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关键词： 抗Claudin18.2单抗   抗体依赖性细胞吞噬作用   生物学活性   转基因细胞   报告基因   优化   验证  

摘要： 目的建立抗Claudin18.2单抗(mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)生物学活性检测方法。方法以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,HEK293T-Claudin18.2细胞系作为靶细胞,通过萤光素酶检测系统(OneGlo^(TM)Luciferase Assay System)检测抗Claudin18.2单抗的ADCP生物学活性,并进行实验参数优化与方法学验证。结果抗Claudin18.2单抗在该报告基因法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)[/1+(x/C)^(B)]+D。方法经多个实验参数筛选和优化,确定抗体工作浓度为0.02~200000 ng/mL,靶细胞和效应细胞的接种量均为每孔5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(48.90±2.36)%、(71.87±2.62)%、(99.64±2.12)%、(135.42±1.12)%和(151.16±6.91)%;回收率为96%~108%,RSD均小于6%,线性检测范围为50%~150%。结论本研究成功建立基于报告基因的抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性的评价方法。

关键词： 传染性单核细胞增多症   肝损伤   异型淋巴细胞百分率   EB病毒DNA定量   体液免疫   淋巴细胞亚群  

摘要： 目的 分析传染性单核细胞增多症(IM)合并肝损伤患儿的临床特点。方法 纳入2023年1月1日至12月31日于西安交通大学附属儿童医院感染科确诊为的IM患儿231例,比较肝损伤组与非肝损伤组的临床特征及相关实验室检查。结果 发生肝损伤的患儿共126例(54.54%),男性50例(39.68%),女性76例(60.32%);婴儿期0例,幼儿期11例(8.73%),学龄前期67例(53.17%),学龄期47例(37.30%),青春前期1例(0.79%)。发病年龄70(47,104)个月。肝损伤组患儿住院时间为7(6,8)d,非肝损伤组为6(5,7)d,(P<0.05)。肝损伤组患儿异型淋巴细胞百分率[15.50(11.00,22.00)]、EB病毒定量[812.50(0.00,2400.00)]、IgM[1.64(1.29,2.20)]及Ts细胞(抑制性T细胞)比例[64.00(57.00,71.00)]均高于非肝损伤组的13.00(9.00,20.00)、0.00(0.00,1240.00)、1.36(1.08,1.88)、59.00(52.00,67.00);而肝损伤组患儿Th细胞(辅助性T细胞)比例[13.50(10.00,19.00)]及B细胞比例[4.00(3.00,6.00)]均低于非肝损伤组16.00(12.00,21.00)、6.00(4.00,8.00),差异均有统计学意义(P<0.05);两组IgA、IgG和NK细胞计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论 女性及学龄前期IM患儿更易合并肝损伤。IM有无肝损伤与异型淋巴细胞百分率、EB病毒载量及细胞免疫存在一定相关性。肝损伤患儿易发生免疫功能紊乱。

关键词： 尘肺病   支气管肺泡灌洗液   白细胞介素-10   基质金属蛋白酶-2   肺纤维化  

摘要： 目的探究尘肺病患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)表达与肺纤维化程度的关系。方法选取2021年3月—2023年3月某院收治的67例尘肺病患者为观察组,并对观察组患者进行临床分期,另选取同期年龄相仿予以支气管镜检、肺部CT,支气管肺泡灌洗的52例非尘肺病患者作为对照组。收集两组的BALF,比较观察组与对照组的IL-10、MMP-2水平,并比较观察组患者不同临床分期的IL-10、MMP-2水平和肺纤维化评分。以Spearman相关性分析尘肺病患者BALF中IL-10、MMP-2表达水平及其与肺纤维化程度的相关性。结果观察组患者BALF中的IL-10水平低于对照组[(42.27±7.42)、(60.34±12.58)pg/mL],MMP-2水平高于对照组[(5.96±1.31)、(2.42±0.62)ng/mL](U=4.771、3.865,P<0.05)。尘肺病壹期患者BALF中IL-10、纤维化评分高于贰期、叁期患者[(45.68±6.45)、(39.15±5.42)、(32.63±5.17)pg/mL,(11.51±2.43)分、(6.46±1.02)分、(7.91±1.21)分],MMP-2水平低于贰期、叁期患者[(5.34±0.98)、(6.46±1.02)、(7.91±1.21)ng/mL](H=23.014、28.672、22.860,P<0.05)。贰期患者较的IL-10水平、纤维化评分高于叁期患者,MMP-2水平低于叁期患者(P<0.05)。Spearman分析结果显示,肺纤维化评分与IL-10水平呈负相关(r=-0.412,P=0.015),与MMP-2水平呈正相关(r=0.485,P=0.011)。结论尘肺病患者BALF的IL-10水平降低,MMP-2水平升高,这些变化与患者肺纤维化的严重程度密切相关。

