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关键词： 新型鸭呼肠孤病毒   p18蛋白   多克隆抗体   毒力  

摘要： 【背景】我们前期将新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)强毒株NP03在番鸭胚成纤维细胞(muscovy duck embryo fibroblast,MDEF)上进行传代,选育出NDRV弱毒株S,将强弱毒株p18蛋白进行比对发现弱毒p18蛋白C端缺失35个氨基酸。【目的】制备p18蛋白的多克隆抗体并鉴定NDRV强弱毒株p18蛋白的差异。【方法】采用RT-PCR方法扩增NDRV强弱毒株p18基因编码序列,克隆至原核表达载体pET-28a中诱导表达,用镍柱纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE和Western Blot对纯化蛋白进行鉴定。进一步用纯化的蛋白免疫小鼠制备p18蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA、Western Blot和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)对制备的多克隆抗体进行检测鉴定NDRV强弱毒株。【结果】对目的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果表明,分别获得了NDRV强弱毒株p18重组蛋白。对多克隆抗体进行间接ELISA检测,效价达1:51200。Western Blot鉴定显示,制备的p18蛋白多克隆抗体能特异性检测NDRV强、弱毒株感染细胞后表达的p18蛋白,结果表明,强、弱毒株p18蛋白的分子量有明显差异,分别约为18 kDa和14 kDa。IFA结果表明,制备的p18蛋白多克隆抗体可以特异性识别NDRV强、弱毒复制时表达的p18蛋白。【结论】本研究制备的p18蛋白多克隆抗体可用于NDRV强弱毒株p18蛋白检测,并发现NDRV强、弱毒株p18蛋白存在明显差异,为深入研究NDRV p18蛋白生物学功能及致病机理奠定了基础。

关键词： 脓毒症   APACHE II评分   血小板平均体积   淋巴细胞计数   血小板平均体积与淋巴细胞计数比值  

摘要： 目的:探讨外周血平均血小板体积/淋巴细胞计数(MPVLR)联合APACHE II评分对脓毒症患者预后的预测价值。方法:采用回顾性队列研究方法,选择该院2020年8月至2023年8月收治的符合脓毒症3.0诊断标准的患者。根据脓毒症患者的28 d预后情况分为生存组及死亡组。收集患者的临床资料及确诊脓毒症后24 h内血小板体积(MPV)、淋巴细胞(LYM)计数的最差值,并计算平均血小板体积/淋巴细胞计数(MPVLR)、APACHE II评分及SOFA评分。随后使用多因素Logistic回归分析,确定脓毒症患者预后的影响因素,再构建受试者工作特征曲线,评估各项指标对脓毒症患者预后的预测价值。结果:共纳入患者127例,生存组患者76例,死亡组患者51例。死亡组患者更易合并慢性阻塞性肺疾病,且平均血小板体积(MPV)、平均血小板体积/淋巴细胞计数(MPVLR)、APACHE II评分、SOFA评分、及年龄均高于生存组,且差异具有统计学意义(P Objective: To investigate the prognostic value of the mean platelet volume (MPV)-to-lymphocyte ratio (MPVLR) combined with the APACHE II score in predicting the outcomes of patients with sepsis. Methods: This retrospective study screened patients with sepsis who were hospitalized in our hospital, from August 2020 to August 2023 were included and categorized into the survival group and the non-survival group based on 28-day outcomes of sepsis patients. Clinical date and the worst of mean platelet volume (MPV), lymphocyte (LYM) count values within 24 hours of sepsis diagnosis were collected, MPVLR and APACHE II scores were calculated. Multifactorial logistic regression analysis was used to identify risk factors affecting the prognosis of sepsis patients, and then a subject operating characteristic curve (ROC) was constructed to assess the predictive value of each indicator on the prognosis of sepsis patients. Results: A total of 127 patients were included, with 76 in the survival group and 51 in the non-survival group. Patients in the non-survival group were more likely to have chronic obstructive pulmonary disease, and had significantly higher MPV, MPVLR, APACHE II scores, SOFA scores and age compared to the survival group (P < 0.05). In contrast, peripheral blood lymphocyte counts in the survival group were significantly higher than that in the non-survival group (P < 0.05). Multivariate logistic regression analysis showed that MPVLR and APACHE II scores were independent risk factors for 28-day mortality in sepsis patients (P < 0.05). Receiver operatin

