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关键词： 人类免疫缺陷病毒(HIV)   丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)   T淋巴细胞   线粒体   抗逆转录病毒治疗(ART)   免疫  

摘要： 目的阐明人类免疫缺陷病毒(HIV)感染通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+)T细胞)线粒体损伤的机制。方法在2022-10-01/2023-03-31之间招募47名接受4年抗逆转录病毒治疗(ART)的HIV感染者,包括22名免疫无应答者(INR)、25名应答者(IR);以及26名性别和年龄匹配的未感染对照组参与者(HC);并用流式细胞术分析免疫指标。最后,加入MAPK通路抑制剂SB203580处理来自HC或HIV感染者中外周血单个核细胞(PBMC),观察CD4^(+)T细胞线粒体功能的变化。结果与HC组相比,INR组和IR组的PBMC中CD4^(+)T细胞比例显著降低,并且INR组的PBMC中CD4^(+)T细胞比例较IR组显著降低。此外,INR组的PBMC中初始(CD45RA^(+)CD27^(+))T细胞的比例显著低于HC组和IR组。与HC组和IR组相比,INR组PBMC中CD4^(+)程序性死亡受体1阳性(PD-1^(+))、CD4^(+)膜联蛋白V阳性(Av^(+))和CD4^(+)线粒体氧化阳性(MO^(+))比例,以及CD4^(+)T细胞亚群中CD45RA^(+)CD27^(+)PD-1^(+)、CD45RA^(+)CD27^(+)Av^(+)、CD45RA^(+)CD27^(+)MO^(+)比例均显著增加。与HC对照组相比,HIV对照组CD4^(+)T细胞的基础呼吸、最大呼吸和腺苷三磷酸(ATP)产量均显著降低,而CD4^(+)T细胞内线粒体膜电位(JC-1)(绿色/红色)显著增加。与HIV对照组相比,HIV-SB203580组CD4^(+)T细胞的基础呼吸、最大呼吸、ATP产量、呼吸潜力均显著增加,而CD4^(+)T细胞内JC-1(绿色/红色)显著降低。结论在接受ART治疗的HIV感染者中,特别是在INR患者的CD4^(+)T细胞中观察到MAPK信号通路异常激活,并可能导致线粒体功能受损和CD4^(+)T细胞稳态异常。

关键词： 白细胞介素33   肺腺癌   M2型巨噬细胞   极化   肿瘤相关巨噬细胞  

摘要： 目的观察白细胞介素33(IL-33)在肺腺癌组织中的表达变化及其对肺腺癌PC-9细胞增殖能力的影响,并探讨其机制是否与影响肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化、CD8+T淋巴细胞杀伤作用有关。方法选择行肺癌根治术并经病理确诊的肺腺癌患者91例,术中收集其肺腺癌及癌旁组织,采用免疫组化法及Western blotting法检测IL-33、M2型TAM表面标志物CD206表达,比较不同临床特征患者的IL-33、CD206阳性表达率,分析二者相关性,比较IL-33阳性及阴性肺腺癌组织CD206+巨噬细胞浸润情况(以CD206特异性荧光强度表示)。取对数生长期的人单核细胞白血病细胞株(THP-1),加入佛波酯诱导为M0型TAM,随机分为A、B、C、D组,分别加入0、5、10、15 ng/mL IL-33培养2 d,采用流式细胞术检测各组M2型TAM表面标志物CD206、CD163及M1型巨噬细胞标志物CD80、CD86表达率。将肺腺癌PC-9细胞与各组TAM上清液共培养2 d,采用流式细胞术检测肺腺癌PC-9细胞Ki67表达。分离CD8+T淋巴细胞,与各组TAM共培养72 h,采用流式细胞术检测CD8^(+)T淋巴细胞干扰素γ(IFN-γ)、穿孔素(Perforin)和颗粒酶B(Gzmb)阳性率。结果肺腺癌组织中IL-33、CD206阳性表达率及蛋白相对表达量均高于癌旁组织,IL-33、CD206蛋白相对表达量呈正相关关系(r=0.617),P均<0.05。分化程度为低分化、淋巴结转移N1~3期、临床分期Ⅲ期的肺腺癌患者癌组织IL-33、CD206阳性表达率均高于分化程度为中/高分化、淋巴结转移N0期、临床分期Ⅰ/Ⅱ期者(P均<0.05)。IL-33阳性、阴性的肺腺癌组织CD206特异性荧光强度分别为12.42±1.46、4.23±1.01,二者比较P均<0.05。A、B、C、D组TAM CD206、CD163表达率均依次升高,CD80、CD86表达率均依次降低(P均<0.05)。与A、B、C、D组TAM上清共培养的肺腺癌PC-9细胞Ki67表达率依次升高,与A、B、C、D组TAM共培养的CD8+T淋巴细胞IFN-γ、Perforin、Gzmb阳性率依次降低(P均<0.05)。结论肺腺癌组织IL-33表达升高并与疾病进展有关,IL-33可促进肺腺癌细胞增殖,其机制可能与诱导M0型TAM极化为M2型、抑制CD8+T淋巴细胞杀伤作用有关。

