽有减小,但差异无统计学意义。PCoA分析显示,正常组与模型组之间的菌群群落结构明显不同,仙连解毒方组CRC小鼠的菌群结构更接近正常组(P<0.01)。与正常组比较,模型组中Akkermansia muciniphila、Muribaculum intestinale、Parabacteroides goldsteinii、Bacteroides thetaiotaomicron、Parabacteroides gordonii的丰度均明显减少(P<0.05,P<0.01),而Duncaniella muris、Prevotellamassilia sp 002933955、Prevotella sp 002933775、Kineothrix alysoides的丰度均明显增加(P<0.05,P<0.01)。同时,与模型组比较,仙连解毒方高剂量组中Akkermansia muciniphila的丰度明显增加(P<0.05),而Kineothrix alysoides的丰度则显著降低(P<0.01)。线性判别分析(LDA)>4.0结果显示Alistipes、Helicobacteraceae、Helicobacter、Helicobacter pylori BU、Bacteroides acidifaciens、Campylobacterales、Kineothrix、Kineothrix alysoides、Acetatifactor sp 900066365、Faecalimonas、Faecalimonas umbilicata、Acetatifactor、Lachnospiraceae、Clostridia、Eubacteriales、Firmicutes在模型组中富集;而Verrucomicrobia、Verrucomicrobiae、Verrucomicrobiales、Akkermansiaceae、Akkermansia、Akkermansia muciniphila、Bacteroidales、Bacteroidia、Bacteroidetes、Parabacteroides、Tannerellaceae、Muribaculum、Parabacteroides gordonii在仙连解毒方高剂量组中富集。此外,与模型组比较,仙连解毒方高剂量组肿瘤组织中CD8^(+)T细胞比例及IFN-γ含量均明显升高(P<0.01),而仙连解毒方高剂量组肿瘤组织中的CD4^(+)T细胞比例则明显降低(P<0.05)。另一方面,与MFMT比较,XFMT组的移植瘤体积明显减小(P<0.05)。HE染色显示XFMT组肿瘤组织内坏死面积增多,细胞排列变稀疏,细胞核分裂象减少。同时,与MFMT组比较,XFMT组Shannon及Simpson指数均明显降低(P<0.05,P<0.01)。PCo A分析结果提示,MFMT组与XFMT组小鼠肠道菌群结构显著不同(P<0.01)。在种水平上,与MFMT组比较,XFMT组中Akkermansiamuciniphila及Phocaeicolasartorii的丰度均显著增加(P<0.01)。线性判

关键词： USP18   ISG15   IFN-alpha   Oesophageal cancer   Apoptosis   Autophagy   Drug resistance  

摘要： Oesophageal cancer remains a poor-prognosis disease with a five-year survival of 20 %. Chemoresistance poses a significant challenge, and its mechanisms remain unclear. Our previous study found that the ISGylation network is differentially expressed in drug-sensitive and resistant oesophageal cancer cells. ISGylation involves conjugating Interferon-Stimulated Gene 15 (ISG15) to target proteins, regulated by E1, E2, and E3 enzymes, similar to ubiquitin. Ubiquitin Specific Peptidase 18 (USP18) removes ISG15 and negatively regulates the type I interferon (IFN) response. We investigated whether USP18 expression influences the chemosensitivity of two resistant oesophageal cancer cell lines. Treatment with IFN-alpha ( +/- 5-fluorouracil (5-FU) or oxaliplatin) induces ISGylation network proteins, including USP18. ISG15 conjugation is only detected after USP18 depletion with siRNA. Silencing USP18 significantly increased sensitivity to 5-FU and oxaliplatin, inducing extensive apoptosis in both cell lines previously regarded as apoptosis incompetent. USP18 depletion also elevated LC3 II expression and autophagosome formation induced by IFN-alpha ( +/- chemotherapeutic agents), indicative of autophagy. These findings demonstrate that strategies to inhibit USP18 could re-engage cell death signalling and restore sensitivity to chemo-resistant oesophageal cancer cells.