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关键词： 霍奇金淋巴瘤   抗原85B   自噬   凋亡   增殖  

摘要： 目的研究抗原85B(Antigen 85B,Ag85B)对霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)小鼠肿瘤生长、凋亡的作用及机制。方法取HDLM-2细胞,用杜氏改良鹰培养基(Dulbecco′s modified eagle medium,DMEM)调整细胞密度为5×10^(6)个/200μL备用。取40只小鼠随机分为4组,小鼠左侧腋下酒精棉片擦拭消毒后给予接种相应试剂。Ⅰ组:接种DMEM基础培养基(200μL);Ⅱ组:接种Ag85B(每克小鼠接种4μg Ag85B,用DMEM基础培养基调整总液量为200μL);Ⅲ组:接种HDLM-2(5×10^(6)个/200μL);Ⅳ组:接种HDLM-2(5×10^(6)个/200μL)+Ag85B;(每克小鼠接种4μg Ag85B,直接混入HDLM-2细胞,维持总液量为200μL)。每日接种一次,连续接种3日。期间每日观察各组小鼠活动、精神状况,毛发和饮食饮水情况。实验第7天、第14天、第21天、第28天、第35天小鼠称重并测量肿瘤的长径及短径,肿瘤体积达到1000 mm3说明建模成功。第35天处死小鼠,剥离瘤体称重,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。苏木精-伊红染色(Hematoxylin and Eosin,HE)比较I组、II组小鼠心、肝、脾、肺、肾组织结构。取Ⅲ组、Ⅳ组小鼠肿瘤组织进行后续检测比较,免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测LC3、p62、Beclin-1、Caspase-3、Ki-67在肿瘤组织的定位及蛋白表达;免疫荧光检测Ki-67表达;TUNEL染色检测凋亡;透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)检测自噬体数量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测LC3、p62、Beclin-1、PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白表达。结果各组小鼠体重随时间延长有下降趋势,各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组小鼠毛发有光泽,精神尚可,活动正常,未见肿瘤生长。Ⅲ组、Ⅳ组小鼠精神萎靡、活动减少、毛发无光泽,有肿瘤生长。与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠肿瘤体积较小,差异有统计学意义(P<0.05),Ag85B对肿瘤抑制率为20.53%。HE染色显示I组、II组小鼠心、肝、脾、肺、肾组织结构和细胞形态无明显差异。与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠LC3、Beclin-1、Ki-67抗原表达减低,p62、Caspase-3表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠肿瘤Ki-67表达减低,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠肿瘤凋亡增强,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠肿瘤自噬体减少;与Ⅲ组比较,Ⅳ组小鼠肿瘤组织LC3、Beclin-1 mRNA及蛋白表达降低,p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ag85B可以抑制HL小鼠的肿瘤增长及增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其机制与促进PI3K/AKT/mTOR通路、抑制自噬相关。

关键词： 同仁牛黄清心丸   血管性认知障碍   核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3   半胱氨酸蛋白酶-1   白细胞介素-1β   肿瘤坏死因子-α  

摘要： 目的探讨同仁牛黄清心丸对血管性认知障碍模型大鼠脑组织保护作用及对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路调控的机制研究。方法采用结扎双侧颈总动脉建立血管性认知障碍大鼠模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、同仁牛黄清心丸(0.6、1.2、2.4 g/kg)组。苏木精–伊红(HE)染色检测模型大鼠大脑皮质及海马组织病理变化;镀银染色检测模型大鼠脑组织中神经原纤维缠结病理改变;免疫组化检测脑组织中β-淀粉样蛋白(Aβ)表达水平;ELISA检测脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;Western blotting检测大鼠脑组织中NLRP3、Caspase1、IL-1β蛋白表达水平。结果同仁牛黄清心丸能明显改善模型大鼠大脑皮质及海马神经元减少、神经元变性、坏死等病理损伤;同仁牛黄清心丸能明显改善模型大鼠脑组织中神经元排列散乱、神经原纤维增粗、银染加深等病理改变。与模型组比较,同仁牛黄清心丸各剂量组能明显降模型大鼠脑组织中Aβ、TNF-α、NLRP3、IL-1β表达水平(P<0.05、0.01);同仁牛黄清心丸0.6 g/kg组能明显下调模型大鼠脑组织中Caspase1蛋白表达(P<0.01)。结论同仁牛黄清心丸对血管性认知障碍造成的脑组织损伤具有较好的改善作用。其中抑制NLRP3/Caspase1/IL-1β信号通路活化,改善神经炎症反应可能是药物发挥治疗血管性认知障碍效应机制的关键环节。