关键词： 多发性骨髓瘤   单核细胞免疫表型   流式细胞术   预后  

摘要： 目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单核细胞免疫表型表达的特点及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测67例MM患者和30例贫血患者(对照组)骨髓单核细胞免疫表型表达,筛选出与对照组有统计学差异的免疫表型。进一步采用单因素及多因素回归分析影响预后的危险因素,分析单核细胞免疫表型对MM预后的影响,进一步分析CD38+单核细胞与临床特点的相关性。结果:MM组中CD138+单核细胞比例(CD138+M%)、CD27+单核细胞比例(CD27+M%)、CD56+单核细胞比例(CD56+M%)显著高于对照组(P<0.05);而CD38+单核细胞比例(CD38+M%)、HLA-DR+单核细胞比例(HLA-DR+M%)显著低于对照组(P<0.01)。低CD38+M%组中位PFS低于高CD38+M%组;低CD138+M%、低CD27+M%、低CD38+M%、低HLA-DR+M%组中位OS显著缩短。Cox回归分析结果显示,低CD38+M%是预后的独立危险因素。低CD38+M%组受累/非受累游离轻链比值≥100比例及1q21+比例较高CD38+M%组明显升高(P<0.05);低CD38+M%组骨髓瘤细胞CD38-所占比例显著高于高CD38+M%组(P<0.05)。结论:MM患者骨髓CD38+单核细胞的表达与患者预后及临床特点密切相关,或可用来评估预后,指导治疗。

关键词： 金刚烷胺   恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)   帕金森   神经递质   PARK7   RANTES  

摘要： 目的:研究金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)对帕金森病患者认知功能及血清相关细胞因子水平的影响。方法:以2021年3月-2022年2月我院收治的70例帕金森病患者为观察对象,采用随机数字表法将患者分为B组和A组,每组35例。B组采用恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗,A组采用金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗。比较两组临床疗效,治疗前、治疗3个月后统一帕金森病评分量表(UPDRES)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评定量表(MoCA)评分、血清神经递质水平[5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、中枢神经特异蛋白(S100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]、血清胱抑素-C(Cys-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、活化T细胞趋化因子(RANTES)水平及不良反应。结果:A组临床总有效率高于B组(P<0.05);治疗3个月后A组UPDRES评分低于B组,MMSE、MoCA评分高于B组(P<0.05);治疗3个月后A组血清5-HT、DA水平高于B组,血清S100β、NSE水平低于B组(P<0.05);治疗3个月后A组血清Cys-C、PARK7、RANTES水平低于B组,血清SOD高于B组(P<0.05);两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金刚烷胺联合恩他卡朋双多巴片(Ⅱ)治疗帕金森病患者疗效显著,可有效缓解临床症状,调节神经递质水平,促进病情恢复。

