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关键词： 慢性牙周炎   Pg-OMVs   IL-33   LL-37   NOD1  

摘要： 目的探讨牙龈卟啉单胞菌外膜囊泡(Pg-OMVs)诱导牙龈上皮细胞IL-33的产生及其功能。方法Pg-OMVs刺激相关条件处理后的牙龈上皮细胞,收集细胞RNA并培养上清,RT-PCR和ELISA检测IL-33、NOD1和LL-37的mRNA和蛋白表达。Pg-OMVs经鼻途径免疫BALB/c小鼠,收集小鼠血清和气道灌洗液,ELISA检测IgG和IgA。结果Pg-OMVs内化进入人牙龈上皮细胞,随着外膜囊泡浓度和刺激时间的增加,IL-33的形成也随着增加。NOD1是Pg-OMVs诱导IL-33产生的关键调节分子,IL-33敲低将增加抗菌肽LL-37的分泌。在小鼠实验中,Pg-OMVs联合IL-33能够显著增加血清抗体IgG和气道灌洗液中抗体IgA的形成。结论Pg-OMVs通过NOD1途径诱导IL-33产生,进而抑制LL-37的形成,并且能够促进血清中抗体IgG和气道灌洗液中IgA的形成。

关键词： 肾小球肾炎,膜性   自身抗体   靶抗原   疾病诊断  

摘要： 抗磷脂酶A2受体抗体发现以来,借助不断发展和改进的检验方法学,原发性膜性肾病由最初的依赖肾组织活检穿刺确诊,逐渐演变为部分患者可通过血清学诊断。检测手段的演进和新抗原的发现推动原发性膜性肾病走向个性化诊疗。本文对原发性膜性肾病相关抗原抗体检测方法学做一综述,旨在探讨方法学的优缺点及未来可能的发展方向。

关键词： 巨噬细胞   血吸虫病   肝纤维化   间充质干细胞   M2巨噬细胞极化  

摘要： 【目的】探讨共激活的间充质干细胞(MSCs)是否通过调节巨噬细胞极化发挥治疗血吸虫病的作用。【方法】取20只成年Balb/c雄性小鼠,随机分为四组,分别为未感染组、感染组、MSC组和MSCTLR4+IFN-γ组。通过腹部敷贴尾蚴法建立日本血吸虫感染模型。在感染后第5周,经灌胃给予小鼠吡喹酮进行抗虫治疗;感染后第6周,分别给予不同处理的MSCs治疗或未治疗。每周监测各组小鼠体质量变化率。采用HE染色和Masson染色观察肝组织病理变化,通过RT-q PCR检测肝组织中α-SMA和胶原蛋白m RNA水平,以评估肝纤维化程度;检测肝脏炎症因子和基质金属蛋白酶(MMP)的m RNA水平,分析纤维化相关机制;通过RT-q PCR检测肝组织中i-Nos和Arg-1表达,并利用免疫荧光染色检测M1或M2巨噬细胞的比率,分析MSCs治疗与巨噬细胞极化的相关性;采用体外共培养体系,研究MSCs对巨噬细胞极化的直接调控作用。【结果】与感染组相比,MSCTLR4+IFN-γ组小鼠体质量增加(P<0.01),肝脏虫卵肉芽肿面积显著减少(P<0.001),α-SMA、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ在RNA水平表达下降(P<0.01)。此外,MSCTLR4+IFN-γ组小鼠肝组织中炎症因子TNF-α和IL-1β表达下降(P<0.05),基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和MMP13表达增高(P<0.01)。MSCTLR4+IFN-γ组较感染组显示M2标志物Arg-1 m RNA高表达(P<0.001),而M1标志物i-Nos表达下降(P<0.05);免疫荧光结果显示MSCTLR4+IFN-γ组肝脏i-Nos+细胞比率较感染组显著降低(P<0.05),而F4/80+CD206+细胞比率升高(P<0.0001)。体外共培养实验进一步验证了这一现象:和MSCTLR4+IFN-γ共培养后,骨髓来源巨噬细胞中Arg-1在RNA水平表达升高,且促炎因子i-Nos和TNF-α的表达下降,ELISA结果与之相符。【结论】本研究表明,TLR4与IFN-γ协同激活的MSCs可减轻日本血吸虫感染小鼠的肝纤维化,该作用可能与激活MSCs调节巨噬细胞向M2型极化,发挥抗炎作用并促进肝脏细胞外基质降解相关。

