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关键词： 扶正化瘀方   肝纤维化   淋巴细胞  

摘要： 目的探讨扶正化瘀方对肝纤维化小鼠外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBL)及肝内淋巴细胞(intrahepatic lymphocyte,IHL)亚群的影响。方法C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组(9只)和造模组(18只),造模组给予高脂饮食同时予以2 mL/kg体质量的剂量腹腔注射10%CCl_(4),正常组小鼠等量橄榄油腹腔注射。第3周将造模组分为模型组、扶正化瘀方组。造模同时,扶正化瘀方组小鼠给予扶正化瘀方(0.5 g干粉溶于20 mL ddH_(2)O,剂量为20 mL/kg)灌胃,正常组和模型组以等剂量双蒸水灌胃,均1次/d,共4周。第6周末麻醉处死小鼠,检测血清肝功能,HE、天狼猩红染色评价小鼠肝损伤及纤维化程度,肝组织冰冻切片免疫荧光染色观察CD_(4)^(+)T、CD_(8)^(+)T、NK定位。取小鼠外周血及肝组织制备单个核细胞悬液,用多色流式细胞术检测外周血及肝脏淋巴细胞亚群分布。结果扶正化瘀方能改善CCl_(4)联合高脂饮食诱导的模型小鼠肝功能,减轻肝组织炎症损伤和胶原沉积。免疫荧光染色表明CD_(4)^(+)T、CD_(8)^(+)T、NK细胞均向纤维间隔浸润,沿纤维间隔分布。与正常组相比,模型组小鼠外周血CD_(8)^(+)T显著升高[0.34(0.16 vs 0.59(0.27,P<0.05)],CD_(4)^(+)T/CD_(8)^(+)T、NK/CD_(8)^(+)T显著减少[(1.97±0.62)vs(1.46±0.17)、(4.45±1.41)vs(1.80±0.96),均P<0.05],肝内CD_(8)^(+)T显著升高[(3.70±1.21)vs(6.42±2.41),P<0.05],CD_(4)^(+)T/CD_(8)^(+)T显著减少[(1.05±0.14)vs(0.84±0.20),P<0.05];经扶正化瘀方治疗后,小鼠外周血中CD_(8)^(+)T较模型组显著减少[(0.37±0.16)vs(0.59±0.27),P<0.05],外周血NK、CD_(4)^(+)T/CD_(8)^(+)T、NK/CD_(8)^(+)T较模型组明显增加[(1.63±0.59)vs(0.96±0.30)、(1.73±0.36)vs(1.46±0.17)、(5.30±2.24)vs(1.80±0.96),P<0.05]。同时肝内NK、CD_(4)^(+)T/CD_(8)^(+)T、NK/CD_(8)^(+)T也较模型组明显增加[(4.35±0.98)vs(2.73±0.73)、(1.00±0.13)vs(0.84±0.20)、(0.73±0.21)vs(0.48±0.24),P<0.05]。结论扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制可能与通过减少肝纤维化小鼠外周血中CD_(8)^(+)T比例,升高外周血及肝内NK、CD_(4)^(+)T/CD_(8)^(+)T、NK/CD_(8)^(+)T有关。