关键词： 多囊卵巢综合征   体外受精-胚胎移植   NOD样受体蛋白3   C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6   白介素-1β   妊娠结局  

摘要： 目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者外周血NOD样受体蛋白3(NLRP3)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)、白介素-1β(IL-1β)水平与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的关系分析。方法选取2022年7月至2024年5月江苏省南通市中医院妇科收治的132例接受IVF-ET治疗的PCOS不孕患者,按IVF-ET治疗后妊娠情况分为妊娠组63例和未妊娠组69例。比较妊娠组和未妊娠组孕妇临床资料和血清NLRP3、CTRP6、IL-1β水平;Logistic回归分析影响妊娠率的危险因素;受试者操作特性(ROC)曲线分析IVF-ET前血清NLRP3、CTRP6、IL-1β水平对妊娠率的预测价值。结果未妊娠组年龄、体质量指数(BMI)、甘油三酯、睾酮和血清NLRP3、CTRP6、IL-1β水平均高于妊娠组,优势卵泡数少于妊娠组(P<0.05);BMI增大和血清NLRP3、IL-1β水平升高是PCOS不孕患者IVF-ET治疗后妊娠失败的危险因素,血清CTRP6水平升高是保护因素(P<0.05);IVF-ET前血清NLRP3、CTRP6、IL-1β水平联合检测预测PCOS不孕患者IVF-ET治疗后妊娠失败的AUC为0.902,灵敏度为88.89%(P<0.05)。结论IVF-ET前血清NLRP3、CTRP6、IL-1β水平检测对PCOS不孕患者妊娠结局具有一定的预测效能。

关键词： 等电点   比活性   马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2   毛细管等电聚焦电泳  

摘要： 目的考察经免疫亲和层析纯化的马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的等电点分布与比活性的关系,为工艺优化建立更好的质量表征。方法采用毛细管等电聚焦电泳测定免疫亲和层析纯化前后马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的等电点,并进行统计分析。结果免疫亲和层析纯化前后样品的等电点分布范围均在4.97~9.88之间;纯化后样品等电点的分布更为集中;样品纯化后在等电点区间6.01—7.00和8.01—9.00的峰面积占比较纯化前的有所增加,平均增加幅度分别为70%、37%;在等电点区间7.01—8.00和9.01—10.00的峰面积占比降低,平均降低幅度分别为25%、26%。结论根据研究结果推测,马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)中针对破伤风毒素的中和活性较强的抗体等电点可能主要分布在6.01—7.00和8.01—9.00。

