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关键词： 化痰安神方   HT22细胞   凋亡   NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路   炎症小体  

摘要： 目的基于核因子激活的B细胞的NOD-样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)/白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)/κ-轻链(nuclear factor-activated B cellκ-light chain,NF-κB)信号通路探讨化痰安神汤抑制神经元细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HT22小鼠海马神经元细胞,C57小鼠灌胃化痰安神方后制备含药小鼠血清,CCK-8法筛选化痰安神方含药血清最佳干预浓度。采用不同浓度含药血清处理HT22细胞后,予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导其发生凋亡,CCK-8法L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,L-LDH)生化检测法和Annexin V/PI染色法用于检测细胞损伤与凋亡情况,Western blotting法用于测定通路相关蛋白P-NF-κB/NF-κB、凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing,ASC)、NLRP3、Caspase-1的表达,酶联免疫吸附测定法用于测定IL-18的表达。过表达NLRP3后重复试验,进行单基因功能验证。结果化痰安神方含药血清可改善LPS诱导的细胞损伤和凋亡,降低细胞L-LDH浓度(P<0.05);显著下调NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路相关蛋白的转录表达(P<0.05);显著降低细胞内IL-18浓度;同时过表达NLRP3可逆转化痰安神方含药血清对HT22细胞凋亡抑制作用(P<0.05)。结论化痰安神方能够通过抑制NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路改善神经元细胞凋亡。

关键词： PD-L1   非小细胞肺癌   转移   凋亡   侵袭   HK2   HLA   增殖  

摘要： [目的]探究PD-L1与HK2/HLA-I通路的相互作用对非小细胞肺癌转移的影响。[方法]免疫组化实验分析非小细胞肺癌中PD-L1的表达。将非小细胞肺癌A549细胞分为3组:si NC组、si PD-L1组以及HY-B0486组。通过CCK-8实验分析A549细胞的增殖能力,Transwell实验分析A549细胞侵袭能力,流式细胞术分析A549细胞凋亡率,蛋白免疫印迹实验分析A549细胞中HK2/HLA-Ⅰ通路的蛋白表达情况。将非小细胞肺癌A549细胞分为4组,分别转染HK2野生型、突变型的荧光素酶报告基因载体与PD-L1 mimic/NC质粒;通过Targetscan网址预测PD-L1与HK2启动子结合区域,双荧光素酶报告基因实验分析PD-L1与HK2的靶向调节作用,实时荧光定量PCR检测HK2/HLA-ⅠmRNA表达水平。[结果]免疫组化结果显示,PD-L1在非小细胞肺癌组织中的表达水平增加(0.32±0.09 vs 0.79±0.06,P<0.05)。CCK-8实验发现,与si NC组相比,si PD-L1组和HY-B0486组的A549细胞的吸光度显著降低。Transwell实验显示,si PD-L1组和HY-B0486组的A549细胞的侵袭能力显著降低(156.68±12.69 vs 78.66±6.78 vs 81.56±7.88个,P<0.05)。流式细胞术实验结果显示,si PD-L1组和HY-B0486组的A549细胞的凋亡率增加(3.75%±0.28%vs 13.23%±0.19%vs 14.16%±0.56%,P<0.05)。蛋白免疫印迹实验结果显示,si PD-L1组和HY-B0486组的A549细胞的HK2和HLA-Ⅰ蛋白表达量下调。PD-L1与HK2启动子存在相互结合区域,同时PD-L1能够靶向作用HK2,并激活HK2/HLA-Ⅰ通路。[结论]PD-L1在非小细胞肺癌组织中的表达水平增加。抑制PD-L1和HK2/HLA-Ⅰ通路后可以明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,并能促进A549细胞细胞凋亡。并且PD-L1能够调节HK2/HLA-Ⅰ通路的激活,PD-L1对A549细胞转移的影响与调节HK2/HLA-Ⅰ信号通路相关。

关键词： 重度痤疮   外泌体   miR-144-5p   皮脂腺细胞   TNF-α   IL-6  

摘要： 目的探索重度痤疮患者外泌体对人皮脂腺细胞功能状态的影响及潜在机制。方法提取15例重度痤疮患者及15例正常人外周血外泌体,基于二代测序分析miRNA差异表达谱并预测靶基因。荧光定量PCR检测miR-144-5p水平,CCK-8法检测皮脂腺细胞增殖能力,ELISA法检测TNF-α及IL-6水平。结果二代测序分析对比重度痤疮与正常人群循环外泌体,共筛选出19个差异表达miRNA,其中miR-144-5p痤疮组为正常组的4.36倍(t=5.096,P<0.01)。与正常人相比,患者外泌体可明显增强人皮脂腺细胞的增殖能力、及上调TNF-α及IL-6水平,上述作用可被转染miR-144-5p抑制剂阻断(P值均小于0.01)。结论重度痤疮患者循环外泌体通过miR-144-5p介导皮脂腺细胞增殖及TNF-α、IL-6上调。