关键词： 复发性流产   再次妊娠   早期流产   自身抗体   淋巴细胞免疫表型   预测模型  

摘要： 目的基于自身抗体和淋巴细胞免疫表型构建不明原因复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)再孕早期流产的预测模型并进行验证。方法回顾性分析常州市妇幼保健院在2021年5月至2023年5月收治的195例不明原因RSA再孕患者,观察患者早期流产情况并将其分为早期流产组(58例)和未早期流产组(137例)。分析影响患者早期流产的因素,并以此构建Nomogram列线图模型预测早期流产发生风险;用受试者工作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)分析预测模型对早期流产的预测效能。结果早期流产组抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)阳性占比、抗精子抗体(anti-sperm antibody,AsAb)阳性占比、抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2 glycoprotein 1 antibody,aβ2-GP1)阳性占比、抗双链DNA抗体(double-stranded DNA,dsDNA)阳性占比、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant,LA)阳性占比、CD4^(+)/CD8^(+)>2占比、CD16^(+)CD56^(+)≥13.5%占比均高于未早期流产组[63.79%(37/58)比37.23%(51/137);41.38%(24/58)比24.09%(33/137);39.66%(23/58)比16.06%(22/137);34.48%(20/58)比12.41%(17/137);29.31%(17/58)比11.68%(16/137);70.69%(41/58)比41.61%(57/137);67.24%(39/58)比38.69%(53/137);χ^(2)值分别为11.61、5.89、12.78、12.92、9.01、13.79、13.33,P值均<0.05]。二元Logistic回归分析显示,ACA阳性、aβ2-GP1阳性、dsDNA阳性、CD4^(+)/CD8^(+)水平、CD16^(+)CD56^(+)水平是患者早期流产的独立危险因素(OR值和95%CI分别为3.82,1.86~7.85;5.03,2.01~12.61;6.49,2.66~15.79;4.16,2.47~6.70;5.87,1.85~18.64,P值均<0.05)。基于上述影响因素构建的列线图预测模型经Bootstrap法内部验证显示C-index指数为0.82(95%CI:0.74~0.93),预测患者早期流产的校正曲线趋近于理想曲线(χ^(2)=0.27,P=0.65)。绘制ROC曲线结果显示,列线图模型预测患者早期流产的敏感度为85.70%、特异性为86.60%,AUC为0.87(95%CI:0.78~0.96)(P<0.05)。结论基于ACA阳性、aβ2-GP1阳性、dsDNA阳性和CD4^(+)/CD8^(+)、CD16^(+)CD56^(+)建立的列线图预测模型可以较好的评估RSA再孕患者早期流产发生风险。

关键词： 白细胞介素1β   白细胞介素6   人牙髓干细胞   牙髓炎   增殖   成骨分化  

摘要： 目的 探讨白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)对体外培养的人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法 体外分离培养hDPSCs,设置对照组(0 ng/mL IL-1β)和IL-1β组(0.1,1,10,100 ng/mL IL-1β);同理设置对照组(0 ng/mL IL-6)和IL-6组(0.1,1,10,100 ng/mL IL-6)。培养24,48,72 h时,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性;培养7,14,21 d时,应用5-溴-4氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒和茜素红(AR)显色试剂盒分别检测hDPSCs ALP染色、ALP活性、AR染色变化和钙结节定量。结果 CCK-8结果显示,不同浓度IL-1β组培养48 h细胞增殖活性均小于对照组(P<0.05),72 h时仅100 ng/mL IL-1β组增殖活性小于对照组(P<0.05)。成骨诱导第14,21天时,与对照组比较,1,10,100 ng/mL IL-1β组肉眼观ALP和AR染色变浅,ALP活性和钙结节OD450降低(P<0.05)。CCK-8结果显示,不同浓度IL-6组在48 h时细胞增殖活性均小于对照组(P<0.05),72 h时仅100 ng/mL IL-6组增殖活性小于对照组(P<0.05)。成骨诱导第21天,与对照组相比,肉眼观100 ng/mL IL-6组ALP染色较浅,ALP活性降低(P<0.05),0.1,1,10 ng/mL IL-6组在成骨诱导第7,14,21天,ALP染色、AR染色、ALP活性和钙结节OD450均无明显变化。结论 IL-1β和IL-6对hDPSCs增殖活性的影响均取决于其浓度和作用时间。高浓度的IL-1β抑制hDPSCs的成骨分化;IL-6对hDPSCs的成骨分化无明显影响。

关键词： 炎症因子   糖尿病视网膜病变   大鼠模型   组织因子途径抑制剂   相关性  

摘要： 目的通过对糖尿病视网膜病变大鼠外周血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制剂(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)水平的检测,探讨炎症与糖尿病视网膜病变病程发展的关系。方法20只链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病模型,以出现糖尿病视网膜病变的9只大鼠为实验组,未出现糖尿病视网膜病变的11只大鼠为对照组。观察两组眼底及血清中相关因子的变化情况。使用视网膜成像系统对实验组和对照组进行眼底彩照及眼底荧光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)观察不同周期的变化。采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清IL-6、TNF-α、VEGF、TF和TFPI水平,并进行统计学分析。结果实验组的眼底1月后在远离视盘部分区域和2月后在视盘周围区域出现了白色絮状现象,而对照组表现均正常。FFA造影显示,实验组在1月后的眼底出现了点状和棉絮状荧光堆积渗漏;2月后,实验组出现了大面积的荧光渗漏。而对照组未观察到。实验组、对照组IL-6差异无统计学意义(P>0.05),实验组TNF-α、VEGF、TF均高于对照组,但TFPI水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-6、TNF-α、VEGF与TF均为正相关关系,但IL-6、VEGF相关性检验无统计学意义(P>0.05),TNF-α有统计学意义(P<0.05);IL-6、TNF-α、VEGF与TFPI水平均为负相关关系,但VEGF与TFPI具有统计学意义(P<0.05)。提示糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)状态下AUC为TFPI>TF>TNF-α>VEGF>IL-6。结论炎症因子与糖尿病视网膜组织病变有一定的关联性,炎症在糖尿病视网膜病变的发病机制和发展中起着一定作用,临床中可通过控制炎症来预防、治疗糖尿病视网膜病变。

