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关键词： HSV-2 gD2蛋白   慢病毒   多克隆抗体   稳转株  

摘要： 目的采用慢病毒介导293T细胞表达单纯疱疹病毒Ⅱ型包膜糖蛋白2(HSV-2 gD2),免疫新西兰兔制备高效价的gD2多克隆抗体,为HSV-2病毒的检测及其基础研究提供便利。方法将密码子优化的HSV-2病毒G Strain US6基因(MH790667.1)序列连接至慢病毒载体pLenti-CMV-gD2-6His中,重组慢病毒感染正常293T细胞并筛选出稳转株,从培养上清中收获分泌型gD2蛋白后采用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,与弗氏佐剂1∶1混合乳化后皮下注射免疫新西兰大白兔,加强免疫1次,ELISA检测兔血清中gD2特异性抗体(纯化抗原包板)的效价,Western blot检测载体病毒中gD2抗原蛋白的表达。结果构建的慢病毒重组质粒序列与理论设计一致,稳转株表达的gD2-6His蛋白相对分子质量约为37000,电泳条带位于40000~55000(糖基化修饰),二次免疫后兔血清中gD2特异性抗体滴度为1∶204800,兔血清经1∶500稀释后作为一抗孵育可检测到疫苗病毒中gD2抗原蛋白的表达,条带特异。结论成功表达高纯度分泌型gD2蛋白,并制备了高效价的兔多克隆抗体,便于后续HSV-2疫苗的研发。

关键词： 咳喘镇定汤   小儿咳嗽变异性哮喘   IL-23/Th17轴   小气道功能   疗效   咳嗽   T淋巴亚群  

摘要： 目的观察咳喘镇定汤在小儿咳嗽变异性哮喘治疗中的作用及对患儿嗜酸性粒细胞计数(eosinophil count,EOS)、白介素-23(interleukin-23,IL-23)/辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)轴的影响。方法选取2020年8月—2023年2月收治的小儿咳嗽变异性哮喘患儿104例,将患儿采用简单随机法分为两组。常规组给予止咳化痰、抗炎、平喘等常规治疗,咳喘镇定汤组在常规组基础上采用咳喘镇定汤辅助治疗。检测组间及组内T淋巴亚群、EOS、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)、Clara细胞分泌蛋白16(clara cell secreted protein 16,CC-16)、嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)、IL-23/Th17轴、小气道功能水平。评估组间及组内咳嗽症状评分、中医证候评分差异。统计组间疗效和不良反应。结果治疗前T淋巴亚群、CC-16、Eotaxin等差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后CD_(8)^(+)、EOS、MIP-1α、Eotaxin降低,CC-16、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)升高,咳喘镇定汤组治疗后CD_(8)^(+)、EOS、MIP-1α、Eotaxin低于常规组,CC-16、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)高于常规组(P<0.05)。治疗前比较IL-23/Th17轴差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后IL-23、Th17、白介素-17(interleukin-17,IL-17)降低,咳喘镇定汤组治疗后IL-23/Th17轴低于常规组(P<0.05)。治疗前相关评分无差异(P>0.05)。两组治疗后咳嗽症状评分、中医证候评分降低,咳喘镇定汤组治疗后咳嗽症状评分、中医症候评分低于常规组(P<0.05)。治疗前小气道功能无差异(P>0.05)。两组治疗后小气道功能升高,咳喘镇定汤组治疗后小气道功能高于常规组(P<0.05)。咳喘镇定汤组治愈13例,显效和有效共35例,总有效率92.31%高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论咳喘镇定汤可通过调控小儿咳嗽变异性哮喘患儿IL-23/Th17轴,改善T淋巴亚群和小气道功能,减轻咳嗽症状,提高疗效。

