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关键词： CD36   单克隆抗体   血小板清除   Fc依赖  

摘要： 目的探讨CD36抗体在体内介导血小板吞噬清除的作用机制。方法将单克隆抗体(mAb)32-106(IgG2a)以2 mg/kg的浓度注射给C57BL/6J雌鼠,并分别在注射前0 h、注射后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h及24 h检测小鼠体内血小板数量,通过胃蛋白酶消化处理,获得32-106的F(ab')_(2)段,并将其注射给C57BL/6J雌鼠,分析其清除CD36(+)血小板的效果,制备其他亚型的32-106,通过体内实验分析其对CD36(+)血小板的清除作用。结果体内实验证实,mAb 32-106 IgG2a可导致C57BL/6J雌鼠体内血小板数的明显降低(P<0.05),而mAb 32-106的F(ab')_(2)段并不引起雌鼠体内血小板的减少。C57BL/6J雌鼠接受2 mg/kg的32-106 IgG1或32-106 IgG3,也发生血小板数量降低,但与32-106 IgG2a相比,IgG1及IgG3亚型32-106引起的小鼠血小板减少不明显。结论通过体内实验证实,CD36抗体以Fc依赖途径参与体内CD36(+)血小板的清除,且IgG2a亚型的抗体引起的血小板清除效果显著。

关键词： 牛冠状病毒   核衣壳蛋白   多克隆抗体   藏药   病毒复制  

摘要： 本研究旨在筛选出对牛冠状病毒(BCoV)体外复制具有抑制效应的藏药。构建BCoV核衣壳(N)蛋白原核表达载体,诱导表达后将纯化的蛋白分别免疫小鼠和兔,获得鼠抗和兔抗N蛋白多克隆抗体,建立用于测定BCoV复制的Western blot和间接免疫荧光法(IFA);水煎法获得21种候选藏药的水提物,CCK-8法测定水提物对人结直肠腺癌细胞(HCT-8)的最大安全浓度,以BCoV感染HCT-8细胞为研究对象,分别设置BCoV感染组、藏药水提物处理组、利巴韦林处理组,在BCoV感染24 h后分别应用实时荧光定量PCR、Western blot、IFA测定细胞中BCoV复制量,统计分析藏药水提物对病毒复制的抑制作用,筛选对BCoV具有显著抑制作用的藏药。结果显示:分别制备鼠抗与兔抗BCoV N蛋白多克隆抗体,建立了检测BCoV的Western blot与IFA方法;21种藏药中的15种具有显著抑制BCoV复制效应(P<0.01),其中青藏大戟、诃子、瑞香狼毒3种藏药对BCoV复制的抑制作用优于利巴韦林。本研究筛选到15种对BCoV体外复制具有抑制效应的藏药,其中青藏大戟、诃子、瑞香狼毒3种藏药抑制作用效果显著,为BCoV防治药物的开发奠定了基础。

关键词： 脑膜癌   MRI   清蛋白   免疫球蛋白   诊断  

摘要： 目的 分析血清清蛋白与免疫球蛋白联合MRI对脑膜癌的诊断价值。方法 选取疑似脑膜癌患者100例,经脑脊液细胞学检查确诊为脑膜癌66例(脑膜癌组),非脑膜癌34例(非脑膜癌组)(其中结核性脑膜炎20例,原发性颅内肿瘤13例,其他1例)。比较两组血清清蛋白与免疫球蛋白水平,ROC曲线分析MRI联合血清清蛋白、免疫球蛋白对脑膜癌的诊断价值。结果 脑膜癌组ALB水平低于非脑膜癌组(P<0.05),IgG、IgM高于非脑膜癌组(P<0.05),两组IgA比较,P>0.05;ALB最佳阈值为36.125 g/L,灵敏度为0.735,特异度为0.788;IgG最佳阈值为8.765 g/L,灵敏度为0.803,特异度为0.676;IgM最佳阈值为1.58 g/L,灵敏度为0.652,特异度为0.676;MRI联合血清清蛋白与免疫球蛋白对脑膜癌诊断灵敏度为93.94%(62/66)、阴性预测值为87.50%(28/32),均高于单一诊断指标(P<0.05)。结论 MRI联合血清清蛋白与免疫球蛋白可以显著提高脑膜癌病的诊断灵敏度和阴性预测值,具有很高的临床应用价值。

