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关键词： 凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物   化学发光检测法   单克隆抗体   辣根过氧化物酶   定量  

摘要： 为了量化凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)的浓度,创建并评估了一种用于检测TAT的化学发光免疫分析法(CLIA)。首先在血浆中提取凝血酶(T)和抗凝血酶(AT),在体外反应生成TAT作为免疫原制备单抗,通过筛选获得1E9、16G4和1D7三株可特异性识别TAT复合物的杂交瘤细胞株。进一步筛选配对后,以单抗16G4偶联生物素作为捕获抗体,1D7标记辣根过氧化物酶作为检测抗体,建立了双抗夹心的检测方法。最佳反应流程为两步法,每步孵育时间为10 min,检测限为0.6 ng/mL,小于25 min即可获得检测结果。测试结果与希森美康试剂盒测试结果之间的强相关性(R^(2)=0.9769),表明试剂对TAT的检测具有等同性。进一步研究中将所有试剂优化并集中于一个单人份的卡条上,结合全自动化学发光分析仪进行定量检测,方便快捷。

关键词： 肝肿瘤   细胞治疗   嵌合抗原受体细胞疗法   治疗   疗效  

摘要： 嵌合抗原受体(CAR)细胞疗法为肝癌治疗提供了新希望,但仍面临多个挑战。首先,肝癌高度异质性导致缺乏理想靶点,使得CAR细胞难以精准识别并有效杀伤肿瘤细胞。其次,肝癌的免疫抑制微环境,如调节性T细胞和髓系抑制细胞,会削弱CAR细胞的功能,进一步影响治疗效果。此外,CAR细胞疗法的安全性问题,如细胞因子释放综合征和神经毒性,也制约其临床应用。最后,CAR细胞疗法的高成本和复杂的生产流程是其普及应用的主要障碍。未来研究应聚焦于优化靶点选择,特别是针对肝癌特异性分子标记的靶点;增强CAR细胞在免疫抑制环境中的耐受性;提高治疗安全性,并简化生产工艺以降低成本。解决这些关键瓶颈将促进CAR细胞疗法在肝癌等实体肿瘤中的广泛应用,推动肝癌治疗的革新。笔者查阅相关文献并结合临床实践,探讨CAR细胞疗法治疗肝癌的前景和挑战,旨在为其临床应用提供新思路。

摘要： Resistance to immune checkpoint inhibitors (ICI) is common, even in tumors with T-cell infiltration. We thus investigated consequences of ICI-induced T-cell infiltration in the microenvironment of resistant tumors. T cells and neutrophil numbers increased in ICI-resistant tumors following treatment, in contrast to ICI-responsive tumors. Resistant tumors were distinguished by high expression of IL1 receptor 1, enabling a synergistic response to IL1 and TNFα to induce G-CSF, CXCL1, and CXCL2 via NF-κB signaling, supporting immunosuppressive neutrophil accumulation in tumor. Perturbation of this inflammatory resistance circuit sensitized tumors to ICIs. Paradoxically, T cells drove this resistance circuit via TNFα both in vitro and in vivo. Evidence of this inflammatory resistance circuit and its impact also translated to human cancers. These data support a mechanism of ICI resistance, wherein treatment-induced T-cell activity can drive resistance in tumors responsive to IL1 and TNFα, with important therapeutic implications. ©2024 American Association for Cancer Research.

关键词： 猪流行性腹泻病毒   S1蛋白   生物信息学   杆状病毒表达   多克隆抗体  

摘要： 以猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S1蛋白为研究对象,构建PEDV S1的杆状病毒系统并稳定表达高纯度的S1蛋白,制备高特异性的S1蛋白多克隆抗体。基于多种基因型PEDV S1基因序列信息,使用生物信息学技术分析其理化特性、跨膜结构域、抗原表位和二级结构等性质。进一步对S1基因序列进行适用于昆虫细胞表达的密码子优化,通过基因合成、载体构建、杆粒转化、细胞培养等步骤,构建适用于表达PEDV S1重组蛋白的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统。通过镍柱亲和层析和超滤技术纯化S1重组蛋白,将其与弗氏佐剂混合乳化后免疫BALB/c小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清)。通过间接免疫荧光(IFA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)等方法,成功证明了本研究所建立的杆状病毒表达系统能够有效地表达S1重组蛋白。ELISA和IFA验证了所得抗体在特异识别PEDV感染Vero细胞方面的有效性。本文成功构建了PEDV S1的杆状病毒表达系统,稳定表达了高纯度的S1蛋白,并制备了具有高特异性的S1蛋白多克隆抗体,为未来猪流行性腹泻单克隆抗体的制备及检测试剂的研发奠定了基础。