摘要： Purpose:Inflammatory breast cancer (IBC) tumors are characterized by diffuse, clusters of cells found in dermal tissue and lymphatic vessels, known as tumor emboli. This study investigates the interaction between tumor emboli and the tumor immune microenvironment (TiME) that can foster survival signaling. Experimental Design:Spatial immunophenotyping was performed on clinical IBC samples. Ex vivo tumor emboli were generated from patient-derived cell lines cultured in a lymphatic-like platform and subjected to transcriptomic and proteomic analysis. A transgenic murine model was generated for visualization of macrophages and tumor emboli within the TiME via a surgically implanted window chamber, enabling intravital imaging and targeting. Results:Gene and protein analysis of tumor emboli cultures compared to 2D monolayer cultures revealed upregulation of TNFR signaling networks, CXCL8, and immune cell chemotaxis genes. Spatial immunophenotyping of IBC patient tumors demonstrated high levels of CD163+ tumor-associated macrophages (TAMs). Furthermore, intravital imaging of mice confirmed macrophage movement toward tumor cell clusters. Finally, targeting macrophage-associated TNF-α-signaling using Birinapant, a SMAC mimetic, inhibited the tumor emboli phenotype . Conclusions:This study, the first to our knowledge, identifies TNFα signaling and macrophage infiltration in IBC tumor emboli. Strategies targeting TNFα signaling to induce cell death and reduce macrophage influence has the potential to improve IBC outcomes. Translational relevance:The overall survival rates for patients with inflammatory breast cancer (IBC) are dismal, and these rates have not changed in the last decade. IBC is associated with high metastatic propensity, with nearly 30% individuals presenting with metastatic disease at diagnosis. The distinct presentation of diffuse tumor cell clusters spreading collectively (emboli) is postulated to be responsible for the poor survival in patients with IBC.

关键词： 金振口服液   米诺环素   难治性肺炎支原体肺炎   白细胞介素6   肿瘤坏死因子α  

摘要： 目的观察金振口服液联合米诺环素治疗儿童难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)的疗效及对血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的影响。方法选取2019年5月—2023年10月在首都医科大学附属北京儿童医院保定医院诊治的296例RMPP患儿作为研究对象,随机分为联合治疗组(148例)、单一治疗组(148例)。单一治疗组进行口服盐酸米诺环素治疗,联合治疗组进行口服金振口服液联合盐酸米诺环素治疗。对两组患儿的临床疗效进行判定及对比;评估并比较2组患儿的临床中医证候积分;记录并比较治疗后2组患儿的症状消失时间,包括发热、咳嗽起效时间及咳嗽消失时间;检测治疗前后2组患儿C反应蛋白(CRP)、IL-6、TNF-α的水平;比较治疗前后2组患儿肺功能指标包括最大呼吸中段流量(MMEF)、呼气峰流速(PEF)及第1秒用力呼气容积(FEV1)/用力肺活量(FVC);比较2组不良反应情况。结果联合治疗组临床总有效率高于单一治疗组(P<0.05);治疗后,2组RMPP患儿中医证候积分各项指标均下降,联合治疗组各项指标均低于单一治疗组(P<0.05),联合治疗组的患儿各项临床症状平均消失时间短于单一治疗组(P<0.05),2组患儿的血清CRP、IL-6及TNF-α水平均下降,联合治疗组各项指标下降幅度较大(P<0.05);2组患儿肺功能指标MMEF、PEF及FEV1/FVC水平均升高,联合治疗组各项指标均高于单一治疗组;联合治疗组的不良反应发生率较低(P<0.05)。结论金振口服液联合米诺环素治疗RMPP患儿的疗效较好,能有效降低患儿血清IL-6、TNF-α的水平,安全性强,值得临床推广。