关键词： 莱茵衣藻   ChR2   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 【目的】制备一支莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii,***)光敏通道蛋白2(ChR2)多克隆抗体,研究ChR2在鞭毛内通过感应光信号来影响细胞趋光性的应答机制。【方法】将构建的表达载体pET-28a(+)-chr2转化至大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达6×His-ChR2融合蛋白,用镍柱对其进行亲和纯化。以此融合蛋白作为抗原进行动物免疫,产生相应抗体,再采用Protien A处理抗血清,使得抗体富集,获得纯度较高的莱茵衣藻ChR2多克隆抗体。通过免疫印迹检测莱茵衣藻ChR2多克隆抗体的特异性,并通过免疫荧光试验来确定ChR2在鞭毛中的位置。【结果】6×His-ChR2融合蛋白纯化结果表明其纯度>85%;间接ELISA法检测莱茵衣藻ChR2多克隆抗体的效价为1∶25600;在野生型莱茵衣藻CC-125细胞的全蛋白质提取物中出现了目的条带(相对分子质量93000),而在突变型莱茵衣藻CC-5499(chr1和chr2双基因敲除的突变体)细胞的全蛋白质提取物中未出现目的条带,说明所得到的莱茵衣藻ChR2多克隆抗体特异性较高;ChR2定位于莱茵衣藻细胞的眼点和鞭毛。【结论】该研究为后续探索ChR2在鞭毛内通过感应光信号影响细胞趋光性的机制奠定了基础。

关键词： 猫传染性腹膜炎病毒   N蛋白   单克隆抗体   竞争ELISA  

摘要： 为建立抗猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)抗体竞争ELISA检测方法,应用原核表达FIPV截短N蛋白[rFIPV N(aa17-172)]免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和间接ELISA方法筛选能稳定分泌针对重组N蛋白(17-172 aa)的杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化和鉴定。以重组N蛋白为抗原,纯化后的单克隆抗体为一抗建立抗体竞争ELISA方法。试验结果显示,纯化后重组N蛋白浓度为0.5 mg/mL,纯度大于85%,将其作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出3株单克隆杂交瘤细胞株,命名为5C5、1F8和4A10。纯化的3株单克隆抗体效价均高于1∶102400。间接免疫荧光试验结果显示,3株单克隆抗体均能与FIPV发生特异性反应。抗体竞争ELISA方法最佳包被抗原浓度为1.25μg/mL,最佳抗体工作浓度为1∶128000。通过检测本实验室保存的94份FIPV阴性血清,确定本研究建立的抗体竞争ELISA方法阳性阻断率≥20.1%,阴性阻断率≤15.9%。对62份猫血清和本实验室前期建立的FIPV抗S蛋白的抗体竞争ELISA方法进行符合率比较,两种方法符合率为85.5%。本研究建立的抗N蛋白抗体竞争ELISA方法可用于FIPV抗体的检测,为FIP诊断提供了技术支撑。

关键词： 淋巴细胞百分比   心力衰竭   老年人  

摘要： 目的分析淋巴细胞百分比(lymphocyte percentage,LYM%)与老年慢性心力衰竭(heart failure,HF)患者发病之间的相关性。方法纳入2020年10月—2021年10月在同济大学附属同济医院心脏康复科住院治疗的老年HF患者79例(HF组)及同期无心力衰竭患者130例(对照)组。通过医院信息数据库电子病历系统回顾患者临床资料,包括人口统计学数据、诊断信息、住院24 h内的化验室数据等。应用Spearman相关性分析评估各个危险因素与老年HF之间的相关性,绘制ROC曲线分析评估LYM%对老年HF的预测价值,根据ROC最佳截断值将患者分为高LYM%组(LYM%≥20.75%)和低LYM%组(LYM%<20.75%)后分别进行单因素及多因素Logistic回归分析,明确LYM%是否为老年HF的危险因素。结果Spearman相关性分析显示,LYM%与HF呈负相关(r=-0.409,P<0.001);年龄、冠心病、心房颤动、感染及中性粒细胞百分比(r=0.425,0.190,0.368,0.344,0.377,P<0.05)与HF呈正相关。ROC曲线分析显示,ROC曲线下面积为0.742(95%CI:0.6710.813),LYM%的最佳截断值为20.75%,相应诊断灵敏度为83.8%,特异度为59.5%。多因素Logistic回归分析显示,LYM%与老年HF发病存在统计学意义(OR=6.048,95%CI:1.8319.991,P=0.003)。结论LYM%是老年HF患者发病的独立预测因素,具有显著的诊断价值。其检测简便、经济高效,适合作为老年HF的早期识别和诊断工具。