关键词： 血管性血友病因子   免疫比浊法   全自动血凝分析仪   性能验证  

摘要： 目的对Sysmex CS-5100全自动凝血分析仪(简称CS-5100)检测血管性血友病因子(vWF)抗原(Ag)及活性(Ac)的性能进行验证及评估。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件、WS/T406-2012、医学实验室质量和能力认可准则和厂家要求分别对德国Siemens厂家生产的免疫比浊法检测试剂盒vWF:Ag和vWF:Ac在CS-5100分析仪上的精密度、准确度、线性范围、携带污染、最大稀释度、参考区间、仪器间比对等性能进行验证。结果vWF:Ag的批内精密度为1.07%、2.71%,日间精密度为1.72%、3.95%,vWF:Ac的批内精密度为1.56%、3.56%,日间精密度为4.55%、5.49%;准确度验证结果在允许范围内;vWF:Ag线性范围为73.80%~171.05%(Y=0.996 X+1.0265,a=0.996,R^(2)=0.999),vWF Ac正常活性线性范围为35.43%~132.37%(Y=0.9982 X+1.6144,a=0.998,R^(2)=0.999),vWF:Ac低值活性线性范围为4.35%~29.93%(Y=0.9973 X+0.1511,a=0.9973,R^(2)=0.999);vWF;Ag携带污染率为0.55%,vWF:Ac携带污染率为0.17%;vWF:Ag和vWF:Ac的最大稀释度为1∶8;Siemens厂家生产的试剂盒提供参考范围适用于本实验室;CS-5100与ACL TOP700仪器间比对结果相关性较好,R^(2)>0.95符合验证要求。结论德国Siemens厂家生产的免疫比浊法检测试剂盒vWF:Ag和vWF:Ac在CS-5100分析仪上检测结果可靠、准确,具有良好的检测性能,能满足临床实验室工作需求。

关键词： 多重微球流式免疫荧光法   细胞因子   参考区间  

摘要： 目的:基于多重微球流式免疫荧光法(MBFFI)初步建立成人血浆12种细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、IFN-α、TNF-α)的参考区间。方法:收集2022年1月至2023年12月于徐州市中心医院体检的140例健康成人血浆标本,采用流式细胞仪、青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司以及泰州谱迪生物科技有限公司试剂盒分别检测血浆中12种细胞因子的水平,并建立参考区间。结果:12种细胞因子均呈非正态分布,而且两家检测试剂95%参考区间存在差异。青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司生产的12项细胞因子试剂盒参考区间为IFN-α:<4.91 pg/ml、IL-12 p70:<1.95 pg/ml、IL-5:<12.72 pg/ml、IL-8:<60.68 pg/ml、IL-1β:<27.67 pg/ml、IL-2:<5.01 pg/ml、IL-4:<1.22 pg/ml、IL-6:<6.11 pg/ml、TNF-α:<2.92 pg/ml、IL-17:<10.27 pg/ml、IL-10:<6.88 pg/ml、IFN-γ:<17.68 pg/ml;泰州谱迪生物科技有限公司生产的12项细胞因子试剂盒参考区间为:IFN-α:<4.05 pg/ml、IL-12 p70:<7.33 pg/ml、IL-5:<7.80 pg/ml、IL-8:<13.24 pg/ml、IL-1β:<19.24 pg/ml、IL-2:<2.42 pg/ml、IL-4:<0.99 pg/ml、IL-6:<2.10 pg/ml、TNF-α:<0.87 pg/ml、IL-17:<1.42 pg/ml、IL-10:<1.10 pg/ml、IFN-γ:<1.34 pg/ml。结论:本研究应用MBFFI初步建立了两家试剂检测健康成人血浆12种细胞因子的参考区间,为临床相关疾病的诊治提供了重要参考。

关键词： 艾滋病   肺结核   抗逆转录病毒   康复新液   T淋巴细胞  

摘要： 目的:探究抗逆转录病毒治疗基础上联合康复新液治疗艾滋病合并肺结核的临床效果及其对患者CD4^(+)T淋巴细胞的改善作用。方法:选取2021年1月—2022年12月赣州市第五人民医院收治的艾滋病合并肺结核患者80例,按照随机数字表法将其分为两组,各40例。对照组给予抗逆转录病毒治疗。观察组在对照组基础上给予康复新液治疗。比较两组治疗结果、肝功能指标、血常规、体重指数、血浆CD4^(+)T淋巴细胞数与人类免疫缺陷病毒(HIV)-核糖核酸(RNA)水平。结果:两组治疗后6个月的抗结核治疗结果经比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后12个月时的抗逆转录病毒治疗结果显示,观察组临床失败、免疫学失败占比均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4、6、8、10、12、14、16、18周后观察组的CD4^(+)T淋巴细胞数均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗8、16周后两组肝功能指标、血常规、体重指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗18周时观察组血浆HIV-RNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗逆转录病毒治疗基础上联合康复新液治疗艾滋病合并TB患者的临床效果较好,并且具有改善患者CD4^(+)T淋巴细胞的作用和良好的耐受性。

