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关键词： 不明原因复发性流产(RPL)   淋巴细胞免疫治疗(LIT)   HLA抗体   封闭抗体  

摘要： 目的研究不明原因复发性流产(RPL)患者和正常生育人群人类白细胞抗原(HLA)抗体的状态;检测淋巴细胞免疫治疗(LIT)后HLA抗体的转阳率;对比不明原因RPL患者淋巴细胞免疫治疗后HLA抗体与妊娠结局,评估HLA抗体是否可作为LIT预测妊娠结局的有效指标。方法选取2014年12月3日至2015年6月10日在北京大学第三医院生殖中心门诊就诊的不明原因RPL患者24例作为RPL组,同期于北京大学第三医院体检中心体检的健康未孕女性30例作为对照组,两组年龄均在20~40岁。应用酶联免疫吸附法和流式细胞仪-微珠法,分别测定不明原因RPL患者LIT前后和健康生育者外周血的HLA特异性IgG抗体,根据HLA抗体状态分为4类,包括HLA-I类阳性、HLA-II类阳性、双阳性(HLA-Ⅰ类、Ⅱ类均阳性)和双阴性(HLA-Ⅰ类、Ⅱ类均阴性),比较两组人群HLA抗体状态,分析LIT后RPL患者HLA抗体的转阳率,及HLA抗体状态与妊娠结局的关系。结果RPL患者HLA抗体状态与健康生育者比较,差异无统计学意义;LIT促进HLA抗体转阳,LIT后不同HLA状态的活产率比较,差异无统计学意义。结论不明原因PRL患者,LIT前HLA特异性IgG抗体与正常生育者差异无统计学意义,LIT可以促进HLA抗体转阳,免疫治疗后PRL患者HLA特异性IgG抗体与妊娠结局无关,HLA特异性IgG抗体不能作为LIT预测妊娠结局的唯一参考指标,尚需要结合其他免疫指标综合分析。

关键词： 益景汤   糖尿病视网膜病变   血-视网膜屏障   IL-6/STAT3/ERK  

摘要： 目的探讨益景汤对高糖条件下体外血-视网膜屏障(iBRB)模型损伤的影响及作用机制。方法大鼠视网膜微血管周细胞-内皮细胞(rRMPs-rRMECs)共培养构建体外iBRB模型,分为对照组(CG)、模型组(MG)和益景汤组(YG),在培养基中分别加入5.5 mmol/L葡萄糖、33.0 mmol/L葡萄糖、4 mg/mL益景汤+33.0 mmol/L葡萄糖培养48 h。细胞计数试剂-8(CCK-8)法观察视网膜微血管细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察视网膜微血管细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测白细胞介素-6(IL-6)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)、细胞外信号调节激酶(ERK)mRNA的表达,Western Blot法检测IL-6、p-STAT3、p-ERK及紧密连接蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察视网膜三维微血管模型形态。结果(1)细胞活性:MG组细胞活性低于CG组(t=3.016,P=0.009),YG组细胞活性高于MG组(t=11.810,P=0.000),差异均有统计学意义。(2)细胞凋亡:MG组细胞凋亡率高于CG组(t=54.609,P=0.000),YG组细胞凋亡率低于MG组(t=31.455,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)相关mRNA:MG组rRMECs-rRMPs的IL-6、STAT3、ERK mRNA表达量均高于CG组(t_(IL-6)=13.097、t_(STAT3)=29.032、t_(ERK)=11.005,均P=0.000),YG组rRMECs-rRMPs的IL-6、STAT3、ERK mRNA表达量均低于MG组(t_(IL-6)=4.594,P=0.004;t_(STAT3)=20.695,P=0.000;t_(ERK)=4.066,P=0.020),差异均有统计学意义。(4)相关蛋白:MG组rRMECs-rRMPs的IL-6、p-STAT3、p-ERK蛋白表达水平高于CG组(t_(IL-6)=6.009,P=0.001;t_(p-ERK)=7.816、tp-STAT3=11.741,均P=0.000),ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平低于CG组(t_(ZO-1)=6.818、t_(Occludin)=6.710,均P=0.001;t_(Claudin-5)=11.766,P=0.000),差异均有统计学意义;YG组rRMECs-rRMPs的IL-6、p-STAT3、p-ERK蛋白表达水平低于MG组(t_(IL-6)=2.973,P=0.025;tp-STAT3=6.685,P=0.001;t_(p-ERK)=3.859,P=0.008),ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平高于MG组(t_(ZO-1)=2.640,P=0.039;t_(Occludin)=3.397,P=0.016;t_(Claudin-5)=6.241,P=0.001),差异均有统计学意义。(5)微血管模型形态:CG组rRMECs被rRMPs紧密包裹,保持完整的血管样结构;YG组微血管模型开始崩解,伴随rRMPs覆盖率降低;MG组仅保持少量不完整网状结构,rRMPs基本消失。结论益景汤可提高高糖条件下的rRMECs-rRMPs的活性与紧密连接蛋白表达水平,降低细胞凋亡率,抑制高糖诱导的体外三维微血管形态破坏,其作用机制可能与调控IL-6/STAT3/ERK途径有关。