关键词： 卵巢癌   癌胚抗原   糖类抗原125   人附睾蛋白4   淋巴结转移   预后  

摘要： 目的分析卵巢癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)水平及其与淋巴结转移、预后的关系。方法回顾性分析2020年6月至2021年6月期间在开封市中心医院接受治疗的卵巢癌患者106例患者为卵巢癌组,另选取同期106例女性健康体检正常者为健康对照组,并对卵巢癌患者随访3年,根据预后情况分为死亡组、存活组。比较卵巢癌组与健康对照组血清CEA、CA125、HE4水平;分析血清CEA、CA125、HE4水平与淋巴结转移的关系;用多因素COX回归分析卵巢癌患者预后的影响因素。结果卵巢癌组血清CEA、CA125、HE4水平均高于健康对照组(t=33.791,P<0.001;t=58.746,P<0.001;t=50.168,P<0.001)。卵巢癌淋巴结转移淋巴结转移组血清CEA、CA125、HE4水平均高于未转移组(t=4.604,P<0.001;t=3.728,P<0.001;t=5.081,P<0.001)。卵巢癌死亡组血清CEA、CA125、HE4水平均高于存活组(t=7.232,P<0.001;t=5.532,P<0.001;t=8.957,P<0.001)。卵巢癌死亡组与存活组FIGO分期、淋巴结转移比较差异有统计学意义(χ^(2)=9.349,P=0.002;χ^(2)=9.127,P=0.003)。CEA、CA125、HE4、FIGO分期、淋巴结转移均是影响卵巢癌患者预后生存的独立危险因素。结论CEA、CA125、HE4在卵巢癌患者血清中呈高表达,与患者淋巴结转移、预后关系密切。

关键词： 唑来膦酸   围绝经期   骨质疏松   骨密度   运动能力   炎症细胞因子  

摘要： 目的探讨唑来膦酸联合磷酸钙D_(3)与骨化三醇对围绝经期骨质疏松患者骨密度、运动能力及炎症细胞因子的影响。方法选取2020年3月—2022年3月浙江中医药大学附属温州市中医院收治的180例围绝经期骨质疏松患者为研究对象,按照治疗方式的不同将其分为对照组(碳酸钙D_(3)和骨化三醇治疗)与观察组(在对照组基础上接受唑来膦酸治疗),每组90例。比较两组患者骨密度、运动能力、炎症细胞因子及疗效。结果治疗前,两组患者骨密度比较,差异无统计学意义(P>0.05);经治疗后,两组患者的骨密度均有所增加(P<0.05),其中唑来膦酸组患者的股骨颈骨密度(0.79±0.12)g/cm^(2)、腰椎骨密度(0.80±0.15)g/cm^(2)较对照组患者的股骨颈骨密度(0.74±0.15)g/cm^(2)、腰椎骨密度(0.75±0.13)g/cm^(2)增幅更明显(t_(股骨颈)=2.469、t_(腰椎)=2.390,均P<0.05)。治疗前,两组患者的运动能力比较,差异无统计学意义(P>0.05);经治疗后,两组患者的Berg平衡量表(BBS)、FuglMeyer运动功能评定量表(FMA)评分皆有所提升(P<0.05),且唑来膦酸组患者的BBS评分(44.07±6.04)分、FMA评分(79.34±6.27)分较对照组患者的BBS评分(41.74±6.58)分、FMA评分(77.42±6.13)分提升更为明显,差异均有统计学意义(t_(平衡功能)=2.475、t_(运动功能)=2.077,均P<0.05)。治疗前,两组患者的炎症细胞因子水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);经治疗后,两组患者的C-反应蛋白(CRP)及白细胞介素-6(IL-6)均呈现下降趋势(P<0.05),且唑来膦酸组患者的CRP(23.96±4.38)mg/L及IL-6(4.47±1.36)ng/L与对照组患者的CRP(25.37±4.16)mg/L及IL-6(4.93±1.20)ng/L相比降幅尤为突出,差异均有统计学意义(t_(CRP)=2.214、t_(IL-6)=2.406,均P<0.05)。与对照组患者的总有效率(86.67%)相比,唑来膦酸组患者的总有效率(95.56%)明显更高,差异有统计学意义(χ^(2)=4.390,P<0.05)。结论唑来膦酸联合碳酸钙D_(3)与骨化三醇治疗围绝经期骨质疏松,通过多途径、多靶点的综合作用,能够显著提高患者的骨密度和运动能力,唑来膦酸对破骨细胞活性的抑制、碳酸钙D_(3)的免疫调节作用及骨化三醇对骨代谢的改善作用降低围绝经期骨质疏松患者的炎症细胞因子水平,这一治疗方案疗效显著。

