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关键词： 植物乳植杆菌LP-315   益生菌   炎症性肠病   Th1/Th2/Th17   细胞因子  

摘要： 目的探讨植物乳植杆菌LP-315对小鼠炎症性肠病(IBD)模型机体免疫调控方面的干预效果,解析该菌株的益生特性和功能机制。方法6周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠24只,体重(20±2)g,随机分为NC组、DSS组和LP组,每组8只。NC组和DSS组小鼠每日灌胃200μL生理盐水,LP组小鼠灌胃同体积的植物乳植杆菌LP-315溶液。NC组小鼠饮用无菌水,DSS组和LP组小鼠饮用2.3%DSS溶液7 d,7 d后更换为0.8%DSS溶液饮用至第21天构建IBD模型。小鼠干预期间进行DAI评分,处死后分别采用HE染色、PAS染色及免疫荧光染色标记结肠病理切片、杯状细胞以及紧密连接蛋白Occludin、ZO-1;采用流式细胞术分析脾脏Th1/Th2/Th17比例;采用ELISA法测定结肠组织IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A及MPO水平。结果与DSS组相比,LP组小鼠第21天DAI评分和组织病理评分显著降低(F=32.572、30.861,P=0.002、0.019),Occludin表达增加(F=38.117,P=0.007),脾脏CD4^(+)T细胞亚群Th1/Th2比值显著降低(F=14.315,P<0.001),结肠组织IFN-γ水平降低和IL-4水平显著升高(F=7.196、7.294,P=0.024、0.017)。免疫标志物与病理表型相关性分析显示,促炎相关免疫标志物与病理参数多呈正相关,抑炎相关免疫标志物则相反。结论植物乳植杆菌LP-315对DSS诱导的小鼠IBD模型显示了积极作用,可能与植物乳植杆菌LP-315调控机体CD4^(+)T细胞亚群和平衡细胞因子环境有关。

关键词： A型肉毒神经毒素   杂交瘤   单克隆抗体   酶联免疫吸附测定  

摘要： 目的筛选高亲和力的抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,建立A型肉毒神经毒素快速检测方法。方法以A型肉毒神经毒素类毒素为免疫原免疫小鼠获得单克隆抗体,对所得单克隆抗体进行效价检测、类和亚类鉴定以及特异性相关检测。利用交叉搭配试验筛选最佳标记抗体,并确定兔多抗的包被浓度和标记抗体的稀释倍数,建立夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对该法的专属性、精密度、准确度和线性进行初步研究。结果本研究共获得6株单克隆抗体,9C_(2)和3F6的效价最高;5D3、9C_(2)、1B5和6D6均为IgG1类抗体且显示A型特异性;9C_(2)、1B5和7G11对A型肉毒神经毒素的型特异阻断能力强。以5μg/mL兔多抗为包被抗体、1∶2000稀释的9C_(2)为酶标二抗建立方法,A型肉毒神经毒素蛋白浓度在6~100 ng/mL范围内呈现线性关系(R=0.995),重复性CV值为4.4%;中间精密度CV值为2.6%;回收率均在85%~118%之间。结论初步建立了快速检测A型肉毒神经毒素的夹心ELISA方法。

关键词： 新辅助化疗   Ⅲ期中低位直肠癌   肿瘤细胞增殖能力   CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞  

摘要： 目的:探讨新辅助化疗对Ⅲ期中低位直肠癌患者肿瘤细胞增殖能力及CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞的影响。方法:选取2020年1月—2023年2月南阳市第一人民医院收治的80例Ⅲ期中低位直肠癌患者作为研究对象,根据治疗方案的不同将其分为对照组和观察组,每组各40例。对照组患者接受手术治疗,观察组患者在对照组的基础上接受新辅助化疗。比较两组患者手术效果,比较两组患者治疗前后肿瘤细胞增殖指数及T淋巴细胞(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平。结果:两组患者手术切除率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.213,P>0.05);观察组患者保肛率、术后病理学完全缓解率均高于对照组患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=5.000、4.943,P<0.05);治疗后,两组患者肿瘤细胞增殖指数低于治疗前,且观察组患者低于对照组患者,差异有统计学意义(t=9.268,P<0.05);治疗后,两组患者CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于治疗前,且观察组患者均高于对照组患者,两组患者CD8^(+)T水平低于治疗前,且观察组患者低于对照组患者,差异均有统计学意义(t=5.029、13.717、10.256,P<0.05)。结论:新辅助化疗对Ⅲ期中低位直肠癌患者的治疗效果显著,能够有效抑制其肿瘤细胞增殖,提高其免疫功能。