关键词： 多重微球流式荧光免疫技术   脑脊液   IL-10   参考区间  

摘要： 目的:探讨采用多重微球流式荧光免疫技术(MBFFI)检测成人脑脊液IL-10水平的医学参考区间。方法:纳入743例非肿瘤性疾病患者,根据罹患疾病分为8组。采用MBFFI同时检测CSF及血浆IL-10水平。结果:(1)颅内感染组CSFIL-10水平明显高于其他组。(2)选择不合并肿瘤性疾病、感染或炎症性疾病的静脉窦血栓(CVST)组作为近似正常人群的医学参考区间。250例CVST患者脑脊液IL-10水平呈偏态分布,取95%界值作为上限,即CSF IL-10<3.50 pg/ml为医学参考区间。(3)CVST组患者,CSF IL-10水平与血浆IL-10水平无相关性。结论:本研究建立了MBFFI检测成人CSF IL-10的医学参考值区间,即<3.50 pg/ml,可供临床参考应用。

关键词： 补中益气汤   自身免疫性甲状腺炎   PI3K/AKT/PTEN信号通路   免疫代谢   Th17细胞  

摘要： 目的基于PI3K/AKT/PTEN信号通路探讨补中益气汤调控Th17细胞免疫代谢异常改善自身免疫性甲状腺炎(AIT)的作用机制研究。方法将40只NOD.H-2h4小鼠随机分为空白组、模型组、补中益气汤组(9.56 g·kg^(-1))、西药组(硒酵母片,3.033×10^(-5)g·kg^(-1))。空白组饲以蒸馏水,余各组饲以0.05%碘化钠水溶液制备AIT模型。各给药组依据分组予药液,空白组及模型组予等体积蒸馏水,灌胃8周,实施取材。HE观察小鼠甲状腺组织病理改变及淋巴细胞浸润情况,ELISA检测血清TGAb、TPOAb含量,Western Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、PTEN、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA蛋白表达水平,IHC测定甲状腺组织IL-17、RORyt定位表达水平。结果与空白组相比,模型组小鼠甲状腺组织光镜下见明显的淋巴细胞浸润,血清TGAb、TPOAb含量显著升高(P<0.01),甲状腺组织中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA蛋白表达明显升高(P<0.01),PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01),RORγt、IL-17定位表达明显升高。与模型组相比,各给药组小鼠甲状腺组织淋巴细胞浸润明显减轻,血清TGAb、TPOAb含量显著降低(P<0.01),甲状腺组织中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),PTEN蛋白表达显著升高(P<0.01),RORγt、IL-17定位表达明显降低。结论补中益气汤可改善AIT中Th17细胞免疫代谢异常,PI3K/AKT/PTEN-糖酵解轴可能是其干预机制。

关键词： 新城疫病毒   单克隆抗体   胶体金   抗原   检测  

摘要： 新城疫(Newcastle Disease,ND)是一种具有高度传染性的禽类病毒性疾病,由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)感染引起,可通过呼吸道、消化道等途径直接或间接传播,对禽类养殖业造成巨大的经济损失,因此建立1种用于快速检测NDV的即时检测技术(Point-of-Care Testing,POCT)用于疾病的早期防控尤为重要。本研究通过纯化获得高浓度全病毒,经灭活后用于免疫小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合得到杂交瘤细胞,并进一步筛选得到2株特异性良好的单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs),分别命名为mAb6G9和mAb12D3。最后,将mAb6G9作为标记抗体,mAb12D3作为包被抗体制备NDV抗原胶体金检测试纸条。分析发现,该试纸条具有良好的特异性、灵敏度和稳定性,且对于临床样本的检测结果与荧光定量PCR的符合率为97.78%,具有较高的临床应用价值。