关键词： 白血病   转铁蛋白受体单克隆抗体   纳米载药系统   细胞凋亡率   预后情况  

摘要： 目的 观察转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)纳米载药系统辅助靶向治疗白血病的临床效果。方法 该次研究为前瞻性研究,选取2020年5月至2022年12月期间商丘市第一人民医院收治的白血病患者中随机抽取85例,分组方式为电脑随机分组法,将入组患者分别列为靶向组(42例)和联合组(43例),两组患者均接受靶向治疗,联合组采用TfR mAb纳米载药系统辅助靶向治疗,所有患者开展为期1年随访,比较两组患者的近期疗效及短期预后情况。结果 在不同治疗方案下,联合组治疗7 d、14 d、21 d后的人早幼粒白血病细胞(HL-60)凋亡率分别为(20.45±5.18)%、(23.36±5.47)%、(26.33±5.45)%,均高于靶向组[(18.45±3.23)%、(20.47±5.11)%、(23.44±5.23)%](P<0.05);联合组的总缓解率[86.05%(37/43)]高于靶向组[66.67%(28/42)](P<0.05);联合组的T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)表达水平分别为(65.75±10.33)%、(70.24±10.31)%、(1.77±0.26),均高于靶向组[(60.35±10.44)%、(65.22±10.38)%、(1.24±0.72)](P<0.05);随访期间,联合组的中位无进展生存期(PFS)、中位总生存期(OS)分别为(9.36±1.45)个月、(10.41±2.25)个月,均高于靶向组[(8.41±1.25)个月、(9.33±1.72)个月](P<0.05);1年内病情复发率及死亡率分别为6.98%(3/43)、2.33%(1/43),均低于靶向组[28.57%(12/42)、21.43%(9/42)](P<0.05)。结论 TfR mAb纳米载药系统能增强白血病患者的靶向治疗效果,对促进HL-60细胞凋亡、改善机体免疫功能、延长患者生存周期并降低病情复发或死亡风险均有重要意义。

关键词： IL12RB1变异   免疫缺陷症   马尔尼菲篮状菌   感染  

摘要： 白细胞介素12受体β1亚基(IL-12Rβ1)缺失是一种罕见的常染色体隐性遗传免疫缺陷症,属于孟德尔遗传易感分枝杆菌病。IL-12Rβ1的突变会导致IL-12和IL-23介导的信号通路异常,进而引起以免疫功能降低、缺如或免疫调节功能失衡为特点的遗传性疾病,通常这类患者更易发生反复感染,尤其以结核分枝杆菌感染最常见。先天性免疫缺陷合并马尔尼菲篮状菌(talaromyces marneffei,TM)感染的病例报道较少,检索文献国内报道病例数不足20例,现报告1例IL12RB1基因变异相关的免疫缺陷合并TM感染的患儿,从其临床特点、诊治过程及疾病预后进行回顾性分析,以期提高此类患儿的诊治水平,改善预后。