关键词： 传染性单核细胞增多症   异型淋巴细胞比例   细胞免疫   体液免疫   免疫系统紊乱  

摘要： 目的探讨异型淋巴细胞比例对传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)患儿免疫系统的影响。方法选取2023年5月至2024年5月金华市妇幼保健院收治的153例IM患儿作为IM组,选取同期153名健康儿童作为健康组,分析异型淋巴细胞比例与IM患儿EB病毒载量的关系。检测并比较两组纳入者的免疫系统指标[补体C3、C4、CD19^(+)细胞、T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgG、IgM]表达水平,分析异型淋巴细胞比例与免疫系统指标的关系。根据免疫情况将IM患儿分为严重免疫系统紊乱组、非严重免疫系统紊乱组,分析严重免疫系统紊乱IM患儿的临床特征并比较异型淋巴细胞比例差异。结果与健康组比较,IM组患儿的异型淋巴细胞比例升高(P<0.001)。Pearson检验显示异型淋巴细胞比例与IM患儿EB病毒载量呈正相关(P<0.05)。与健康组比较,IM组患儿补体C3、C4、CD8^(+)T细胞、IgA、IgG、IgM水平升高,CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、CD19^(+)细胞降低(P<0.001)。在IM儿童中,异型淋巴细胞比例与CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、CD19^(+)细胞呈负相关,与CD8^(+)T细胞、IgA、IgG、IgM呈正相关(P<0.05)。异型淋巴细胞比例升高是IM患儿免疫系统紊乱程度的危险因素(P<0.001)。异型淋巴细胞比例诊断IM患儿免疫系统紊乱的曲线下面积为0.918。结论IM患儿存在不同程度的免疫系统紊乱现象,以特异性免疫紊乱为主,其紊乱程度与异型淋巴细胞比例升高有关。异型淋巴细胞比例可作为早期诊断IM患儿免疫紊乱程度的参考指标。

关键词： 中华蜜蜂囊状幼虫病毒   RNA依赖性RNA聚合酶   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 为研究对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)健康构成严重威胁的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因RdRp的原核表达及制备对应的多克隆抗体,通过PCR扩增CSBV的RdRp全长序列,将它克隆到pET-28a原核表达载体,再将含有目的基因的载体转入到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)菌株中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达出大量目的蛋白,通过免疫小鼠(Mus musculus)制备对应的多克隆抗体,采用蛋白印迹法(Western blot)分析多克隆抗体的特异性。结果显示:成功构建了重组表达质粒pET28a-RdRp,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中成功表达出大量RdRp重组蛋白;Western blot分析结果表明制备的多克隆抗体能特异性地识别感染了CSBV的中华蜜蜂幼虫体内的RdRp。上述研究结果为今后研究RdRp的精确定位和掲示CSBV入侵宿主具体过程奠定了基础。