关键词： 猪瘟病毒   E2囊膜蛋白   慢病毒载体   HEK-293T细胞  

摘要： 目的构建一种高效、稳定表达分泌型猪瘟病毒E2蛋白的HEK-293T细胞株。方法利用分子克隆技术将含有信号肽的猪瘟病毒E2基因插入到慢病毒表达质粒,获得重组慢病毒载体pLV-CMV-E2。通过三质粒转染法包装重组慢病毒并感染HEK-293T细胞,采用有限稀释法获得稳定表达分泌性E2蛋白的重组单克隆细胞系。结果重组质粒酶切及PCR鉴定结果可见约1050条带,与CSFV E2基因大小相符;包装慢病毒LV-CSFV E2检测滴度为1×10^(8) copies/mL。慢病毒感染HEK-293T后,经Dot blot和有限稀释法筛选得到7个细胞形态均一、长势良好且E2蛋白表达水平较高的克隆(A4,A5,C1,D1,D2,E1,E2);重组细胞系经PCR及Western blot方法检测到E2基因及蛋白所对应特异性条带。将重组细胞系连续传至70代,E2蛋白表达水平稳定不变;免疫学实验结果显示,重组E2蛋白能够与猪瘟阳性血清发生特异性反应。结论本研究成功建立了一种稳定高效地表达分泌性重组E2蛋白的真核表达系统,为研究猪瘟E2亚单位疫苗及血清学诊断方法等奠定基础。

关键词： 病毒性感染中毒症   mHLA-DR   淋巴细胞  

摘要： 目的分析病毒性感染中毒症患者的免疫抑制指标,评估免疫抑制对于继发感染的影响。方法回顾性分析2021年12月—2024年2月铜陵市人民医院68例病毒性感染中毒症患者,依据是否继发新的感染,分为非继发感染组与继发感染组,收集临床资料、常规检验、细胞因子及免疫抑制指标(包括mHLA-DR表达率、淋巴细胞计数、CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数和CD4/CD8),比较两组相关指标的差异。结果两组之间的性别、常规检验及细胞因子指标均无统计学差异(p>0.05)。未继发感染组的年龄、基础疾病百分比及入住ICU时长均低于继发感染组,差异有统计学意义(p<0.05)。未继发感染组的mHLA-DR表达率、淋巴细胞计数、CD4+T细胞计数和CD8+T细胞计数均高于继发感染组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论随着病毒性感染中毒症患者的年龄和基础疾病的增加,患者继发感染的概率增加。mHLA-DR低表达、淋巴细胞计数的降低、CD4+T细胞计数的降低和CD8+T细胞计数的降低与病毒性感染中毒症患者继发感染相关。

