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关键词： 脓毒症   细胞因子信号转导负调控因子   GATA结合蛋白   预后  

摘要： 目的分析血清细胞因子信号转导负调控因子(SOCS3)、GATA结合蛋白(GATA-3)与脓毒症患者临床预后的相关性。方法选取重庆市大足区人民医院自2022年3月至2024年2月收治的168例脓毒症患者为研究对象。采集患者入院时的外周静脉血,检测血清SOCS3、GATA-3及脓毒症相关项目,收集患者的一般临床资料。根据住院28 d内患者的存活状态评估临床预后,将患者分入存活组和病死组。采用Cox回归分析变量与脓毒症患者临床预后的关系,绘制受试者工作特征曲线分析血清SOCS3、GATA-3对脓毒症患者临床预后风险的预测价值。结果168例患者住院28 d内累积病死63例(病死组),存活时间为4~27 d,中位存活时间19(15,22)d;存活105例(存活组)。病死组急性生理与慢性健康评分,SOCS3、GATA-3、乳酸脱氢酶水平,以及年龄≥65岁、合并多器官功能障碍比例均高于存活组,24 h乳酸清除率低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患者住院28 d内临床预后与年龄、急性生理与慢性健康评分、多器官功能障碍、24 h乳酸清除率、SOCS3、GATA-3、乳酸脱氢酶有关(P<0.05)。SOCS3、GATA-3单独及联合检测对脓毒症患者临床预后风险均有预测效能,曲线下面积分别为0.790、0.794、0.887,根据约登指数确定SOCS3、GATA-3最佳截断值分别为293.38μg/L、20.88 pg/ml。结论脓毒症患者临床预后与入院时血清SOCS3、GATA-3水平异常有关,其异常高水平可能提示预后不良风险,对患者28 d存活状态具有一定预测价值。

关键词： 补体   骨生成   骨吸收   种植体材料  

摘要： 免疫微环境在种植体周围骨改建过程中发挥重要作用。补体系统是机体免疫系统的重要组成部分,对骨生成和骨吸收均有重要影响。然而,种植体植入不同时期以及不同种植体材料会以不同方式激活补体系统。本文总结了补体系统及其激活途径、补体系统对骨改建的影响、种植体植入不同时期以及不同种植体材料对补体系统激活的影响的研究进展,为通过靶向调控种植体周围补体微环境、促进骨改建提供参考。

关键词： 肿瘤浸润淋巴细胞   乳腺癌   分子分型   精准治疗  

摘要： 近年来,乳腺癌的发病率逐步上升,如何更加有效、精准地诊断和治疗一直是研究的热点问题。肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)是乳腺癌重要的生物学标志物,然而,其临床指导价值尚未得到广泛认同。TILs的临床应用仍然存在一系列瓶颈,如何实现评估标准化、TILs阈值的设定以及能否用无创检测的方法评估TILs等,这是TILs在实际临床工作中存在争议的重要原因。TILs对于乳腺癌的预后评估、疗效预测等方面的价值不容忽视,有利于推动乳腺癌的精准化、个体化治疗。本文将综合分析目前TILs在乳腺癌诊治过程中的争议与共识,以期为TILs的合理应用提供依据。

关键词： 藤梨根   胃癌   HGC-27细胞   IL-17通路   网络药理学   槲皮素   细胞迁移   细胞凋亡  

摘要： 目的:采用网络药理学和细胞实验探讨藤梨根(Tengligen,TLG)调控白细胞介素(interleukin,IL)-17信号通路治疗胃癌的作用机制。方法:通过中医药整合药理学研究平台(Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)筛选藤梨根的活性成分和靶点,借助GeneCards、Uniprot数据库查找胃癌的靶点,并利用Venny 2.1.0获取两者的交集靶点。将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。通过Cytoscape 3.10.1软件进行网络拓扑学分析,根据Degree值筛选核心靶点。利用DAVID数据库进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。将25只SD大鼠随机分为空白组5只和藤梨根组(0.3125 g·kg^(-1))20只,连续灌胃5 d,制备空白血清和含药血清。将HGC-27细胞分为对照组、空白血清组、12%藤梨根含药血清组(TLG-L)、24%藤梨根含药血清组(TLG-M)及48%藤梨根含药血清组(TLG-H),采用Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6、IL-1β含量,Western blot法检测IL-17A、核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平。结果:藤梨根靶点159个,胃癌靶点1010个,两者的交集靶点95个。藤梨根治疗胃癌的核心靶点包括肿瘤蛋白p53(tumor protein 53,TP53)、IL-6、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)、MMP-9、TNF等。KEGG分析得到123条通路,包括IL-17信号通路、PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路等。与空白血清组比较,TLG-L组、TLG-M组、TLG-H组细胞迁移数目减少、细胞凋亡率升高(P<0.01)。与对照组比较,空白血清组细胞上清液中TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01)。与空白血清组比较,TLG-L组、TLG-M组、TLG-H组细胞上清液中IL-1β、TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01)。与对照组比较,空白血清组细胞MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.01)。与空白血清组比较,TLG-M组、TLG-H组细胞IL-17A、NF-κB、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:藤梨根可能通过槲皮素、β-谷甾醇、谷固醇等成分,调控IL-17信号通路,从而发挥抑制胃癌细胞迁移,并促进其凋亡的作用。