关键词： 乳酸脱氢酶   肺炎支原体肺炎   细胞免疫   儿童  

摘要： 目的探究不同血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿临床特征及其与细胞免疫相关性。方法选取2019年6月至2023年6月在北京市大兴区人民医院就诊的MPP患儿350例为研究对象,根据病情病情程度将其分为轻症组(n=118)、重症组(n=120)和危重症组(n=112)。分析不同血清LDH水平与MPP病情程度的独立相关性,按LDH水平从低到高等分为五分位数组(Q1~Q5),进行LDH水平与细胞免疫的相关性的亚组分析,并进行血清LDH水平影响因素的分层回归分析。结果LDH水平与MPP的病情程度存在独立相关性。在临床因素分层分析中,血清LDH水平与MPP病情程度的相关性稳定存在。在高免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、IgM、IgA水平下,随着LDH水平升高,MPP的发生风险升高;在低CD3^(+)T细胞、低CD8^(+)T细胞、低CD4^(+)T细胞、低CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)自然杀伤细胞(natural killer,NK)细胞、CD19+T细胞及CD4^(+)/CD8^(+)水平下,随着LDH水平升高,MPP的发生风险升高,LDH与IgG、IgM、IgA、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)NK细胞、CD19+T细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)具有且明显交互作用(P交互<0.05)。无论男性还是女性,随着LDH增高,重度MPP的发生风险均呈先增高后平稳的趋势。结论LDH水平随着MPP病情程度增加而升高。LDH水平与IgG、IgM、IgA水平存在显著正相关关系;与CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)NK细胞、CD19+T细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)存在显著负相关关系,可作为评估MPP发展及患儿免疫功能评估的重要指标。

关键词： 炎症性肠病   锌稳态   金属硫蛋白相关巨噬细胞   单细胞RNA测序   抗肿瘤坏死因子   治疗反应  

摘要： 目的在单细胞水平上分析锌稳态相关基因及相关细胞在炎症性肠病(IBD)患者肠黏膜中的表达,评估其在预测IBD患者抗肿瘤坏死因子(TNF)治疗反应的价值。方法收集4个基因表达综合(GEO)数据库中75例回肠或结直肠活检样本的单细胞RNA测序数据,包括克罗恩病(CD)、溃疡性结肠炎(UC)患者以及正常对照者(NC)。在R语言环境下,首先通过无监督聚类分析将IBD细胞分群,再采用锌稳态相关基因评分评估各细胞群的锌稳态情况,鉴定出与锌稳态相关基因密切相关的细胞群,即金属硫蛋白相关巨噬细胞(MT Mph)。随后收集中山大学附属第一医院收治的IBD患者及健康体检人群的结肠组织进行免疫荧光(IF)染色,验证比较IBD和NC组织中MT Mph数量差异。为进一步探讨MT Mph的功能和来源,在R语言环境下,比较GEO数据库MT Mph和非金属硫蛋白相关巨噬细胞(non-MT Mph)特征基因,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析进一步富集特征基因,采用细胞通讯分析MT Mph与不同细胞间的通讯机制,采用拟时序分析MT Mph来源及相关的信号通路,分析对比单核细胞、MT Mph与non-MT Mph之间的转录因子差异。通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)评估MT Mph特征基因的表达,采用ssGSEA和抗TNF治疗反应构建模型,评价MT Mph特征基因对IBD患者抗TNF治疗反应的预测效能。结果IBD细胞聚类注释为7个主要细胞群,分别为T细胞、B细胞、浆细胞、髓系细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞。IBD髓系细胞锌稳态相关基因评分高于NC组。髓系细胞可分为单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞。根据细胞表达锌稳态基因特别是高表达金属硫蛋白基因的情况,可进一步将巨噬细胞分为MT Mph和non-MT Mph,且IBD肠道MT Mph的数量较NC组显著增加。通过IF验证,每个高倍镜视野下UC和CD中CD68+MT1G+阳性细胞(MT Mph)数量显著多于NC组(UC比NC:30.80±7.29比9.80±1.80,P<0.001;CD比NC:36.00±9.30比9.80±1.80,P<0.001)。KEGG通路富集分析发现,MT Mph差异基因富集出炎症相关通路的关键基因,特别是TNF信号通路;细胞通讯分析发现MT Mph与其他细胞在IBD的TNF信号通路较NC显著增强。拟时序分析结果显示,单核细胞可分化为MT Mph,且分化过程中金属硫蛋白基因(MT2A、MT1X、MT1H和MT1G)的表达显著上调。转录因子分析表明,MT Mph转录因子SMARCB1以及ZMYND8活性较单核细胞显著升高,经典炎症转录因子HIF1A、STAT3、NFKB1活性较non-MT Mph显著升高。根据ssGSEA和TNF治疗反应分别构建CD和UC相应的预测模型[CD:曲线下面积(AUC)=0.966,P<0.01;AUC=0.793,P<0.01]。验证结果显示,该模型不能预测CD和UC患者对维得利珠单克隆抗体的治疗反应(均P>0.05)。结论IBD肠道存在锌稳态失衡,MT Mph是一组高度表达锌稳态相关基因的细胞群,其与TNF炎症通路密切相关。以MT Mph特征基因构建的预测模型可能可预测IBD抗TNF的治疗反应。