关键词： 早发性卵巢功能不全   补天大造丸   TGF-β   IL-2   IL-10   大鼠  

摘要： 目的:探究补天大造丸对早期卵巢功能不全大鼠免疫功能及细胞因子的影响。方法:60只大鼠随机取10只为空白对照组,其余50只大鼠均通过腹腔注射环磷酰胺(75 mg/kg)构建卵巢功能减退模型。将50只造模成功的大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、补天大造丸高剂量组、补天大造丸中剂量组、补天大造丸低剂量组,每组10只。补天大造丸高、中、低剂量组分别给予23.580、11.790、5.895 g/kg的补天大造丸灌胃,阳性对照组给予戊酸雌二醇片(补佳乐)灌胃,剂量为0.090 mg/(kg·d)。模型对照组与空白对照组则灌胃蒸馏水。所有灌胃操作均从造模当日开始,1次/d,连续28 d。模型对照组在造模后2周处死,其余各组在给药结束后,于动情间期处死。HE染色观察大鼠卵巢、子宫、组织变化,检测胸腺指数、脾脏指数、子宫指数及卵巢指数,血清性激素LH、FSH、E2、AMH及INH-B水平,血清炎症因子IL-2、IL-10及TGF-β水平。结果:相较于空白对照组,模型对照组大鼠卵巢组织存在显著萎缩现象,各级卵泡数量减少,卵泡结构遭到破坏,黄体不仅数量稀少而且发育状况不佳。与模型对照组比较,药物干预组呈现出明显的改善态势,窦卵泡、原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及成熟卵泡,卵细胞、卵丘、透明带、放射冠结构清晰可见,并且其卵泡外围环绕的颗粒细胞层数多于模型对照组,排列较为规则,黄体数量相比模型对照组更多,发育情况尚可。另外,与模型对照组比较,各给药组大鼠子宫内膜层出现明显增厚现象,腺腔增大,同时肌层也增厚,且排列紧密。与模型对照组比较,补天大造丸高、中、低剂量组大鼠胸腺指数、脾脏指数均下降(P<0.01或P<0.05);与模型对照组比较,补天大造丸低、中、高剂量组子宫指数与卵巢指数均升高(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,补天大造丸高、中剂量组大鼠血清中LH、FSH水平下降(P<0.01),补天大造丸低剂量组大鼠血清中LH下降(P<0.05),FSH水平无明显变化(P>0.05);与模型对照组比较,补天大造丸高、中剂量组大鼠血清中E2、AMH、INH-B水平上升(P<0.01),补天大造丸低剂量组E2、AMH水平上升(P<0.05),INH-B水平无明显变化(P>0.05);与模型对照组比较,阳性对照组与补天大造丸高、中、低剂量组大鼠血清IL-2、TGF-β水平下降(P<0.01或P<0.05),IL-10表达上升(P<0.01或P<0.05)。结论:补天大造丸可调节免疫性早发性卵巢功能不全小鼠的血清生殖激素与细胞因子水平,减轻卵巢炎症反应,有效调控免疫紊乱状态,显著提升卵巢储备能力,发挥保护作用,从而为卵巢构建起一道防护屏障。

关键词： FAM21   原核表达   蛋白表达与纯化   多克隆抗体  

摘要： 目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态大肠杆菌中并进行诱导表达,用GST融合蛋白纯化磁珠纯化蛋白。将纯化后的GST融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,收集的抗血清经过含GST蛋白的琼脂糖柱进行纯化。在FAM21基因沉默的HeLa细胞中,通过Western blot和免疫荧光实验检测抗体的特异性。结果:成功构建pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后的GST融合蛋白分子量约为50 kD,免疫新西兰兔后纯化的抗体滴度>1∶128000,并且具有较高的特异性。结论:成功构建了pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并制备了可用于Western blot和免疫荧光检测的兔抗人FAM21多克隆抗体。

关键词： 血清肿瘤标志物   甲胎蛋白   癌胚抗原   糖类抗原125   肝细胞癌   诊断价值  

摘要： 目的探究血清肿瘤标志物甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)联合检测在肝细胞癌诊断中的价值。方法选择2023年1月至2024年11月宿迁中西医结合医院收治的56例肝细胞癌患者作为肝癌组,56例良性肝病(慢性肝炎与肝硬化)患者作为良性肝病组,56例同期健康体检者作为对照组。检测三组的血清肿瘤标志物AFP、CEA和CA125的水平,评估AFP、CEA和CA125单一指标及联合的诊断效能。结果肝癌组的AFP、CEA和CA125水平均高于良性肝病组和对照组(P<0.05);受试者操作特征曲线显示,AFP、CEA与CA125联合的曲线下面积为0.967,敏感度为91.07%,特异度为93.75%,均高于AFP、CEA、CA125单一指标。结论AFP、CEA与CA125联合能显著提高肝细胞癌的诊断效能,相较于单一标志物检测,联合检测具有更高的敏感度和特异度。