关键词： 慢性肾衰竭   浊毒理论   核转录因子κB   白细胞介素-6   肿瘤坏死因子-α   Ⅳ型胶原  

摘要： 目的探讨基于“浊毒理论”指导下的健脾补肾化浊解毒方对5/6肾切除慢性肾衰竭大鼠肾组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)表达的影响。方法取60只雄性SD大鼠,随机选择其中12只作为假手术组,其余大鼠实施5/6肾切除手术建立慢性肾衰竭模型。将成模存活大鼠随机分为模型组12只、氯沙坦组11只、尿毒清组11只、健脾补肾化浊解毒方组11只,氯沙坦组给予氯沙坦钾5.25 mg/(kg·d)灌胃,尿毒清组给予尿毒清颗粒2.10 g/(kg·d)灌胃,健脾补肾化浊解毒方组给予健脾补肾化浊解毒方2.35 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等体积0.9%NaCl灌胃,均1次/d。连续灌胃12周后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色观察残余肾组织病理形态,Western blot法与RT-qPCR法分别检测残余肾组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、Col-Ⅳ蛋白和mRNA表达情况。结果模型组大鼠血清SCr、BUN水平和肾组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、Col-Ⅳ蛋白及mRNA相对表达量均明显高于假手术组(P均<0.05);各药物组大鼠血清SCr、BUN水平和肾组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、Col-Ⅳ蛋白及mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),且健脾补肾化浊解毒方组大鼠血清SCr、BUN水平和肾组织中Col-Ⅳ蛋白及mRNA相对表达量均明显低于氯沙坦组和尿毒清组(P均<0.05)。结论健脾补肾化浊解毒方可明显改善慢性肾衰竭大鼠的肾功能及肾组织病理改变,其作用机制可能与降低NF-κB p65、TNF-α、IL-6、Col-Ⅳ的表达,从而改善微炎症状态,减少细胞外基质沉积,减轻肾间质纤维化有关。

关键词： 烟草花叶病毒   单克隆抗体   胶体金免疫层析技术   试纸条  

摘要： 针对传统烟草花叶病毒(TMV)检测方法耗时较长、应用受限的问题,基于双抗夹心法研发快速定性检测TMV的胶体金检测试纸条,并对其制备条件进行优化,考查其检测限、准确性和特异性。结果表明:该试纸条的适宜制备条件为缓冲液添加量4μL、抗体质量浓度10μg/mL、NC膜选择CN140型、样本提取液0.02 mol/L PBS;该试纸条对TMV-CP蛋白的检测限为0.1μg/mL,与烟草丛顶病毒、番茄斑萎病毒、马铃薯Y病毒无交叉反应,特异性良好;将其进行实际样品检测,与PCR的总符合率为95.0%,阳性符合率为93.3%,准确性良好。此试纸条在10 min内即可显示检测结果,且操作简单,可用于烟田TMV的快速检测。

关键词： 免疫调节   淋巴细胞   哮喘   慢性阻塞性肺疾病  

摘要： 慢性阻塞性肺疾病(COPD)在中老年人群中较为多见,往往会导致患者生活质量变差且会诱发多种肺部疾病。哮喘作为全球常见的、复杂的气道异质性疾病,威胁着全球人民的安全。由于哮喘合并COPD的概率较普通人大大增加,因此,两者之间存在众多值得我们深入探讨的联系。本文就哮喘合并COPD的现状以及异常免疫应答尤其是T淋巴细胞亚群与其发生、发展关系方面做一个简要综述。