关键词： 人H组轮状病毒   杆状病毒表达系统   VP7蛋白   多克隆抗体  

摘要： 目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH J19株的VP7蛋白免疫兔子以制备VP7多抗血清,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光荧光试验(Immunofluorescence,IF)等对VP7多抗血清进行鉴定。结果纯化得到可溶的J19 VP7蛋白;制备获得J19株VP7兔多抗;ELISA显示VP7多抗具有较好的结合效价,在稀释2048000倍时与人RVH VP7蛋白仍有结合;WB表明多抗能够结合J19 VP7蛋白;IF显示VP7多抗可以特异识别人H组轮状病毒J19株。结论本研究成功得到了人H组轮状病毒J19 VP7蛋白,制备的VP7多抗可以特异性识别人H组轮状病毒,为人H组轮状病毒的检测及病毒衣壳结构功能研究提供了基础。

关键词： 伴单克隆免疫球蛋白沉积的增生性肾小球肾炎   环磷酰胺-沙利度胺-地塞米松   疗效   不良反应  

摘要： 目的:评估环磷酰胺-沙利度胺-地塞米松(CTD)方案治疗伴单克隆免疫球蛋白沉积的增生性肾小球肾炎(PGNMID)的有效性及安全性。方法:回顾性分析2018年1月至2024年1月于国家肾脏疾病临床研究中心采用CTD方案治疗PGNMID患者的临床病理资料。结果:筛选纳入CTD方案治疗的22例患者,初发初治组16例,复发难治组6例。中位随访21月,中位缓解时间约9月。随访期内,90.9%达肾脏缓解,45.5%完全缓解。所有患者中位尿蛋白定量从3.53(2.10,6.41)g/24h降至0.71(0.41,2.15)g/24h,中位血清肌酐从122.5(84.4,150.3)μmol/L降至99.9(70.7,124.0)μmol/L。其中,2例复发,1例进入终末期肾病。沙利度胺中位使用剂量75(50,100)mg/d,严重不良反应发生率9.1%(2/22),骨髓抑制和周围神经损伤各1例。结论:CTD方案治疗PGNMID有效,严重不良反应少,耐受性较好,远期疗效和安全性还需要进一步观察。

关键词： 老年   25羟基维生素D   IL-6   肌少症   相关性  

摘要： 分析老年患者血清25(OH)D水平、IL-6与肌少症(SP)相关性。方法 选取2020年6月—2022年6月江西省人民医院收治的60例SP患者以及60例健康体检者为研究对象进行回顾性分析,记录两组各项一般资料,以分析SP的危险因素。结果 两组在年龄、IL-6、BMI、25(OH)D上,(P<0.05),在性别、BMI、饮酒、饮酒时间、吸烟、吸烟时间、WBC、PLT、TC、LDL-C、HDL-C、TG上,(P>0.05);多元Logistic 回归结果显示,高龄、低BMI、低25(OH)D、高IL-6是独立危险因素,(P<0.05)。结论 除公认的年龄、BMI外,IL-6、25(OH)D均为影响肌少症的独立危险因素,对存在这些高危因素的患者应加强监测,并给予适当的干预措施。

关键词： 膝骨关节炎   富血小板血浆   生长因子   细胞因子  

摘要： 目的 探讨关节腔内注射富血小板血浆(PRP)治疗膝骨关节炎患者的临床疗效,并分析其与PRP生物学特性的关系。方法 110例膝骨关节炎患者随机均分为PRP组和透明质酸(HA)组,分别接受关节腔内单次PRP和HA注射治疗。评估两组治疗前和治疗6周、3个月和6个月时国际膝关节文献委员会(IKDC)主观评分、VAS疼痛评分和西安大略麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分,并观察治疗前后不良事件的发生情况。检测PRP中细胞计数、生长因子和细胞因子水平,分析其与临床结局的关系。结果 与治疗前相比,两组治疗后IKDC主观评分、VAS疼痛评分、WOMAC各项评分及总分均改善(P<0.05);PRP组治疗6个月时IKDC主观评分高于HA组(P<0.05);PRP组治疗6周时WOMAC功能、僵硬评分及总分低于HA组(P<0.05)。PRP组VAS疼痛评分高于最小临床重要差异(MCID)患者的血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)和PDGF-AB水平高于VAS疼痛评分低于MCID患者(P<0.05)。两组不良事件发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论 关节腔内注射PRP对膝骨关节炎患者有显著的临床疗效,患者满意度和安全性较高。PRP治疗膝骨关节炎时需要考虑生长因子的水平。