关键词： 益精利浊法   慢性非细菌性前列腺炎   TNF-α   IL-8   NIH-CPSI评分  

摘要： 目的观察益精利浊法治疗慢性非细菌性前列腺炎(chronic non-bacterial prostatitis,CNP)临床效果及对前列腺液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-ɑ,TNF-ɑ)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等的影响。方法选取2023年1月—2023年12月于该院进行治疗的CNP患者130例,随机分成对照组与治疗组,对照组采用常规西医治疗,治疗组在对照组的基础上增加益精利浊法治疗,观察比较两组患者疗效、前列腺液中炎症因子水平、美国国立卫生研究院慢性前列腺炎积分指数(National Institute of Health-Chronic Prostatitis Symptom Index,NIH-CPSI)评分以及不良反应发生情况。结果治疗组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组NIH-CPSI评分均有显著下降,治疗组更低(P<0.05)。治疗后两组IL-8、IL-1β、TNF-ɑ水平较治疗前有所下降,且治疗组更低(P<0.05)。治疗组与对照组不良反应总发生率分别为12.31%(8/65)与10.77%(7/65),差异无统计学意义(P>0.05)。结论益精利浊法治疗CNP患者疗效较好,能明显改善NIH-CPSI评分,调节炎症因子水平,且安全性较高。

关键词： 维生素B_1   婴幼儿配方乳粉   单克隆抗体   荧光试纸条  

摘要： 【目的】基于维生素B_(1)单克隆抗体建立荧光免疫层析法,以检测婴幼儿配方乳粉中的维生素B_(1)。【方法】对维生素B_(1)单克隆抗体的性能进行评估,在此基础上,开发具有高灵敏度的荧光免疫层析试纸条。【结果】维生素B_(1)单克隆抗体具有高灵敏度、高亲和力和高特异性,荧光免疫层析试纸条的视觉检测限(vLOD)为10μg/kg,消线值为200μg/kg,计算检测限(cLOD)为2.056μg/kg。此外,该方法的回收率为97.3%~115.4%,与液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测结果一致,且相对标准偏差(RSD)小于10%,具有较好的准确度和稳定性。【结论】该荧光微球免疫分析法可用于实际婴幼儿配方乳粉样本的检测,并且检测速度快,不需要大型仪器设备,便于携带,对于大量样本的快速筛检具有重要意义。

关键词： Renal fibrosis   Sodium butyrate (NaB)   M2 macrophage polarization   IL-4/STAT6 signaling pathway   LKB1  

摘要： Background: Renal fibrosis is a critical pathological characteristic of chronic kidney disease, and current anti- fibrotic therapies has limited efficacy. Sodium butyrate (NaB) has been shown to be highly effective in mitigating bleomycin-induced pulmonary fibrosis;however, its specific impact on renal fibrosis and the underlying mechanisms remain unclear. This study aims to elucidate the role and mechanism of NaB in renal fibrosis by using a mouse model of renal fibrosis induced through Unilateral Ureteral Obstruction (UUO) and folic acid (FA) administration. Results: NaB significantly decreased the distribution of collagen fibers in renal tissues and mitigated fibrosis in a dose-dependent manner. Further analysis indicated that NaB inhibited M2 macrophage polarization in the renal tissues of UUO model mice by blocking the phosphorylation of STAT6, hence reducing renal fibrosis. Additionally, in vitro experiments demonstrated that NaB inhibited fibroblast activation induced by M2 macrophages. Mechanistic studies revealed that NaB attenuates fibroblast activation and M2 macrophage polarization by upregulating LKB1 and inhibiting the activation of the STAT6 signaling pathway. Conclusion: NaB may exert its effects by inhibiting the activation of the IL-4/STAT6 signaling pathway through the upregulation of LKB1, which suppress the polarization of M2 macrophages and consequently reduce renal fibrosis. These findings establish a theoretical foundation for NaB as a novel drug candidate for renal fibrosis and indicate its potential applicability in clinical treatments for this condition.

