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关键词： 乙型肝炎病毒   Th1/Th2细胞因子   肝功能  

摘要： 目的 分析慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染患者外周血Th1/Th2细胞因子与肝功能的关系。方法 选取312例慢性HBV感染患者,根据HBV感染不同阶段将其分为免疫耐受期组(121例)、免疫清除期组(47例)、免疫控制期组(58例)和再活动期组(86例)。比较患者外周血Th1/Th2细胞因子[白细胞介素(IL)-2、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10]和肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、胆红素(TBIL)]水平;采用Pearson相关性分析Th1/Th2细胞因子与肝功能指标之间的关系。结果 慢性HBV患者HBV DNA载量:免疫耐受期组>免疫清除期组>再活动期组>免疫控制期组。IL-10水平:免疫控制期<再活动期<免疫耐受期=免疫清除期(P<0.05);IL-2、IFN-γ、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-10、ALT、AST和TBIL水平比较:免疫控制期组<免疫耐受期组<再活动期组<免疫清除期组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,慢性HBV感染者IL-2、IFN-γ、IL-2/IL-10和IFN-γ/IL-10水平与ALT、AST、TBIL水平均呈正相关,IL-10与ALT、AST、TBIL水平均呈负相关(P<0.05)。结论 HBV感染患者外周血Th1/Th2细胞因子与肝功能具有显著相关性,参与HBV感染的整个过程。

关键词： 早发冠状动脉粥样硬化性心脏病   载脂蛋白E   基因多态性   中性粒细胞   淋巴细胞   红细胞分布宽度  

摘要： 目的探讨载脂蛋白E(Apoe)基因多态性、外周血中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)、红细胞分布宽度(RDW)与早发冠状动脉粥样硬化性心脏病(以下简称“冠心病”)发生及病变程度的关系。方法采用前瞻性研究,选择浙江省杭州市中医院2021年4月~2024年4月收治的早发冠心病患者102例(病例组),另选择同期非冠心病患者105例作为对照组,对比两组外周血NLR、RDW、Apoe基因多态性,并比较不同冠脉狭窄程度上述指标的差异。结果(1)两组保护型Apoe基因、风险型Apoe基因型构成比差异均无统计学意义(P>0.05);大众型E3/E3型Apoe基因型病例组占比显著高于对照组(P<0.01),E2/E4型Apoe基因型占比显著低于对照组(P<0.01);不同狭窄程度早发冠心病患者中,保护型Apoe基因型、风险型Apoe基因型构成比在轻、中、重度冠脉狭窄患者中差异均无统计学意义(P>0.05);大众型poe基因型E3/E3构成比,中、重度冠脉狭窄的早发冠心病患者显著高于轻度患者(P<0.05)。(2)病例组外周血NEU、NLR、RDW测定值均显著高于对照组(P<0.01),Lym水平差异无统计学意义(P>0.05);不同狭窄程度早发冠心病患者中的早发冠心病患者其外周血NEU、NLR、RDW水平中、重度患者显著高于轻度冠脉狭窄患者(P<0.05),重度冠脉狭窄患者显著高于中度冠脉狭窄患者(P<0.05);三组间Lym水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论早发冠心病患者外周血NLR、RDW水平会显著增高,大众型E3/E3型Apoe基因型占比较高,且与冠脉病变严重程度有一定关系。

关键词： 表面等离子体共振   肠道病毒71型   抗原含量  

摘要： 目的应用表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗抗原含量,并对该方法进行验证。方法将兔抗EV71抗体偶联到SPR芯片表面,监测EV71抗原与抗体结合后SPR芯片表面信号的变化。使用EV71国家抗原标准品建立SPR检测EV71抗原的新方法,验证该方法的线性、专属性、精密度和准确度。取6批次疫苗原液进行抗原检测,比较SPR与ELISA 2种检测方法的差异。结果兔抗EV71抗体对EV71具有良好的亲和能力,偶联水平为8037响应单位。EV71国家抗原标准品的抗原含量在12.5~200.0 U/mL时,与SPR仪响应值的变化量呈良好的线性关系,决定系数≥0.9900。芯片与Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗、PBS均无交叉反应。重复性和中间精密度的相对标准偏差分别为1.52%和1.54%。准确度的回收率在91.70%~103.85%。SPR技术和ELISA检测不同批次疫苗原液抗原含量,虽差异有统计学意义(Z=-2.201,P=0.028),但2种方法检测的相对标准偏差<15%,且结果趋势一致。结论建立并验证了应用SPR技术检测EV71抗原含量的新方法,该法线性、专属性、精密度、准确度良好,可用于EV71灭活疫苗抗原含量的快速检测。