关键词： 重症脑出血   肠内营养支持   内镜   免疫球蛋白   T淋巴细胞亚群  

摘要： 目的:探讨早期内镜肠内营养支持对重症脑出血患者免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群的影响。方法:选取2019年8月至2022年6月郴州市第一人民医院收治的120例重症脑出血患者,按随机数字表法分为胃管组和肠管组,每组60例。入院后12~24 h,胃管组给予鼻胃管进行早期营养支持,肠管组胃镜辅助下置鼻空肠管进行早期营养支持。比较两组患者入院次日和第14天NIHSS、GCS评分、营养指标[白蛋白(Alb)、前白蛋白(PAB)、血红蛋白(Hb)]、IgG、IgA、IgM、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平及并发症情况。结果:入院后第14天,相较于胃管组,肠管组NIHSS评分明显降低,GCS评分、外周血Alb、PAB、Hb、IgG、IgA、IgM、CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD8^(+)T水平明显升高(P<0.05)。肠管组治疗后消化道出血、反流性食管炎、胃潴留、呕吐的发生率低于胃管组(P<0.05)。结论:早期内镜肠内营养支持可有效改善重症脑出血患者营养状态,提高患者免疫功能,改善患者预后。

关键词： 可溶性淋巴细胞活化基因3   慢性乙型肝炎   乙型肝炎肝硬化   血清标志物  

摘要： 目的 探讨可溶性淋巴细胞活化基因3(soluble lymphocyte activation gene-3,sLAG-3)在乙型肝炎肝硬化(hepatitis B-related cirrhosis,HBV-LC)患者血清中的表达水平及临床意义。方法 收集2022年1月至2023年3月苏州大学附属第一医院感染科就诊的46例慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)患者以及56例HBV-LC患者的临床资料,另选取同期42例体检健康者作为健康人对照组。检测各组血清sLAG-3、乙肝e抗原(HBeAg)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以及乙肝病毒核酸(HBV-DNA)等指标,并计算肝纤维化4因子指数(fibrosis-4 index,FIB-4)、AST和血小板比率指数(AST to platelet ratio index,APRI)。采用Spearman相关性分析血清sLAG-3与各项实验室指标之间的相关性;采用ROC曲线评估血清sLAG-3水平对CHB进展为HBV-LC的诊断效能。结果 CHB组、HBV-LC组和健康人对照组之间血清sLAG-3水平差异存在统计学意义(H=28.7,P<0.001),且HBV-LC组血清sLAG-3水平高于CHB组(U=789.0,P<0.001)。Spearman相关性分析结果显示,HBV-LC组血清sLAG-3水平与ALT、AST、APRI、FIB-4、HA、LN水平呈正相关,其相关系数(r)分别为0.282(P=0.004)、0.433(P<0.001)、0.618(P<0.001)、0.596(P<0.001)、0.519(P<0.001)、0.230(P=0.020)。血清sLAG-3水平诊断CHB进展为HBV-LC的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.69,敏感性为75.0%,特异性为65.2%。结论 sLAG-3在CHB、HBV-LC患者血清中呈高表达,并与疾病进展显著相关,对HBV-LC的诊断具有一定的临床应用价值。

关键词： 白细胞介素-18   白细胞介素-1β   弥漫大B细胞淋巴瘤  

摘要： 目的探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体相关炎症因子白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达情况,并分析其与患者预后的关系。方法将2020年7月至2021年7月在广西医科大学附属肿瘤医院接受治疗的50例初治DLBCL患者设为DLBCL组,同期选取50名健康体检者作为健康对照组,检测并比较IL-18、IL-1β水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线确定IL-18、IL-1β预测患者死亡或存活的最佳截断值,将患者分为高表达组和低表达组。对DLBCL患者随访至2024年6月30日,记录其3年总生存期(OS),并分析IL-18和IL-1β水平与预后的关系。结果DLBCL组的IL-18、IL-1β水平均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,IL-18的最佳截断值为19.15 pg/mL,IL-1β的最佳截断值为4.95 pg/mL。IL-18、IL-1β高水平组的临床分期Ⅲ/Ⅳ期占比高于低水平组(P<0.05)。Log-rank检验显示,IL-18、IL-1β高水平组DLBCL患者的3年OS显著低于低水平组(P<0.001)。结论NLRP3炎症小体相关炎症因子IL-18和IL-1β在DLBCL患者中表达水平较高,与患者的不良预后密切相关。