关键词： 微小RNA665   信号传导及转录激活蛋3   白介素-17   白塞葡萄膜炎  

摘要： 目的检测白塞葡萄膜炎(Behçet’s uveitis,BU)与正常对照组标本中miR-665、STAT3、p-STAT3、IL-17的表达差异,探讨分子指标在疾病中发挥的生物学功能作用。方法选取2022年01月至2022年09月期间在新疆维吾尔自治区人民医院眼科就诊的BU患者作为实验组(15例),选取年龄和性别均分别匹配的健康人作为对照组(15例),分别抽取外周静脉血4-6ml,检测miR-665、STAT3、p-STAT3、IL-17的表达水平。结果实验组miR-665、p-STAT3、IL-17的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),STAT3在实验组与对照组中的表达无统计学差异(P>0.05)。结论BU患者miR-665、p-STAT3、IL-17表达异常,其三者可能参与了BU的发生和发展过程。

关键词： 进展性卒中   WORSEN评分   中性粒细胞/淋巴细胞比值   早期神经功能恶化   危险因素   预测价值  

摘要： 目的探讨WORSEN评分联合中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对进展性卒中的预测价值及意义。方法回顾性分析2021-09—2022-12发病24 h内就诊南京市江宁医院神经内科未接受早期再灌注治疗的300例脑梗死患者资料,按住院期间是否发生早期神经功能恶化分为非进展组和进展组,对2组资料单因素分析,采用二元多因素Logistic回归分析法探索药物治疗的进展性卒中的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析WORSEN评分[包括控制差的高血糖、既往心肌梗死、影像学结果、梗死面积、高低密度脂蛋白胆固醇和神经学发现]联合NLR对进展性卒中的预测价值。结果300例脑梗死患者中出现进展82例,非进展组218例。进展组初始单一抗血小板治疗的比例、NLR、血糖、纤维蛋白原降解产物(fFDP)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、入院NIHSS评分、WORSEN评分、颈内动脉闭塞、大脑中动脉M1段闭塞、纹状体梗死及梗死灶直径15~30 mm占比均高于非进展组,进展组高血压占比、入院24 h内血压变异性、尿素氮、肌酐均低于非进展组,差异均有统计学意义(P<0.05),余因素组间差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,NLR(OR=1.08,95%CI:1.03~1.13)、大脑中动脉M1段闭塞(OR=1.57,95%CI:1.12~2.19)、纹状体梗死(OR=2.16,95%CI:1.30~3.60)、梗死灶直径为15~30 mm(OR=1.81,95%CI:1.08~3.03)是进展性卒中的独立危险因素。ROC曲线分析显示,WORSEN评分联合NLR的截断值为1.50时,预测进展性卒中的敏感度为88.3%,特异度为43.4%,ROC曲线下面积为0.71(95%CI:0.66~0.77,P<0.05)。结论WORSEN评分及NLR高的急性脑梗死患者应引起高度重视。WORSEN评分联合NLR可能成为检测进展性卒中的一个有价值的工具。

关键词： 病毒蛋白   诊断技术   宿主细胞   病毒感染   核酸检测   现代医学   抗原   子代病毒  

摘要： 抗原、抗体、核酸检测,是现代医学中重要的诊断技术,它能够帮助医生快速、准确地检测出疾病的存在。那么,抗原、抗体、核酸检测的原理是什么呢?一切还得从病毒感染人体的过程说起。病毒的外层包裹着一层蛋白质“外衣”,而中心则是其核酸基因组,这既可能是D N A,也可能是R N A。大多数病毒要通过与宿主细胞表面的相应受体结合,才能侵入人体内。随后,病毒开始复制其基因组,并合成病毒mRNA。值得注意的是,所有病毒都必须依赖宿主细胞来完成病毒蛋白的翻译,以及子代病毒颗粒的组装。