关键词： 全身炎性反应综合征   诊断   中性粒细胞与淋巴细胞比值   血小板与淋巴细胞比值   预测  

摘要： 目的探究中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合血小板与淋巴细胞比值(PLR)对儿童全身炎性反应综合征(SIRS)早期预测价值。方法回顾性选择2021年1月至2023年2月合肥市第八人民医院诊治的136例SIRS患儿(SIRS组)和同期120例健康儿童(对照组)为研究对象。比较两组炎性反应指标和外周血NLR、PLR水平,采用Pearson检验分析SIRS患儿NLR、PLR与其他炎性反应指标的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析NLR、PLR单独及联合检测对SIRS的预测价值。结果SIRS组血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和白细胞介素-6(IL-6)水平高于对照组[(1.56±0.41)μg/L比(0.57±0.15)μg/L、(56.04±17.71)mg/L比(4.50±1.38)mg/L、(8.54±1.95)ng/L比(0.95±0.21)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05)。SIRS组外周血NLR、PLR水平高于对照组(4.08±1.32比2.01±0.58、269.15±80.09比194.01±62.41),差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验结果显示,SIRS患儿外周血NLR、PLR水平与血清PCT、CRP和IL-6水平呈正相关(r=0.245、0.540、0.492、0.282、0.365、0.721,P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,NLR、PLR联合检测预测SIRS的曲线下面积为0.747(95%CI 0.650~0.828),高于任一单项指标。结论外周血NLR、PLR水平与SIRS患儿发病相关,两者联合检测对儿童SIRS早期诊断具有一定的临床价值。

关键词： 慢性乙型肝炎   白细胞介素21   调节性T细胞   叉头状蛋白3   信号转导及转录激活因子3  

摘要： 为探究IL-21通过调节外周血Treg比例和关键蛋白的表达在乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)发病机制中的作用,入组45例HBeAg阳性CHB患者和15例健康对照(healthy control,HC),分别检测乙型肝炎标志物、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、HBV DNA载量。分离CHB患者和HC的PBMC,分为IL-21处理组与未处理组,采用流式细胞术检测Treg比例,qRT-PCR检测叉头状蛋白3(forkhead box protein 3,Foxp3)、IL-10、TGF-βmRNA的表达水平,ELISA检测培养上清液中IL-10、TGF-β蛋白的表达水平,Western blotting检测STAT3、磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)表达。结果显示,IL-21处理前,CHB组的Treg比例、Foxp3 mRNA、IL-10 mRNA、IL-10蛋白表达水平均较HC组显著升高(P<0.01);TGF-βmRNA和TGF-β蛋白表达水平均较HC组显著降低(P<0.001)。经IL-21处理后,CHB组和HC组的Treg比例、Foxp3 mRNA、TGF-βmRNA、TGF-β蛋白的表达水平均较处理前显著降低(P<0.05);IL-10 mRNA、IL-10蛋白表达水平均显著高于处理前(P<0.05)。经IL-21处理后,HC组、CHB组的STAT3、p-STAT3表达均显著高于处理前(P<0.05)。该研究提示,IL-21可能通过激活STAT3信号通路抑制Treg增殖和TGF-β分泌,使Treg数量降低和功能受损,减弱其对相关效应细胞的抑制作用,进而参与CHB的发病过程。

关键词： 柯萨奇病毒B3   细胞毒性T细胞   HLA-A*02:01   交叉免疫   疫苗设计  

摘要： 目的:筛选柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)中可被细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)高效识别的抗原表位,为开发针对CVB3及其他肠道病毒的广谱疫苗提供理论依据。方法:基于免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)及NetMHCpan EL 4.1算法预测CVB3的CTL候选表位;针对HLA-A*02:01限制性表位,通过AlphaFold 2.3.2模拟其与人类白细胞抗原的复合物结构,分析表位保守性及交叉免疫潜力;利用T2细胞结合实验验证候选表位与HLA-A*02:01的亲和力。结果:共鉴定71个潜在CTL表位,筛选出6个HLA-A*02:01高亲和力表位(评分>0.9)。体外实验证实其中5个表位(CTL1~5)可显著诱导HLA-A*02:01表达(P<0.05),而CTL6无结合活性。保守性分析显示,CTL1~6表位在柯萨奇病毒、埃可病毒及肠道病毒中高度保守,提示其交叉保护潜力。结论:鉴定了CVB3的HLA-A*02:01限制性CTL表位,为开发针对CVB3及其他肠道病毒的广谱疫苗提供了关键靶点。

关键词： 嵌合抗原受体   调节性T细胞   自身免疫性疾病   Treg细胞  

摘要： 调节性T(Treg)细胞在维持机体免疫耐受中起到重要作用,其数量减少或功能缺失可能导致自身免疫性疾病(AIDs)。在临床试验中,过继性Treg细胞疗法被证明能在一定程度上缓解AIDs。嵌合抗原受体(CAR)技术的发展促使研究将Treg细胞拓展至过继性Treg细胞疗法,从而产生CAR-Treg细胞,为AIDs提供了新颖的治疗策略。主要综述了CAR-Treg细胞的结构、功能、制备方法和作用机制及其在7种常见AIDs中的应用,并对其未来研究方向进行展望。