关键词： 铜绿假单胞菌   中性粒细胞胞外诱捕网   树突状细胞   免疫调节   细胞因子  

摘要： 目的:探讨铜绿假单胞菌(PAO1)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对树突状细胞(DCs)的调控作用。方法:体外分离人外周血中性粒细胞,分别以佛波酯(PMA)和PAO1菌株[感染复数(MOI)=1、10、100]诱导NETs形成,通过免疫荧光染色观察NETs形态,并利用PicoGreen荧光定量法测定NET-DNA浓度。将PAO1诱导的NETs与DCs共培养,采用流式细胞术检测DCs表面共刺激分子(CD40、CD86、CD80)的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的转录及分泌水平。结果:PAO1诱导的NETs呈现核膨大及丝状连接结构,MOI=100组的NET-DNA浓度较MOI=1组显著增加(P<0.01),且NET-DNA释放量在1~3 h先升后降,4 h达峰值。PAO1诱导的NETs显著上调DCs表面共刺激分子CD40、CD86和CD80的表达(P<0.001),并促进IL-1β、IL-12和TNF-α的分泌(P<0.01)。结论:PAO1诱导的NETs能促进DCs的成熟及活化,并分泌促炎因子IL-1β、IL-12及TNF-α,这种促炎作用可能具有双重效应。

关键词： 药物性肝损伤   微小RNA-122   白介素-1β   白介素-10   临床意义  

摘要： 目的探讨药物性肝损伤(DILI)患者血清微小RNA-122(miR-122)、白介素-1β(IL-1β)和IL-10水平变化及其临床意义。方法2023年1月~2024年6月我院收治的DILI患者139例(胆汁淤积型39例,肝细胞损伤型86例,混合型14例;肝损伤1级43例,2级60例,3级36例)和同期体检的健康人75例,采用逆转录实时荧光定量PCR法检测血清miR-122水平,采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-10水平。结果DILI组血清总胆红素、ALT、AST、ALP和GGT水平为(48.6±7.9)μmol/L、(117.9±35.8)U/L、(112.8±42.3)U/L、(193.2±46.5)U/L和(377.6±88.8)U/L,均显著高于健康人组【分别为(10.3±3.2)μmol/L、(24.8±5.4)U/L、(23.1±4.0)U/L、(49.7±17.8)U/L和(50.4±4.2)U/L,P<0.05】;混合型血清miR-122水平为(11.5±2.6),肝细胞损伤型为(10.9±1.6),均显著高于胆汁淤积型【(9.0±1.5),P<0.05】,混合型血清IL-1β水平为(105.3±3.8)pg/mL,肝细胞损伤型为(101.8±3.2)pg/mL,均显著高于胆汁淤积型【(90.6±13.0)pg/mL,P<0.05】,三组血清IL-10水平无显著性差异(P>0.05);3级DILI患者血清miR-122水平为(12.5±1.2),2级DILI患者为(10.3±1.4),均显著高于1级患者【((8.6±1.5),P<0.05】,3级DILI患者血清IL-1β水平为(105.1±13.2)pg/mL,2级为(100.7±13.4)pg/mL,均显著高于1级【(88.8±13.1)pg/mL,P<0.05】,3级DILI患者血清IL-10水平为(1.9±0.8)pg/mL,2级为(2.1±0.9)pg/mL,均显著低于1级DILI患者【(2.8±1.1)pg/mL,P<0.05】。结论DILI患者血清miR-122和IL-1β水平升高,而血清IL-10水平降低,可能与病情严重程度有关,值得进一步研究。