关键词： 地中海贫血   细胞因子释放综合征   单倍体造血干细胞移植   儿童  

摘要： 目的探讨重型地中海贫(thalassemia major,TM)患儿单倍体造血干细胞移植(haploidentical hematopoietic stem cell transplantation,haplo-HSCT)后细胞因子释放综合征(cytokine release syndrome,CRS)的发生特点及预后。方法回顾分析2019年1月—2021年12月在深圳市儿童医院血液肿瘤科采用haplo-HSCT的280例TM患儿,根据CRS标准分为CRS<3级组(260例)和CRS≥3级组(20例),分析TM患儿haplo-HSCT后CRS发生特点及预后。结果两组患儿在中性粒细胞植入时间、CRS临床表现、移植后4 d内糖皮质激素使用率之间的差异有统计学意义(P分别为0.012、0.040、<0.001)。CRS<3级组移植后3个月内急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)发生率为9.6%,CRS≥3级组移植后3个月内未发生aGVHD,但两组移植后3个月内aGVHD发生率差异无统计学意义(P=0.146)。两组患儿haplo-HSCT后3个月内均未发生移植相关死亡。结论CRS≥3级组患儿haplo-HSCT后中性粒细胞植入时间早、CRS临床表现重且多样,移植后4 d内糖皮质激素使用率高。CRS≥3级患儿移植后早期使用小剂量糖皮质激素可减轻CRS反应和减少aGVHD的发生,使患儿受益。haplo-HSCT后CRS对预后无显著影响。

关键词： apoptosis   atherosclerosis   high-density lipoproteins   oxidized low-density lipoproteins  

摘要： Abstract: Apoptosis of various cells, primarily macrophages, in atherosclerotic arterial lesions is considered to be an important element in the pathogenesis of this disease. It is assumed that one of the main inducers of cell death in the intima of the affected arteries are oxidized low-density lipoproteins (oxLDLs). In this work, we studied the influence of high-density lipoproteins (HDLs), oxLDLs, and the TNF-α factor in different concentrations on macrophage-like cells obtained from mononuclear cells from the peripheral blood of healthy donors. It has been established that oxLDLs in small concentrations can cause the death of human macrophage-like cells after a short-term effect, which indicates their high cytotoxicity. HDLs in physiological concentrations completely block the processes of apoptosis caused by oxLDLs. It has been shown that HDLs are capable not only of protecting cells from oxLDLs, but also of significantly reducing the number of dead cells when exposed to TNF-α. The results obtained suggest that HDLs are capable of protecting cells from a wide range of cytotoxic agents. © Pleiades Publishing, Ltd. 2024. ISSN 1990-519X, Cell and Tissue Biology, 2024, Vol. 18, No. 6, pp. 671–679. Pleiades Publishing, Ltd., 2024.