关键词： glycoprotein gp130   HepG2   interleukin-6   mitochondria   non-alcoholic fatty liver disease   oxidative stress  

摘要： Abstract: Objective: The dualistic role of IL-6 in diseases associated with metabolic disorders (including non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) under oxidative stress has been repeatedly demonstrated in various studies. The aim of this work was to investigate the combined effect of IL-6 and glycoprotein 130 (gp130) on cell death pathways and mitochondrial dynamics in the HepG2 cell line in the oxidative stress model. Methods: The HepG2 cell line was used to create a model of oxidative stress in hepatocytes (hepatocytes without any additives are hereafter referred to as control) by adding tert-butyl hydroperoxide (tBHP). IL-6 (variant 1) or IL-6 + gp130 (variant 2) were added to the experimental model of oxidative stress. Cell viability was determined by flow cytometry and the expression and production of key markers of mitochondrial biogenesis, apoptosis, mitophagy and antioxidant defense were analyzed by RT-qPCR and Western blotting, respectively. Results and Discussion: The addition of IL-6 alone (variant 1) increased the relative percentage (%) of viable cells and decreased the number of dead and apoptotic cells. In the cell model, IL-6 contributed to an increase in the expression of the TFAM, MFN2, DNM1L and NF-kB1 genes and the production of MFN2 protein and, on the contrary, led to a decrease in the expression of HSP70, HSF1, BCL2L1 and SQSTM1. The addition of gp130 + IL-6 to the model of oxidative stress in hepatocytes (variant 2) increased the expression of the genes TFAM, MFN2, DNM1L, NF-kB1 and MAPLC3B, while the expression of HSP70, HSF1 and BCL2L1 decreased. Conclusions: Addition of IL-6 to the model of oxidative stress in hepatocytes promotes activation of mitochondrial dynamics, decreases apoptosis and stimulates cell viability, while gp130 mediates stimulation of the expression of genes responsible for mitoautophagy. © Pleiades Publishing, Ltd. 2025.

关键词： 带状疱疹   带状疱疹后神经痛   白细胞介素-18  

摘要： 目的 探讨带状疱疹患者外周血中白细胞介素-18(IL-18)表达水平与带状疱疹后神经痛(PHN)严重程度的相关性并评估其对PHN的早期预警价值。方法 选取2023年9月—2024年8月于安徽省立医院皮肤科就诊的403例带状疱疹患者作为观察组,同期226例体检者作为对照组。记录研究对象一般资料,3个月后随访评估带状疱疹患者PHN发生情况及严重程度,根据是否出现PHN分为PHN组(157例)和非PHN组(246例),比较各组外周血IL-18水平的差异。采用单因素和多因素logistic回归分析筛选PHN的危险因素,采用Spearman等级相关分析法探讨PHN严重程度与IL-18的相关性,采用ROC曲线评价IL-18对PHN的预测价值。结果 带状疱疹患者外周血IL-18水平显著高于对照组(P<0.05);随着PHN严重程度逐渐加重,外周血IL-18水平较非PHN组显著升高(P<0.001)。多因素logistic回归分析结果显示,IL-18水平高、女性、年龄大、合并糖尿病、合并心血管疾病、急性期VAS评分高为PHN的独立危险因素,14 d内使用止痛药物为PHN的保护因素。Spearman分析显示,PHN严重程度与IL-18水平呈正相关关系(r=0.661,P<0.001)。ROC曲线显示,IL-18预测PHN发生的AUC为0.857,灵敏度为83.9%,特异度为76.8%,最佳截断值为1 233.6 pg/mL。结论 带状疱疹患者急性期外周血IL-18水平与PHN严重程度密切相关,IL-18水平高是PHN的危险因素之一,对PHN具有良好的早期预警价值。