关键词： 溃疡性结肠炎   超声检查   高敏C反应蛋白   白细胞介素-6   白细胞介素-8   黏膜下层指数  

摘要： 目的探讨经腹超声黏膜下层指数结合高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8对溃疡性结肠炎患者早期治疗效果的预测价值。方法选取2021年1月1日至2022年12月31日在峨眉山市人民医院治疗的溃疡性结肠炎患者作为研究对象,治疗后对治疗效果进行早期判断,根据治疗效果分为缓解组和未缓解组,对比两组患者间的经腹超声结果及临床检验指标,评估经腹超声结合检验指标预测早期治疗效果的价值。结果共92例溃疡性结肠炎患者纳入研究,其中缓解组56例(60.87%)、未缓解组36例(39.13%)。缓解组hs-CRP、IL-8、IL-6与未缓解组对比,差异均有统计学意义(P<0.05);两组体重指数、并发症、红细胞沉降率、白细胞、血红蛋白、溃疡性结肠炎内镜下严重程度指数对比,差异均无统计学意义(P>0.05);两组黏膜下层厚度、黏膜下层指数对比,差异均有统计学意义(P<0.05);两组肠壁厚度对比,差异无统计学意义(P>0.05)。将有统计学意义的因素纳入二元多因素logistic回归,提示hs-CRP、IL-8、IL-6、黏膜下层指数是溃疡性结肠炎早期治疗效果的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,hs-CRP、IL-6、黏膜下层指数单独预测溃疡性结肠炎患者早期治疗效果较好,曲线下面积分别为0.769、0.772、0.779,IL-8预测效果一般,曲线下面积为0.678;黏膜下层指数结合hs-CRP、IL-8、IL-6对预测溃疡性结肠炎患者早期疗效的准确性较高(P<0.05)。结论经腹超声黏膜下层指数结合hs-CRP、IL-8、IL-6预测溃疡性结肠炎患者早期治疗效果具有较高价值。

关键词： 单克隆抗体   轻链   肾组织石蜡切片   免疫荧光法  

摘要： 目的:探索单克隆轻链抗体行肾组织石蜡切片染色的临床意义。方法:分析2022年1月至2023年12月在国家肾脏疾病临床医学研究中心住院行自体肾活检的临床病理资料,在8376例肾活检患者中筛选了757例同时行冰冻切片和石蜡切片轻链染色的患者资料,对两种免疫染色的结果进行分析比较。结果:757例患者中284例无冰冻组织或冰冻组织无肾小球,450例冰冻组织和石蜡组织轻链染色结果基本一致,23例冰冻切片单克隆轻链抗体荧光染色结果不能明确沉积物是否为单克隆,而石蜡切片单克隆轻链抗体荧光染色能更好地区分两种轻链的染色强度,得以明确肾脏疾病诊断,包括增生性肾小球肾炎伴单克隆免疫球蛋白沉积10例,系统性轻链型淀粉样变性8例,骨髓瘤管型肾病3例,轻链近端肾小管病2例。结论:本文首次全面分析了轻链染色的质量和应对策略,发现单克隆轻链抗体石蜡切片荧光染色作为冰冻切片荧光染色的补充,具有重要诊断价值,尤其是对于单克隆免疫球蛋白相关肾病。