关键词： 牛冠状病毒   N蛋白   多克隆抗体   原核表达  

摘要： 为制备牛冠状病毒N蛋白多克隆抗体,建立简单快捷的牛冠状病毒检测方法。根据牛冠状病毒N基因序列设计引物,将N基因重组至PET-30a载体上,经PCR及测序鉴定重组载体构建成功;将构建的PET-30a-N重组质粒转入大肠埃希氏菌DH5-α和Rosetta(DE3)感受态细胞,进行扩增和诱导表达,后经超声破碎后获取N蛋白并进行蛋白纯化;最后将纯化后的N蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫新西兰白兔,共制得35 mL抗N蛋白多克隆抗体血清,经Western blot和IFA鉴定,抗N蛋白多克隆抗体有良好的特异性,试验制备的抗N蛋白牛冠状病毒多克隆抗体可用于牛冠状病毒的检测。

关键词： 重组慢病毒载体   淋巴细胞激活基因   免疫抑制性受体   慢性病毒感染  

摘要： 目的 构建人淋巴细胞激活基因3(lymphocyte activation gene 3, LAG3)慢病毒重组表达载体,并转染小鼠成纤维细胞3T3以获得LAG3优势表达的单克隆细胞株。方法 提取人外周血单核细胞总RNA并逆转录为cDNA,以高保真DNA聚合酶PCR扩增LAG3胞外区和跨膜区基因序列。PCR产物采用限制性内切酶Eco RⅠ和NotⅠ双酶切后,与慢病毒载体pTSB-copGFP连接构建重组表达载体pTSB-LAG3-copGFP,并转化大肠埃希菌DH5α。PCR法筛选出阳性克隆菌,提取质粒DNA测序验证。pTSB-LAG3-copGFP重组载体与包装质粒psPAX2、pMD2.0G共同转染人胚肾293T细胞以包装、分泌病毒,收集病毒感染3T3细胞,采用嘌呤霉素筛选的同时有限稀释法获取LAG3稳定表达的3T3单克隆细胞。实时荧光定量PCR、免疫荧光法和流式细胞术分别检测细胞中LAG3 mRNA的转录及LAG3蛋白的表达。结果 重组pTSB-LAG3-copGFP慢病毒载体测序结果显示,扩增LAG3基因序列与GenBank中LAG3标准序列(序列号NM_002286.6)比对仅在跨膜区1 697 bp碱基位存在一处His氨基酸密码子同义突变。pTSB-LAG3-copGFP包装病毒感染3T3细胞经嘌呤霉素筛选,共获得20株LAG3+copGFP+-3T3单克隆细胞,均可检测出LAG3 mRNA的转录,其中MC-6单克隆细胞株LAG3转录水平最高。免疫荧光法与流式细胞术检测结果提示LAG3蛋白在MC-6中有效表达并分布于细胞膜和胞质细胞器膜上。结论 成功构建pTSB-LAG3-copGFP慢病毒载体,筛选获得淋巴细胞激活因子3高效表达的LAG3+copGFP+-3T3单克隆细胞株。为后续开展LAG3与乙型肝炎等慢性病毒感染性疾病发展的关系以及LAG3干预治疗等实验研究打下基础。

关键词： Macrophage   miR-21-5p   Extracellular vesicles (EVs)   Programmed cell death factor 4 (PDCD4)   Human umbilical cord mesenchymal stem cells   (hUC-MSCs)   Spinal cord injury (SCI)   Interleukin-4 (IL-4)  

摘要： Spinal cord injury (SCI) represents a significant neurological disorder that profoundly impacts human life. Transplantation of extracellular vesicles (EVs) from human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) has emerged as a promising therapeutic strategy. microRNA (miRNA) containing EVs serve as crucial mediators of intercellular communication, playing vital roles in physiological and pathological processes. Research indicates that EVs from hUC-MSCs could attenuate inflammation and facilitate recovery from SCI. Nevertheless, their application in clinical treatment necessitates further investigation. We are actively pursuing an effective approach to modulate the intensity of the inflammatory response, thereby addressing secondary SCI. Initially, we activated hUC-MSCs with interleukin-4 (IL-4) and subsequently harvested their EVs. We investigated the influences of A-hUC-MSCs-EVs compared to routinely acquired EVs on macrophage polarization phenotypes both in vitro and in vivo. Our results show that EVs originating from A-hUC-MSCs are more effective at promoting macrophage polarization from the M1 phenotype to the M2 phenotype than those derived from hUC-MSCs. Notably, we found that A-hUC-MSCs-derived EVs had a superior impact on motor function recovery in mice with SCI. Importantly, we observed that IL-4 activation significantly upregulated the expression of miR-21-5p within these EVs. More specifically, our data demonstrate that A-hUC-MSCs-EVs depend on miR-21-5p to inhibit the effects of PDCD4 on macrophage polarization. This mechanism regulates inflammatory responses while simultaneously reducing apoptosis. In summary, EVs derived from IL-4 primed hUC-MSCs are enriched with miR-21-5p, which exerts a pivotal influence in shifting macrophage polarization, alleviating inflammatory responses following SCI, and facilitating recovery.