关键词： 吴茱萸碱(EVO)   免疫抑制剂   细胞周期   细胞因子   流式细胞术  

摘要： 目的探究吴茱萸碱(EVO)对活化T细胞增殖的抑制特性。方法采用密度梯度离心法从健康供体中提取外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠法纯化T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化T细胞。以不同浓度的EVO(0.37、1.11、3.33、10)μmol/L作用于T细胞。流式细胞术测定T细胞增殖率、凋亡率、存活率、CD25表达水平以及细胞周期分布。ELISA分析细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL-17A、IL-4和IL-10的表达水平。结果(1.11、3.33、10)μmol/L EVO能有效抑制活化T细胞增殖,其半数抑制浓度(IC 50)为(1.5±0.3)μmol/L。EVO不诱导活化T细胞凋亡,且不影响静息T细胞的存活率。EVO不影响活化T细胞CD25的表达及IL-2的分泌。EVO阻滞T细胞周期于G2/M期,使G2/M期细胞增加,且具有浓度-效应关系。EVO不影响活化T细胞分泌IL-4、IL-10,但显著抑制IL-17A的分泌。结论EVO对T细胞的活化过程无显著影响,但可通过阻滞细胞周期于G2/M期,从而抑制T细胞的增殖,并显著抑制促炎因子IL-17A的分泌。提示EVO有望作为先导物,促进低毒高效性免疫抑制剂的研发,并有助于阐释传统中药吴茱萸在抗炎及免疫调节中的作用机制。

关键词： SiO_(2)   矽肺   细胞因子   外泌体  

摘要： 目的构建小鼠矽肺模型,在动物实验中开展矽肺生物标志物的研究。方法通过气管滴注二氧化硅构建矽肺小鼠模型,在第28天收集小鼠血浆和肺组织,采用肺组织HE染色观察肺纤维化的程度,采用蛋白质印记的方法检测纤维化指标α平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白1(Fibronectin1,FN1)的相对表达量,采用液相芯片技术在小鼠血浆中检测细胞因子CXCL2、CXCL10、血小板衍生生长因子-AB(Platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB)的水平。提取小鼠血浆外泌体,通过平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)方法验证从矽肺人群血浆外泌体中筛选出的差异表达蛋白。结果HE染色结果显示,矽肺模型组肺组织有明显的纤维化病变,Ashcroft评分显著高于对照组(t=9.971,P<0.01),肺组织中α-SMA和FN1表达水平显著高于对照组(t=3.770,P<0.05;t=9.128,P<0.01);在透射电镜下小鼠血浆外泌体呈现均匀的杯型,纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)分析显示其平均直径为101.5 nm,Western blot检测到外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(Tumor susceptibility gene 101,TSG101)、脂筏蛋白(Flotillin)和Alix呈阳性,钙联蛋白(Calnexin)呈阴性;小鼠血浆细胞因子检测结果显示,矽肺模型组的小鼠血浆中CXCL2的浓度高于对照组,CXCL10的浓度显著升高(t=4.461,P<0.01),PDGF-AB的浓度升高(t=3.549,P<0.01)。PRM分析显示,血浆外泌体蛋白载脂蛋白C1(Apolipoprotein C1,APOC1)(t=3.207,P<0.01)、载脂蛋白A2(Apolipoprotein A2,APOA2)(t=2.449,P<0.05)、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4(inter-alpha-trypsin inhibitor H4,ITIH4)(t=2.468,P<0.05)、分泌型磷蛋白2(Secreted phosphoprotein 2,SPP2)(t=2.231,P<0.05)和玻连蛋白(Vitronectin,VTN)(t=3.206,P<0.01)的表达水平低于对照组。蛋白质印记结果显示外泌体蛋白ITIH4的表达量在矽肺模型组显著低于对照组(t=3.084,P<0.05)。结论矽肺模型组小鼠血浆中的细胞因子CXCL10、PDGF-AB的浓度显著高于对照组,血浆外泌体蛋白APOC1、APOA2、ITIH4、SPP2和VTN显著低于对照组,它们可能具有成为矽肺生物标志物的潜能。