关键词： 前列腺健康指数   前列腺癌   PI-RADS评分   前列腺特异性抗原同源异构体2   前列腺特异性抗原   受试者操作特征曲线  

摘要： 目的评价血清前列腺特异性抗原(PSA)位于灰区时(4~10μg/L)前列腺健康指数(PHI)、前列腺影像报告和数据系统(PI-RADS)评分诊断前列腺癌的价值,并建立两者联合诊断前列腺癌的预测模型。方法收集2022年11月—2023年12月在徐州医科大学附属医院泌尿外科行经会阴前列腺穿刺活检的131例患者(血清PSA 4~10μg/L)的临床资料,根据病理结果分为前列腺癌组(35例)和良性前列腺增生组(96例)。应用二元logistic回归分析评估各变量对前列腺癌的预测价值,建立PHI联合PI-RADS诊断前列腺癌的预测模型Logit(P)。建立各独立变量和预测模型Logit(P)的受试者操作特征(ROC)曲线,比较各因素的曲线下面积,选取各因素和预测模型Logit(P)的最佳截断值,评估其诊断效能。结果2组患者的年龄、总前列腺特异性抗原(tPSA)、游离前列腺特异性抗原比值(%fPSA)、前列腺体积差异无统计学意义(P>0.05),PHI、前列腺特异性抗原同源异构体2(p2PSA)、前列腺健康指数密度(PHID)的差异有统计学意义(P<0.05)。tPSA、%fPSA、p2PSA、PHI、PHID诊断前列腺癌的曲线下面积分别为0.565、0.634、0.771、0.812、0.802。PHI与PI-RADS评分联合的预测模型为:Logit(P)=1.117×PI-RADS评分+0.086×PHI-7.886,预测模型Logit(P)的ROC曲线下面积为0.848,显著高于各单一指标,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论PHI在血清PSA 4~10μg/L的前列腺癌患者中诊断效能优于传统的前列腺肿瘤标志物,联合PI-RADS评分建立的联合预测模型的诊断效能高于单一指标,可有效降低前列腺癌的漏诊率,减少不必要的前列腺穿刺。

关键词： 奥雷巴替尼   复发   费城染色体阳性   急性淋巴细胞白血病   儿童  

摘要： 背景儿童费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)复发后预后差,治疗棘手。奥雷巴替尼在Ph+ALL成人患者中显示出良好的疗效,但对儿童患者的疗效和安全性尚不明确。目的评估奥雷巴替尼在复发Ph+ALL患儿中的有效性和安全性。设计病例系列报告。方法回顾性分析2022年1月至2024年7月在北京大学人民医院儿科住院的复发Ph+ALL患儿应用奥雷巴替尼治疗的效果、安全性和转归情况。主要结局指标完全缓解(CR)、微小残留病(MRD)阴性、主要分子学反应(MMR)和完全分子学反应(CMR)。结果8例复发Ph+ALL患儿纳入分析,男6例,女2例,中位年龄9岁,应用奥雷巴替尼前血液学复发3例、分子学复发5例。所有患儿在应用奥雷巴替尼单药或联合化疗治疗1个周期后均为CR,血液学复发的3例患儿MRD阴性获得率100%、MMR获得率66%。分子学复发的5例患儿MRD阴性获得率、MMR获得率和CMR获得率均为100%。中位随访时间13个月,8例患儿均持续为CR,MRD阴性获得率和MMR获得率均为100%,其中CMR获得率75%,随访期间所有患儿均存活。其中,1例患儿为中枢神经系统白血病(CNSL)复发,经过奥雷巴替尼单药及鞘内注射化疗药物1次后,脑脊液MRD阴性并持续为阴性。治疗期间的相关不良反应主要与联合使用的化疗药物有关,单药奥雷巴替尼治疗未出现明显不适,1例患儿因药物不良反应停用奥雷巴替尼。结论对于复发Ph+ALL患儿,奥雷巴替尼单药或联合化疗治疗具有良好的疗效和较高的安全性。

关键词： 北京经济技术开发区   医疗服务价格项目   北京市医疗   人力资源和社会保障局   医疗机构   国家医疗保障   通知   价格  

摘要： 各区医疗保障局、人力资源和社会保障局,北京经济技术开发区社会事业局,各有关医疗机构:按照国家医疗保障局要求,现就调整部分医疗服务价格项目和相关政策有关事项通知如下:一、调整“糖类抗原测定”等8项医疗服务价格项目,附件所列价格为最高指导价格,不得上浮,下浮幅度不限。