关键词： 急性感染性腹泻   健脾解毒汤   蒙脱石散   肠屏障功能   白介素-8   核因子-κB   可溶性白细胞分化抗原14  

摘要： 目的:探究健脾解毒汤对急性感染性腹泻患儿血清IL-8、NF-κB、sCD14水平及肠屏障功能的影响。方法:选择114例2019年1月~2020年3月于我院及神木市医院(西北大学附属神木医院)就诊的急性感染性腹泻患儿,据随机数字表法分为观察组与对照组,各57例。对照组接受蒙脱石散治疗,观察组在对照组基础上予以健脾解毒汤治疗,两组均连续治疗5d。比较两组治疗前、治疗5d后的主要证候积分、肠屏障功能指标、血清细胞因子水平;观察两组治疗5d后的疗效及治疗期间不良反应发生情况。结果:治疗5d后,观察组总有效率为94.74%,高于对照组(80.70%)(P<0.05)。治疗5d后,两组肛门灼热、烦热口渴、水样便、腹痛、泻下急迫积分,血浆D-Lactate、LPS、NO水平及血清IL-8、NF-κB、sCD14水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组均未发现严重不良反应。结论:健脾解毒汤联合蒙脱石散治疗急性感染性腹泻,可有效降低患儿血清IL-8、NF-κB、sCD14水平,控制机体炎症反应,同时有效改善肠屏障功能,进而缓解其临床症状,提高疗效,且安全性良好。

关键词： 核因子-κB   基质金属蛋白酶抑制因子-1   白细胞介素-8   儿童   幽门螺杆菌   胃炎  

摘要： 目的分析血清核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、白细胞介素-8(IL-8)与儿童幽门螺杆菌(***)感染相关性胃炎的关系。方法选取2021年7月至2023年7月就诊的60例***感染相关性胃炎患儿设为观察组,另选取同期体检中心的60例健康体检儿童设为健康组,检测、比较2组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,比较观察组患者不同炎性活动度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,比较观察组患者治疗前后血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,绘制受试者工作曲线(ROC),分析血清NF-κB、TIMP-1、IL-8对***感染相关性胃炎的诊断效能。结果观察组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于健康组(P<0.05)。重度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于轻度组(P<0.05)。治疗后血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平低于治疗前(P<0.05)。血清NF-κB、TIMP-1、IL-8联合检测诊断***感染相关性胃炎的AUC是0.904,95%CI可信区间是0.856~0.951,联合检测的灵敏度(94.82%)、特异度(90.13%)均高于单一检测(73.82%、71.62%)、(72.26%、68.18%)、(70.18%、64.74%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论***感染相关性胃炎患儿血清NF-κB、TIMP-1、IL-8呈异常高表达,血清NF-κB、TIMP-1、IL-8表达量与炎性活动度及疗效存在密切联系,联合检测可提高对***感染相关性胃炎的诊断效能,值得借鉴。

关键词： 附子   多糖   结构表征   免疫活性   葡聚糖   RAW 264.7细胞  

摘要： 目的探讨附子多糖(Aconiti Lateralis Radix Praeparata polysaccharide,ACP)的结构特征及其对RAW264.7细胞的免疫活性影响。方法采用水提醇沉的方法获得附子粗多糖,通过阴离子交换色谱柱和分子筛凝胶色谱柱对附子粗多糖进行分离、纯化,获得ACP。采用高效凝胶渗透色谱法测定ACP的分子量分布;采用离子色谱法测定ACP的单糖组成;采用甲基化实验及核磁图谱解析ACP的糖苷键类型及多糖一级结构。最后,通过体外细胞实验,测定ACP对于RAW 264.7细胞的作用。结果与结论从附子中分离得到一种分子量为11.37 kDa的均一多糖,该多糖主要由葡萄糖组成,且以→4)-Glcp-(1→糖苷键为主链的结构,端基Glcp-(1→为支链经→4,6)-Glcp-(1→的O-6链接到主链。体外细胞实验结果表明,ACP能够促进诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌,具有一定的免疫活性。