关键词： 肺炎   TNF-α   IL-6   CD4^(+)T淋巴细胞计数   CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例  

摘要： 目的:探讨外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)联合CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)程序性细胞死亡受体(PD-1)^(+)T细胞比例对肺炎患者疾病转归的预测价值。方法:回顾性选取我院2022年12月-2024年12月收治的106例肺炎患者,依据30d后转归情况将患者分别纳入转归良好组(73例)、转归不良组(33例),比较2组不同治疗时间外周血TNF-α、IL-6、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例,分析各指标联合检测对肺炎患者疾病转归的预测价值。结果:治疗前外周血TNF-α、IL-6水平、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例高于治疗7d后、治疗14d后,治疗7d后高于治疗14d后,治疗前CD4^(+)T淋巴细胞计数低于治疗7d后、治疗14d后,治疗7d后低于治疗14d后,差异有统计学意义(P<0.05);治疗7d后、治疗14d后,转归不良组外周血TNF-α、IL-6水平、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例高于转归良好组,CD4^(+)T淋巴细胞计数低于转归良好组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗7d后、治疗14d后,外周血TNF-α、IL-6水平与CD4^(+)T淋巴细胞计数呈负相关,与CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);治疗7d后、治疗14d后外周血TNF-α、IL-6、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例水平联合检测曲线下面积(AUC)为0.868、0.926,敏感度为87.88%、93.94%,特异度为80.82%、87.67%,均高于各指标水平单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺炎患者外周血TNF-α、IL-6、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)PD-1^(+)T细胞比例表达与疾病转归关系密切,联合检测对患者疾病转归有一定预测价值。

关键词： 针刺   胃溃疡   中性粒细胞   白细胞介素-17   机制   炎症因子   修复因子   MAPK通路  

摘要： 目的:观察电针联合奥美拉唑是否可以通过中性粒细胞白细胞介素-17(IL-17)通路调节胃组织炎症因子与修复因子含量修复胃溃疡(GU)小鼠胃黏膜损伤。方法:将32只雄性小鼠随机分为对照组、模型组、药物组与针药组,每组8只,吲哚美辛灌胃进行造模后干预两次;处死小鼠后采用溃疡指数评价GU严重程度,HE染色观察病理损伤情况,qPCR法检测丝裂原激活蛋白激酶激酶1(MEK1)与细胞外信号调节激酶1(ERK1)表达水平,免疫组化法观察MEK1、ERK1与修复因子转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况,ELISA法检测IL-17、IL-1β与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫荧光观察IL-17R与中性粒细胞标记物髓过氧化物酶(MPO)的表达及共定位情况。结果:与对照组比较,模型组TGF-β1含量显著下降(P<0.01),溃疡指数与IL-1β、TNF-α、ERK1、MEK1、IL-17、MPO、IL-17R、MPO与IL-17R共定位显著上升(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,药物组MEK1、ERK1、IL-1β与TNF-α含量显著下降(P<0.05),针药组TGF-β1显著上升(P<0.01),溃疡指数与IL-1β、TNF-α、ERK1、MEK1、IL-17、MPO、IL-17R、MPO与IL-17R共定位均显著下降(P<0.01,P<0.05);与药物组比较,针药组溃疡指数、MEK1、ERK1、TNF-α、IL-17、MPO与IL-17R共定位显著下降(P<0.01,P<0.05),TGF-β1显著上升(P<0.01)。结论:与单纯药物比较,电针与药物结合可以更加显著抑制GU小鼠胃组织中性粒细胞IL-17通路,下调丝裂原活化蛋白激酶1及炎症因子水平,上调修复因子含量,更好地修复吲哚美辛诱导的胃黏膜损伤。