关键词： 恶性黑色素瘤   白细胞介素-37   转移   B16F1细胞   过表达质粒  

摘要： 目的:恶性黑色素瘤恶性程度极高,早期即可发生转移,预后极差,严重威胁着人类的健康,研究抑制其转移相关的分子及机制对其治疗及预后有重要意义。白细胞介素(interleukin,IL)-37作为抗炎细胞因子,不仅与多种炎症性疾病有关,还具有抗肿瘤作用。本研究旨在通过建立恶性黑色素瘤肺转移小鼠模型,研究IL-37对小鼠体内恶性黑色素瘤转移的作用。方法:将IL-37过表达(IL-37 overexpression,IL-37 oe)和Vector质粒分别转染小鼠黑色素瘤细胞B16F1,设置IL-37 oe组(加入转染试剂及IL-37 oe质粒)、空白对照(Blank)组(只加入转染试剂)和Vector组(加入转染试剂及Vector质粒)。C57小鼠随机分为3组,每组3只。分别收集处于对数生长期的Blank组、Vector组和IL-37 oe组B16F1细胞在无菌条件下进行小鼠尾静脉注射。每3天称量并记录小鼠体重。1个月后,采用颈椎脱臼法处死小鼠,分别解剖并分离各组小鼠肺器官及心、肝、脾、肾等脏器,肺器官采图并记录转移结节数;小鼠心、肝、脾、肾等各脏器组织用4%的多聚甲醛固定后制作石蜡切片,并进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色。结果:蛋白质印迹显示质粒构建成功。第1、4、7、10、13、16、19、22、25和28天,IL-37 oe组小鼠体重较Blank组和Vector组差异均无统计学意义(均P>0.05)。解剖小鼠肺器官发现肺部肿瘤结节,表明建模成功。HE染色发现IL-37 oe组小鼠心、肝、脾、肾等脏器组织形态学变化较Blank组和Vector组均无明显差异。3组小鼠的肺组织中,Blank组肺转移的结节数为(24.00±2.08)个,Vector组肺转移的结节数为(24.67±0.88)个,IL-37 oe组为(5.33±1.45)个;IL-37 oe组肺部的转移结节数目明显低于Blank组和Vector组(均P<0.05),而Blank组和Vector组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-37在小鼠体内能抑制恶性黑色素瘤细胞肺转移结节数,且对小鼠体重及其他脏器无明显影响,有望成为恶性黑色素瘤基因治疗或免疫治疗的潜在分子靶标。

关键词： DHAV-3   结构蛋白   多克隆抗体   中和效价   免疫保护  

摘要： 为比较DHAV-3结构蛋白免疫保护性差异,利用原核表达系统表达重组蛋白,制备鸭抗DHAV-3-VP0、-VP3、-VP1多克隆抗体,并测定其中和效价;以制备的r-DHAV-3结构蛋白为免疫原免疫SPF鸭后攻毒,通过保护率、组织病理学分析及病毒载量,评价DHAV-3的3种结构蛋白免疫原性及免疫保护性差异。结果表明:鸭抗DHAV-3-VP0、-VP3、-VP1多克隆抗体ELISA效价分别为1:102 400、1:51 200、1:204 800;中和效价以鸭抗DHAV-3-VP1多克隆抗体最高为1:178,VP3次之为1:149,VP0中和效价最低为1:53;rDHAV-3-optiVP1免疫组保护率为60%;r-DHAV-3-VP0、r-DHAV-3-VP3免疫组保护率为40%。所有免疫组肝脏组织病理损伤程度及肝脏、脾脏病毒载量均显著低于对照组。DHAV-3的3种结构蛋白免疫保护性以VP1最强,VP3、VP0次之。