关键词： 显齿蛇葡萄   免疫功能   细胞免疫   体液免疫   单核-巨噬细胞功能  

摘要： 为了研究显齿蛇葡萄叶水提物对正常小鼠免疫功能的影响,制备显齿蛇葡萄叶的水提物,将96只小鼠分为三个大组,第一组测定脏器/体重比值、迟发型变态反应和半数溶血值;第二组测定碳廓清实验的吞噬指数;第三组测定NK细胞活性。以上大组再分为四个小组:每组8只,正常对照组、显齿蛇葡萄叶水提物低剂量组(0.5 g/kg/day)、中剂量组(1.0 g/kg/day)和高剂量组(2.0 g/kg/day),分别灌胃给药30 d。结果显示,迟发型变态反应和NK细胞活性两个实验组结果均呈阳性;与正常对照组比较,迟发型变态反应实验的中剂量组和高剂量组小鼠的足趾肿胀度均显著增加。NK细胞活性组与正常对照组比较,三个剂量组小鼠的NK细胞活性均显著升高。由此推断显齿蛇葡萄叶水提物具有增强正常小鼠免疫的功效。

关键词： 泄浊解毒方   溃疡性结肠炎   炎性细胞因子   缺氧诱导因子-1α  

摘要： 目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠血清炎性细胞因子和结肠组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的影响。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇复合灌肠法建立UC大鼠模型,将其分为模型组、美沙拉嗪组、泄浊解毒方高剂量组、中剂量组和低剂量组。药物组给予相应的药物灌胃14 d,空白组和模型组给予生理盐水灌胃14 d。给药结束后处死大鼠,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、IL-17的含量。Western blot法检测结肠组织HIF-1α蛋白的表达。结果:泄浊解毒方可改善UC大鼠结肠黏膜的炎症反应,与模型组比较,泄浊解毒各剂量组大鼠结肠黏膜的病理损伤评分显著降低,血清IL-10含量明显升高,IL-6、IL-17含量显著降低(P<0.05);泄浊解毒方各剂量组HIF-1α蛋白的表达明显低于模型组(P<0.05)。结论:泄浊解毒方可改善UC大鼠结肠黏膜的病理损伤,其作用机制可能与调节血清炎性细胞因子和降低结肠组织中HIF-1α蛋白的表达有关。

关键词： 乙型肝炎   谷丙转氨酶   谷草转氨酶   免疫球蛋白   预测价值  

摘要： 目的 探讨血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及免疫球蛋白水平对乙型肝炎(HB)患者病情严重程度的预测价值。方法 选取HB患者127例,参照相关标准评估患者病情严重程度,检测并对比不同病情严重程度的患者血清ALT、AST及免疫球蛋白水平,分析ALT、AST、免疫球蛋白水平与HB患者病情严重程度的关系及预测价值。结果 127例HB患者中轻度38例(29.92%),中度59例(46.46%),重度30例(23.62%);重度HB患者ALT、AST、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)水平依次较中度、轻度患者高(P<0.05);经Kendall's tau-b相关系数检验显示,ALT、AST、IgA、IgM、IgG水平与HB患者病情严重程度均呈正相关(r>0,P<0.05);绘制ROC曲线显示,ALT、AST、IgA、IgM、IgG单独检测及各指标联合检测预测HB患者中重度病情的AUC均>0.70,均有诊断价值,且联合检测价值最高。结论 血清ALT、AST、免疫球蛋白水平与HB患者病情严重程度有关,对HB患者病情严重程度具有较高预测价值,考虑未来可作为患者病情严重程度判断辅助指标之一。

关键词： 社区获得性肺炎   吸烟   细胞因子  

摘要： 目的分析吸烟对社区获得性肺炎(CAP)患者血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子的影响。方法回顾性分析2022年6月—2024年6月青海大学附属医院收治的94例CAP患者的临床资料。将患者分为感染吸烟组与感染非吸烟组,并根据吸烟指数将感染吸烟组分为轻度吸烟组(吸烟指数<400亚组)和重度吸烟组(吸烟指数≥400亚组)。比较各组患者的性别、年龄、既往病史、发病季节,外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、C反应蛋白(CRP),血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果感染吸烟组淋巴细胞计数及CRP水平均高于感染非吸烟组(P<0.05);感染吸烟组患者IL-4、IL-5及IL-17水平均高于感染非吸烟组,感染吸烟组患者IL-2水平均低于感染非吸烟组(P<0.05);感染非吸烟组患者血清IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α水平均高于吸烟指数<400亚组,感染非吸烟组患者血清IL-5水平低于吸烟指数<400亚组(P<0.05);感染非吸烟组患者血清IL-4、IL-5、TNF-α、IL-17水平均低于吸烟指数≥400亚组(P<0.05);吸烟指数≥400亚组患者血清IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-17水平均高于吸烟指数<400亚组(P<0.05)。随着吸烟指数的增加,CAP患者血清IL-5水平呈升高趋势(P<0.05)。结论CAP的发病过程中,吸烟可能通过抑制Th1并促进Th2及Th17反应,导致肺部炎症进一步发展;随着吸烟程度的升高,Th1、Th2及Th17细胞因子表达也升高。