关键词： 可替宁   急性呼吸窘迫综合征   磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路   白细胞介素-10  

摘要： 目的探讨可替宁对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺组织的保护作用及其机制。方法32只雄性普通级SD大鼠经适应性饲养3 d后随机分为四组:对照组、ARDS组、可替宁组和可替宁+LY294002组[磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路抑制剂],每组8只。除对照组外,其余组尾静脉注射油酸制备ARDS大鼠模型。模型构建后,可替宁组腹腔注射可替宁,可替宁+LY294002组腹腔注射可替宁+LY294002,对照组和ARDS组腹腔注射生理盐水。观察24 h后,检测四组大鼠动脉血氧分压(PaO_(2)),肺组织病理切片,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测血浆白细胞介素-10(IL-10)的浓度,免疫蛋白印迹分析(Westernblotting)测定肺组织磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的表达水平。结果对照组PaO_(2)为(106.8±6.3)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),ARDS组为(81.6±2.3)mm Hg,可替宁组为(106.2±6.2)mm Hg,可替宁+LY294002组为(84.0±1.7)mm Hg。可替宁组高于ARDS组和可替宁+LY294002组,差异有显著性(P<0.05);与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。对照组IL-10为(54.80±5.55)pg/ml,ARDS组为(45.82±3.32)pg/ml,可替宁组为(54.23±5.64)pg/ml,可替宁+LY294002组为(44.55±1.46)pg/ml。可替宁组高于ARDS组和可替宁+LY294002组,差异有显著性(P<0.05);与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。四组中pAkt灰度值与内参比值的均数:对照组为(0.74±0.05),可替宁组为(0.75±0.05),可替宁+LY294002组为(0.62±0.04),ARDS组为(0.61±0.06)。可替宁组较ARDS组及可替宁+LY294002组灰度值明显增高,差异有显著性(P<0.05);与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论可替宁对ARDS大鼠肺组织有保护作用,其机制可能与通过PI3K-Akt信号通路有效地增加抗炎因子IL-10的浓度有关。

关键词： 胃癌   胃癌前病变   转化生长因子-β   CC趋化因子配体20   干扰素γ   诊断价值   病理特征  

摘要： 目的探讨血清转化生长因子-β(TGF-β)、CC趋化因子配体20(CCL20)、干扰素γ(IFN-γ)对胃癌前病变与胃癌的联合鉴别诊断价值及与病情进展的关系。方法选取2020年8月至2023年1月南阳市中心医院收治的103例胃癌患者作为癌变组,103例胃癌前病变患者作为癌前病变组,比较两组患者的血清TGF-β、CCL20、IFN-γ水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TGF-β、CCL20、IFN-γ对胃癌前病变与胃癌的诊断价值,采用相对危险度分析血清TGF-β、CCL20、IFN-γ与胃癌发生风险的关系,并比较癌变组不同病理特征患者的血清TGF-β、CCL20、IFN-γ水平,采用Spearman相关系数分析血清TGF-β、CCL20、IFN-γ与胃癌病理特征的相关性。结果癌变组患者的血清TGF-β、CCL20水平分别为(40.78±6.44)pg/mL、(44.53±9.18)pg/mL,明显高于癌前病变组的(31.19±4.81)pg/mL、(33.76±6.47)pg/mL,IFN-γ水平为(31.47±10.03)μg/L,明显低于癌前病变组的(50.68±16.22)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清TGF-β、CCL20、IFN-γ诊断胃癌前病变与胃癌的AUC为0.796、0.806、0.810,联合诊断的AUC为0.905,敏感度为84.47%,特异度为83.50%,明显优于各指标单独诊断(P<0.05);相对危险度分析结果显示,血清TGF-β、CCL20β高表达患者的胃癌发生风险分别是低表达患者的2.758倍、3.101倍,IFN-γ低表达患者胃癌发生风险是高表达患者的2.668倍,差异均有统计学意义(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清TGF-β、CCL20水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,IFN-γ水平明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移患者血清TGF-β、CCL20水平高于无淋巴结转移患者,IFN-γ水平明显低于无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05);低分化患者血清TGF-β、CCL20水平明显高于中高分化患者,IFN-γ水平明显低于中高分化患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,血清TGF-β、CCL20与胃癌临床分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与分化程度呈负相关(P<0.05),IFN-γ与胃癌临床分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.05),与分化程度呈正相关(P<0.05)。结论血清TGF-β、CCL20、IFN-γ可作为胃癌前病变与胃癌的辅助诊断指标,联合诊断价值较好,且均与胃癌病理进展密切相关,能为临床诊治提供相关信息。