关键词： IL-1β   IFN-γ   iNOS   膀胱癌   术后   感染   相关性  

摘要： 目的 分析白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平与膀胱癌术后感染的相关性。方法 收集96例膀胱癌患者临床资料。依照患者术后感染情况分为非感染组(76例)和感染组(20例)。比较两组年龄、体质指数、性别、文化程度、肿瘤分期、吸烟、饮酒、IL-1β、IFN-γ、iNOS表达水平;分析IL-1β、IFN-γ、iNOS表达水平与膀胱癌术后感染的相关性;受试者操作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估IL-1β、IFN-γ、iNOS表达水平对膀胱癌术后感染的预测效能。结果 两组年龄、体质指数、性别、文化程度、肿瘤分期、吸烟、饮酒比较差异无统计学意义(P>0.05)。感染组IL-1β、IFN-γ、iNOS水平均高于非感染组,差异有统计学意义(t=14.278,P=0.000、t=7.633,P=0.000、t=11.749,P=0.000)。IL-1β、IFN-γ、iNOS水平与膀胱癌术后感染呈显著正相关性,P均<0.05。将膀胱癌术后感染=1,非感染=0作为因变量,IL-1β、IFN-γ、iNOS水平作为自变量,进行二元逻辑回归分析,并进行受试者操作特征曲线(ROC)分析,结果显示,IL-1β、IFN-γ、iNOS三者联合预测膀胱癌术后感染的预测效能相比单一指标较高,三者联合的ROC下面积(AUC)最大,为0.967,灵敏度为0.850,特异度为0.908。IL-1β、IFN-γ、iNOS的预测阈值分别为1.785 pg/ml、40.200 pg/ml、143.430 U/ml, IL-1β、IFN-γ、iNOS的AUC分别为0.938、0.889、0.908。结论 IL-1β、IFN-γ、iNOS在膀胱癌术后感染患者中表达水平显著升高,IL-1β、IFN-γ、iNOS与膀胱癌术后感染呈正相关关系,三者联合对于膀胱癌术后感染有良好的预测价值,可作为临床上膀胱癌术后感染的评估因子。

关键词： 肺疾病,间质性   淋巴细胞间质性肺炎   咳嗽   气短   乏力  

摘要： 本文报道1例淋巴细胞间质性肺炎的病例。患者主要症状为咳嗽、气短、乏力。胸部CT示双肺多发小结节、空洞和斑片状高密度影。经皮肺穿刺活检并多学科讨论后诊断为淋巴细胞间质性肺炎,糖皮质激素治疗后好转。通过分析该病例并复习相关文献,以提高临床医生对本病的认识。

关键词： 脓毒症   T淋巴细胞亚群   免疫耐受  

摘要： 【目的】探讨T淋巴细胞亚群对脓毒症患者继发持续性炎症-免疫抑制-分解代谢综合征(PICS)的评估价值。【方法】196例脓毒症患者,根据患者是否发生PICS将其分为PICS组(n=67)与非PICS组(n=129)。比较两组患者的动脉血乳酸水平、免疫功能指标[T淋巴细胞亚群水平(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))]、炎症因子[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)]水平、营养指标[血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、血红蛋白(Hb)]。分析脓毒症患者继发PICS的影响因素,采用受试者工作曲线(ROC)评估T淋巴细胞亚群对患者发生PICS的预测价值。【结果】PICS组患者的动脉血乳酸、炎症因子水平低于非PICS组,T淋巴细胞亚群和营养指标水平均高于非PICS组(均P<0.05)。多因素分析显示,患者的动脉血乳酸、炎症因子水平、免疫功能和营养状态均是脓毒症患者合并PICS的重要影响因素(P<0.05),且T淋巴细胞亚群水平的联合检测对评估脓毒症患者继发PICS的曲线下面积(AUC)为0.965,高于各项单独指标评估(P<0.05)。【结论】T淋巴细胞亚群水平对脓毒症患者发生PICS具有较高的预测价值。