关键词： 心力衰竭   中性粒细胞   淋巴细胞   再入院   死亡  

摘要： 目的探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对慢性心力衰竭(CHF)患者1年内再入院及死亡的预测价值。方法回顾性抽取2022年1月至2023年1月于汉中市中心医院住院诊治的306例CHF患者,收集患者的临床资料及入院24 h内的NLR。对患者进行随访,研究终点是出院后1年内因心力衰竭加重再入院或全因死亡,根据是否发生上述事件将CHF患者分为预后良好组(248例)和预后不良组(58例)。采用单因素与多因素Cox回归模型分析CHF患者1年内再入院或全因死亡的影响因素。采用受试者工作特征曲线评估NLR对CHF患者1年内再入院或全因死亡的预测价值。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同NLR患者的生存情况。结果入院时,预后不良组NLR(6.78±1.83)高于预后良好组(5.13±1.21),P<0.05。多因素Cox回归模型分析结果显示,血红蛋白、N端脑钠肽前体、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数以及NLR是CHF患者1年内再入院或死亡的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,NLR预测CHF患者1年内再入院及全因死亡的最佳截断值为6.51,受试者工作特征曲线下面积为0.774(95%CI:0.698~0.850)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,高NLR患者生存率低于低NLR患者(χ^(2)=67.41,P<0.001)。结论NLR与CHF患者1年内再入院及全因死亡率独立相关,是CHF患者1年内再入院及全因死亡的影响因素,对CHF患者预后具有良好的预测价值,早识别、早治疗高NLR值的CHF患者可改善临床预后。

关键词： 免疫球蛋白   干扰素   EV71   手足口病   免疫功能   炎症因子  

摘要： 目的观察人免疫球蛋白与干扰素联用方案对肠道病毒71型(EV71)感染致重症手足口病患儿免疫功能及外周血炎症因子水平的影响。方法选取本院120例EV71型感染致重症手足口病患儿为研究人群,采用抽签法均分为干扰素组和联合组。两组均采用抗感染、退热、调节水电解质失衡及补液等常规治疗,干扰素组在常规治疗的基础上雾化吸入干扰素,联合组在干扰素组基础上联用人免疫球蛋白治疗。比较两组治疗前后外周血炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、内皮素(ET)-1、γ干扰素诱导蛋白(IP)-10、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平。比较两组临床疗效、症状消失时间、住院时间、不良反应发生率。结果治疗后,两组IL-6、IL-8、ET-1、IP-10水平及CD8^(+)值均降低,且联合组低于干扰素组(P<0.05);两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,且联合组高于干扰素组(P<0.05)。联合组总有效率高于干扰素组(P<0.05),症状消失时间和住院时间均短于干扰素组(P<0.05)。两组不良反应比较,差异无显著性(P>0.05)。结论人免疫球蛋白联用干扰素可改善EV71型感染致重症手足口病患儿免疫功能,降低炎症因子水平,提高临床疗效。

关键词： 补肺汤   肺炎克雷伯菌   转录组学   白细胞介素-17(IL-17)信号通路   细胞凋亡  

摘要： 基于白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)信号通路探讨补肺汤对肺炎克雷伯菌肺炎大鼠的作用及机制。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺汤低剂量组(6.68 g·kg^(-1)·d^(-1))、补肺汤高剂量组(13.36 g·kg^(-1)·d^(-1))和地塞米松组(1.04 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。采用气管滴注肺炎克雷伯菌方法建立肺炎大鼠模型,成功后观察药物对大鼠肺组织损伤的改善作用。转录组学筛选核心靶点和信号通路;实时荧光定量聚合酶链式反应检测核心靶点白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和趋化因子CXC配体6(chemokine CXC ligand 6, CXCL6)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测IL-17信号通路中关键蛋白白细胞介素-17A(interleukin-17A, IL-17A)、核转录因子-κB激活剂1(nuclear transcription factor-κB activator 1, Act1)、肿瘤坏死因子相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6)以及下游磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase, p-p38 MAPK)、磷酸化核转录因子-κB p65(phosphorylated nuclear transcription factor kappa B p65, p-NF-κB p65)的表达;原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)检测肺组织细胞凋亡情况。结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺组织发生明显病理损伤,肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL6 mRNA的表达以及IL-17A、Act1、TRAF6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平均显著升高,凋亡细胞显著增多,表示造模成功。与模型组相比,补肺汤低、高剂量组大鼠肺组织病理损伤减轻,肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL6 mRNA的表达以及L-17A、Act1、TRAF6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低,且补肺汤高剂量组凋亡细胞显著减少。综上,补肺汤能有效改善肺炎克雷伯菌肺炎大鼠肺组织损伤,降低机体炎症反应,其机制可能与调控IL-17信号通路和减少细胞凋亡相关。