关键词： 短期PM_(2.5)暴露   定组研究   MGMT基因   DNA甲基化   特异性CpG位点  

摘要： 目的:筛查健康成人短期PM_(2.5)暴露后O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)特异CpG位点甲基化修饰改变及其生物学意义。方法:在PM_(2.5)高污染地区河北石家庄市河北医科大学招募30名健康男性志愿者进行为期35 d的定组研究,基于个体时间-活动模式评估个体每日PM_(2.5)外暴露水平;分别在PM_(2.5)高、低暴露时间点下采集志愿者外周血,分离淋巴细胞提取DNA,采用焦磷酸测序法检测MGMT甲基化水平。同时定量分析尿1-羟基芘(1-OHP)、8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-OHd G)水平和血浆促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,评估PM_(2.5)短期暴露对DNA氧化损伤和炎症反应的影响。结果:PM_(2.5)高暴露时间点前3天的环境PM_(2.5)平均浓度(110.09μg/m^(3))是低暴露时间点(47.37μg/m^(3))的2.32倍,PM_(2.5)内暴露水平指标尿1-OHP浓度是低暴露时间点的1.73倍(P<0.01),尿8-OHd G和血浆TNF-α浓度分别是低暴露下的1.18倍和1.66倍(均为P<0.01)。PM_(2.5)高暴露时间点机体DNA氧化损伤和炎症反应增加的同时,MGMT Cp G位点1、3、4、5、6、10的甲基化率分别下降37.31%、42.60%、19.69%、15.29%、34.95%和32.12%(均为P<0.05);其中Cp G位点1、3和10的低甲基化修饰不仅与PM_(2.5)内暴露水平1-OHP呈负相关(β≥-0.40,P<0.05),还与DNA氧化损伤(β≥-0.46,P<0.05)和炎症反应(β≥-0.26,P<0.05)呈负相关。这些Cp G热点甲基化修饰改变均与个体PM_(2.5)移动平均浓度呈负相关(β≥-0.53,P<0.05)。结论:MGMT基因低甲基化修饰Cp G热点1、3和10,与PM_(2.5)内、外暴露和生物学效应均存在相关性,可作为人群PM_(2.5)暴露的潜在生物标志物。

关键词： 杂交瘤   单克隆抗体   癌胚抗原细胞黏附分子5   抗体偶联药物  

摘要： 目的 制备靶向人癌胚抗原相关细胞黏附分子5(carcinoembryonic antigen cell adhesion molecule 5,CEACAM5)单克隆抗体及其抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),并对其生物学活性进行初步评价。方法 用人CEACAM5与hFc融合蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,采用电融合技术制备杂交瘤,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过RACE PCR法获得鼠源抗体的可变区序列,并构建嵌合抗体,采用ELISA法和流式细胞术对嵌合抗体的特性进行评价,报告基因法对嵌合抗体的抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)活性进行检测。利用糖基偶联技术制备ADC,并对其活性进行评价。结果 利用杂交瘤技术筛选获得1株具有特异性结合活性的杂交瘤细胞株,命名为mAb186;成功获得抗体可变区序列,并构建了嵌合抗体ch186,其特异性结合人CEACAM5的B3结构域,未检测到对靶细胞的ADCC活性。成功制备了偶联甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E,MMAE)小分子的ADC,其对靶细胞具有杀伤作用,且具有一定的剂量效应。结论 成功制备了特异性结合人CEACAM5的单克隆抗体,并对嵌合抗体和ADC的结合活性及细胞杀伤活性进行了评价。

关键词： 非结核分枝杆菌   海分枝杆菌   结核分枝杆菌   交叉抗原   结核疫苗  

摘要： 目的初步评价海分枝杆菌(Mycobacterium marinum,MM)全菌体蛋白抗原免疫性能,为研制新型候选结核疫苗提供基础科学依据。方法常规培养MM 95014和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)H37Rv,收集菌体,灭活后,以低温超声破碎方法提取全菌体蛋白抗原,与DDA/Poly:IC佐剂混合后,皮下多点方式免疫BALB/c小鼠3次,每次50μg/只·次,间隔10 d。每次免疫前均收集血样,末次免疫10 d后采取血样和脾脏,以酶联免疫吸附技术检测血清抗体效价和细胞因子水平;采用体外结核分枝杆菌生长抑制试验(MGIA)检测MM全菌体蛋白免疫组小鼠骨髓源巨噬细胞体外抑制MTB生长的能力;应用MTB全菌体蛋白质组芯片分析MM全菌体蛋白免疫小鼠体内血清和MTB蛋白的相互作用。结果与佐剂对照组相比,MM全菌体蛋白抗原诱导小鼠产生较高水平的Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-12、TNF-α),结果差异具有统计学意义(均P<0.05);MM免疫组诱导的IgG抗体滴度达到1∶608874,IgM抗体滴度达到1∶304437;MGIA结果显示,MM免疫组具有明显体外抑制MTB生长的能力(均P<0.05);MTB蛋白质组芯片结果显示,IgG抗体中有226个蛋白交叉反应,IgM抗体中有324个MTB交叉蛋白。结论MM和MTB存在交叉共同抗原,MM全菌体蛋白抗原诱导小鼠产生较高水平的细胞免疫和体液免疫应答,并表现较强的体外抑制MTB生长的能力,其具有作为结核新型候选疫苗的潜在价值。