关键词： 慢性乙型肝炎   干扰素   杀伤细胞凝集素样受体亚家族B成员1   程序性死亡受体1   治疗  

摘要： 目的探究程序性死亡受体1(PD-1)、CD161在聚乙二醇干扰素α(PEG-IFN-α)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中的表达情况,并探讨PD-1和CD161在治疗中的作用及其与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)下降程度的相关性。方法回顾性队列研究。纳入2022年7月至2023年12月于西安交通大学第二附属医院就诊的CHB患者及同期健康对照受试者,收集IFN治疗组(31例)、非IFN治疗组(30例)以及健康对照组(30名)的外周血样。通过流式细胞术检测3组的CD8^(+)、PD-1^(+)、CD161^(+)T淋巴细胞及其亚群,比较各组细胞亚群比例,并通过Kruskal-Wallis检验和Mann-Whitney U检验分析各组间的差异。依据PD-1^(+)淋巴细胞、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞、CD161^(+)淋巴细胞水平将IFN治疗组患者分别分为高、低水平两组,比较两组患者HBsAg下降幅度。结果IFN治疗组PD-1^(+)淋巴细胞及CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例显著高于健康对照组和非IFN治疗组(P<0.001);且IFN治疗组48周患者的PD-1^(+)淋巴细胞[IFN治疗组48周:24.3(23.7,28.0)%,非IFN治疗组:12.7(10.0,18.5)%,P<0.01]及CD8^(+)PD-1^(+)T细胞[IFN治疗组48周:29.29(26.73,32.98)%,非IFN治疗组:17.69(9.62,20.68)%,P<0.05]比例均高于非IFN治疗组患者。IFN治疗24及48周患者的CD8^(+)CD161^(+)T细胞比例显著低于非IFN治疗组(P<0.05),与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。在IFN治疗组中,PD-1及CD8^(+)PD1^(+)淋巴细胞高水平患者的HBsAg下降幅度显著低于低水平患者,而CD161水平与HBsAg下降幅度之间无显著相关性[PD-1^(+)淋巴细胞:0.15(0.02,0.18)log_(10)IU/mL比0.32(0.13,0.42)log_(10)IU/mL,P<0.01;CD8^(+)PD-1^(+)T细胞:0.16(0.03,0.17)log_(10)IU/mL比0.34(0.13,0.44)log_(10)IU/mL,P<0.05]。结论PEG-IFN-α治疗显著调节了CHB患者外周血中CD8^(+)PD-1^(+)T细胞和CD8^(+)CD161^(+)T细胞的比例,揭示了T细胞免疫活化状态在抗病毒治疗过程中的重要作用。PD-1的高表达与HBsAg下降速度缓慢密切相关,提示PD-1在T细胞耗竭和免疫逃逸过程中可能存在负性调控。

关键词： 613-225-3248-9559-9794-11285   613-225-2782   613-225-2577-2545   613-302-312-5322   261-566-9263   613-225-325   7   3   2   299   38092-25044  

关键词： 肝细胞癌   细菌外膜囊泡   细胞穿膜肽   口服疫苗  

摘要： 目的:利用负载肿瘤抗原的细菌外膜囊泡(OMVs)作为口服疫苗,以探究其抑制肝细胞癌的效果。方法:首先,利用超速离心法收集益生菌EcN 1917来源的OMVs,并通过电镜和DLS表征其形态及粒径;其次,利用考染和流式检测TAT介导蛋白负载于OMVs内部的效率及抗胃蛋白酶消化的能力;利用transwell实验模拟肠上皮屏障,评估OMVs透过肠上皮屏障诱导树突状细胞(DC)活化的能力;最后,在表达模式识别抗原OVA的小鼠肝细胞癌皮下瘤Hepa1-6-OVA模型上,评估经口服OMVOVA疫苗诱导的肿瘤特异性免疫应答效应。结果:OMV为球形脂质双层纳米囊泡,平均直径为37.8 nm;流式检测结果显示:TAT细胞穿膜肽可介导GFP荧光报告蛋白在OMVs内部高效负载并可保护GFP蛋白不被消化降解;体外模拟肠上皮实验结果证明:OMVs可穿过肠上皮屏障并激活DC,上调共刺激分子CD80/CD86表达(t=5.571、57.64,均P<0.01);在表达OVA抗原的Hepa1-6肝细胞癌皮下瘤小鼠模型中,口服OMVOVA可有效抑制肿瘤生长,肿瘤体积(t=4.288,P<0.01)和肿瘤质量(t=5.812,P<0.01)均显著降低,肠系膜淋巴结中DC活化(t=10.08,P<0.01)及对抗原肽的提呈(t=5.853,P<0.01)均显著增高,显著激活抗原特异性T细胞数量(t=7.863,P<0.01)。结论:口服内部负载肿瘤抗原肽新型OMV疫苗,可有效抑制小鼠肝细胞癌皮下瘤生长,激活黏膜免疫诱导抗原特异性免疫应答。