关键词： 维持性血液透析   中性粒细胞/淋巴细胞比值   C反应蛋白/白蛋白比值   全因死亡   队列研究  

摘要： 背景已有研究表明中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)对维持性血液透析(MHD)患者全因死亡有较好的预测价值,少有研究探讨C反应蛋白/白蛋白比值(CAR)对MHD患者全因死亡的预测及NLR联合CAR能否增强对MHD患者全因死亡的预测价值。目的探讨NLR联合CAR对MHD患者全因死亡的预测价值,为提高MHD患者生存质量提供依据。方法2017年1月选取175例在海南省人民医院血液净化中心治疗的MHD患者为研究对象,收集其基线人口学资料及实验室检查结果。随访终点事件为全因死亡,随访截止日期为2021-12-31。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价NLR、CAR及NLR联合CAR在MHD患者全因死亡中的预测价值,Kaplan-Meier生存曲线比较不同的NLR及CAR患者随访过程中累积生存率的差异;采用Cox比例风险回归模型分析MHD患者5年全因死亡的独立危险因素。结果ROC曲线分析结果显示,NLR预测MHD患者全因死亡的ROC曲线下面积(AUC)为0.743(95%CI=0.669~0.817,P<0.001);CAR预测MHD患者全因死亡的AUC为0.710(95%CI=0.627~0.794,P<0.001);NLR联合CAR预测MHD患者全因死亡的AUC为0.799(95%CI=0.732~0.867,P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,至随访终点,基线NLR>4.93的患者随访期间累积生存率低于基线NLR≤4.93的患者(χ^(2)=32.753,P<0.001)。基线CAR>0.795的患者随访期间累积生存率低于基线CAR≤0.795的患者(χ^(2)=38.091,P<0.001)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,NLR>4.93(HR=2.071,95%CI=1.226~3.499)、CAR>0.795(HR=1.903,95%CI=1.155~3.136)是MHD患者5年全因死亡的独立危险因素(P<0.05)。透析龄增加(HR=0.984,95%CI=0.976~0.992)及铁蛋白升高(HR=0.998,95%CI=0.998~0.999)、25-羟维生素D[25-(OH)D]升高(HR=0.964,95%CI=0.941~0.987)、三酰甘油(TG)升高(HR=0.695,95%CI=0.506~0.955)是MHD患者5年全因死亡的保护因素(P<0.05)。结论NLR、CAR对MHD患者全因死亡有预测价值,两者联合的预测价值更高;同时NLR及CAR升高均是MHD患者5年全因死亡的独立危险因素。

关键词： 子痫前期   中性粒细胞/淋巴细胞   妊娠中期   疾病预测  

摘要： 目的探究妊娠中期中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)在轻度子痫前期、重度子痫前期及健康孕妇之间的差异关系,以及NLR在子痫前期筛查中潜在的预测价值。方法选取了2018年1月1日至2021年1月30日在济宁医学院附属医院就诊的所有孕妇1115例,其中轻度子痫前期395例,重度子痫前期339例,正常妊娠孕妇381例。同时,收集患者年龄、BMI、外周血NLR、收缩压及舒张压等资料,探究子痫前期与NLR的关系。结果轻/重度子痫前期组外周血中NLR数值均高于正常妊娠组,并且重度子痫前期组NLR高于轻度子痫前期组(P<0.001),在调整BMI、年龄、血压等变量因素后,发现NLR仍是子痫前期的独立危险因素(OR=2.814,95%CI=2.130~3.717)。结论妊娠中期外周血的NLR增高是子痫前期的独立危险因素。因此,NLR对子痫前期的发生可能具有预测作用。

关键词： 远距离运输   应激   西门塔尔牛   临床指标   细胞因子   肠道菌群  

摘要： 【目的】旨在探究远距离运输对西门塔尔牛主要临床和血液相关指标及肠道菌群的影响。【方法】试验选取70头8月龄临床检查健康、体况相近的西门塔尔牛,采用上下层有篷运输车,密度约为1.04 m2/头,从内蒙古自治区通辽市运往四川省泸定县,随机选取上层12头为研究对象并标记。运输装车当天和到达目的地以及到达后第2~7天分别标记为Tb、Ta和D2~D7。测定并记录Tb至D7主要临床指标,统计发病率和死亡率。分别采用ELISA法和16S rDNA检测牛Tb和Ta血清炎性、免疫、氧化、应激等因子水平和肠道粪便菌群变化。【结果】远距离运输后较运输前,西门塔尔牛脱水程度、体温、心率、呼吸频率和发病率均极显著升高(P<0.01),而体重和单次反刍咀嚼次数极显著下降(P<0.01),主要以呼吸道疾病(13头,发病率为19%)和消化道疾病(11头,发病率为16%)为主;血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10和CRP水平极显著下降(P<0.01),而Ig A、IgG和CAT水平极显著上升(P<0.01),IL-6和SAA水平均显著下降(P<0.05),而IgM水平显著上升(P<0.05);肠道菌群在门水平上,拟杆菌门、Spirochaetota菌门丰度显著下降(P<0.05),放线菌门(Actinobacteria)、蓝细菌门(Cyanobacteria)丰度显著上升(P<0.05),脱硫弧菌门(Desulfobacterota)丰度极显著上升(P<0.01)。在属水平上,Rikenellaceae_RC9_gut_group、Alistipes、Monoglobus和Prevotellaceae_UCG-004丰度显著下降(P<0.05),NK4A214_group丰度显著上升(P<0.05)。【结论】远距离运输易造成西门塔尔牛严重脱水,体重下降,体温、心率和呼吸频率显著上升,并影响反刍,导致呼吸道和消化道疾病发病率升高;引起免疫力降低,发生炎症反应和氧化应激;肠道菌群多样性和丰富度显著下降,且有益菌丰度显著下降,而有害菌丰度显著上升。