关键词： 炎症性肠病   肌少症   中性粒细胞/淋巴细胞比值   IL-6   TNF-α  

摘要： 目的探究炎症性肠病(IBD)患者血清中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、IL-6和TNF-α与肌少症的相关性。方法选择2022年4月至2023年10月空军军医大学唐都医院消化内科收治的115例IBD患者作为研究对象,根据患者是否发生肌少症,将其分为肌少症组(n=53)和非肌少症组(n=62)。采用多因素logistic回归模型分析IBD患者发生肌少症的影响因素。采用ROC曲线分析血清NLR、IL-6和TNF-α水平对IBD患者发生肌少症的预测价值。结果与非肌少症组相比,肌少症组有饮酒史者占比、IBD并发症发生率、并发肠穿孔者占比,以及血清中性粒细胞计数、NLR、IL-6和TNF-α水平均较高,而BMI及血清ALT、白蛋白、血红蛋白水平则均较低(P均<0.05)。多因素logistic回归模型分析结果显示,血清NLR、IL-6和TNF-α均是IBD患者发生肌少症的独立危险因素(P均<0.05)。血清NLR、IL-6和TNF-α单独检测预测IBD患者发生肌少症的曲线下面积(AUC)分别为0.734、0.792和0.823(P均<0.05)。结论IBD合并肌少症患者的血清NLR、IL-6和TNF-α水平均较高。血清NLR、IL-6和TNF-α均有望作为诊断及预测IBD患者发生肌少症的生物标志物。

关键词： 白血病,淋巴样   T淋巴细胞亚群   杀伤细胞,天然   BTK抑制剂  

摘要： 目的分析布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂对慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血T细胞亚群和自然杀伤(NK)细胞的影响。方法选取2020年1月至2022年6月浙江省金华市人民医院治疗的62例CLL患者作为研究对象,根据治疗方式的不同分为观察组(30例,BTK抑制剂+常规治疗)和对照组(32例,常规治疗)。比较2组患者疗效、T细胞亚群治疗前后的变化、不良反应事件情况。结果观察组有效率83.3%,高于对照组53.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组CD3^(+)(1402±478)个/μl、CD4^(+)(700±241)个/μl、NK细胞(389±168)个/μl均高于对照组[分别为(1052±272)个/μl、(585±192)个/μl、(302±134)个/μl]。观察组出血(1例)、消化道不适(0例)及不良反应种类数均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BTK抑制剂对CLL患者具有疗效,能够促进外周血T细胞亚群和NK细胞的恢复,改善患者的免疫功能,同时减少部分不良反应,具有较高的临床应用价值。

关键词： 系统性红斑狼疮   继发真菌感染   淋巴细胞亚群   Toll样受体9   Toll样受体2   预测价值  

摘要： 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞亚群和Toll样受体(TLR)9、TLR2表达水平,并分析各指标对继发真菌感染的预测价值。方法 选取南阳市第一人民医院2020年1月-2023年12月收治的80例SLE患者为研究对象。根据患者是否继发真菌感染分为感染组(n=24)与未感染组(n=56),分析两组患者一般资料、外周血淋巴细胞亚群和TLR9、TLR2表达水平,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血淋巴细胞亚群和TLR9、TLR2水平对SLE患者继发真菌感染的预测价值。结果 感染组抗菌药物使用时间(2.15±0.42)周长于未感染组(P<0.001)。感染组TLR9为(11.60±1.28)高于未感染组(P<0.001),感染组CD_(4)^(+)T细胞、CD_(8)^(+)T细胞、总T细胞、总B细胞、TLR2分别为(344.74±69.26)、(338.27±73.21)、(625.42±168.87)、(92.46±17.83)/μl、(42.08±14.09)低于未感染组(P<0.001)。ROC曲线分析显示,外周血CD_(4)^(+)T细胞、CD_(8)^(+)T细胞、总T细胞、总B细胞、TLR9、TLR2对SLE患者继发真菌感染均有预测效能(P<0.05),其曲线下面积(AUC)分别为0.934、0.923、0.909、0.819、0.757、0.784,其中CD_(4)^(+)T细胞≤386.10/μl时预测效能最高,敏感性为83.33%,特异性为91.07%。结论 淋巴细胞亚群与TLR9、TLR2水平可早期预测SLE患者继发真菌感染发生,其中CD_(4)^(+)T细胞水平预测效能最高。