关键词： 白细胞介素-1β   白细胞介素-1受体拮抗剂   冻结肩  

摘要： [目的]探索冻结肩(frozen shoulder,FS)与IL-1β和白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的基因多态性的相关性。[方法]选取2021年1月—2023年8月在青岛市胶州中心医院就诊的225例原发性或有该病病史的患者为冻结肩组,另275名正常人为正常组。通过聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法检测两组IL-1β基因位点的基因型,分析其单倍体与冻结肩患病风险率之间的相关性,并分析IL-1受体拮抗剂等位基因2(interleukin-l receptor antagonist allele*2,IL-1RN)不同基因型与冻结肩患病易感性的相关性。[结果]与野生型CC(未发生基因突变的基因型)相比,杂合子CT基因型(发生基因突变)的患者发生FS的风险显著升高(OR=1.952,95%CI 1.142~3.320,P=0.014),同时,IL-1B+3954位点的C基因可能是保护基因,IL-1B+3954位点具有C基因发生FS的风险显著降低(OR=0.577,95%CI 0.309~0.987,P=0.049)。IL-1B-31C/T位点CT基因型发生FS的风险显著高于TT型(OR=1.791,95%CI 1.171~2.742,P=0.004)。单倍体型分析发现,与最常见的CCT单体型相比较,单体型TTT与FS高风险发病率具有更强的相关性(OR=7.100,95%CI 1.492~33.870,P=0.014)。经非条件逻辑回归分析发现,IL-1RN(VNTR)的4种基因在两组之间的分布差异无统计学意义(P=0.521),IL-1RN基因变异型组(1/2和2/2)发生FS的风险是非变异组(1/1、1/3、1/4)的1.895倍,但结果差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]在冻结肩组中IL-1β基因rs1143627与rs1143634位点的CT基因型与冻结肩的易感性相关;由3个基因位点形成的单倍体型TTT可能会增加罹患冻结肩的风险,在IL-1RN中未发现冻结肩的易感基因型。

关键词： 淋巴细胞活化基因3(LAG3)   真核细胞抗原   活体骨髓瘤细胞   杂交瘤   单克隆抗体(mAb)  

摘要： 目的制备小鼠抗人淋巴细胞活化基因3(LAG3)单克隆抗体(mAb)并进行抗体免疫学鉴定。方法以构建的稳定表达人LAG3胞外区和跨膜区的小鼠3T3单克隆细胞(LAG3-mLumin-3T3)免疫BALB/c小鼠,流式细胞术和免疫荧光法检测小鼠血清中是否含有抗人LAG3抗体。用SP2/0细胞皮下注射BALB/c小鼠形成实体骨髓瘤,体外分离的小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合建立杂交瘤,用有限细胞稀释法分离出杂交瘤单克隆细胞。收集杂交瘤单克隆细胞培养液,流式细胞术检测细胞分泌LAG3 mAb。构建的表达LAG3胞外区4个独立结构域的3T3细胞株(LAG3-胞外结构域1/-2/-3/-4-3T3)用于流式细胞术区分mAb结合抗原表位。流式细胞术检测LAG3 mAb与活化状态下的人外周血单核细胞(PBMC)共同培养前后细胞LAG3表达。结果重组真核细胞抗原免疫后小鼠能产生特异性抗人LAG3抗体。通过杂交瘤融合获得的杂交瘤单克隆细胞能够分泌小鼠抗人LAG3 mAb;不同单克隆细胞株分泌的mAb识别的LAG3抗原结构域存在差异。结论成功制备小鼠抗人LAG3 mAb,不同杂交瘤细胞克隆分泌的mAb识别表位不同,为进一步研究LAG3生物学特性及肿瘤治疗阻断抗体的研发奠定基础。