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关键词： 表面等离子体共振   肠道病毒71型   抗原含量  

摘要： 目的应用表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗抗原含量,并对该方法进行验证。方法将兔抗EV71抗体偶联到SPR芯片表面,监测EV71抗原与抗体结合后SPR芯片表面信号的变化。使用EV71国家抗原标准品建立SPR检测EV71抗原的新方法,验证该方法的线性、专属性、精密度和准确度。取6批次疫苗原液进行抗原检测,比较SPR与ELISA 2种检测方法的差异。结果兔抗EV71抗体对EV71具有良好的亲和能力,偶联水平为8037响应单位。EV71国家抗原标准品的抗原含量在12.5~200.0 U/mL时,与SPR仪响应值的变化量呈良好的线性关系,决定系数≥0.9900。芯片与Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗、PBS均无交叉反应。重复性和中间精密度的相对标准偏差分别为1.52%和1.54%。准确度的回收率在91.70%~103.85%。SPR技术和ELISA检测不同批次疫苗原液抗原含量,虽差异有统计学意义(Z=-2.201,P=0.028),但2种方法检测的相对标准偏差<15%,且结果趋势一致。结论建立并验证了应用SPR技术检测EV71抗原含量的新方法,该法线性、专属性、精密度、准确度良好,可用于EV71灭活疫苗抗原含量的快速检测。

关键词： 慢性乙型肝炎   白细胞介素21   调节性T细胞   叉头状蛋白3   信号转导及转录激活因子3  

摘要： 为探究IL-21通过调节外周血Treg比例和关键蛋白的表达在乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)发病机制中的作用,入组45例HBeAg阳性CHB患者和15例健康对照(healthy control,HC),分别检测乙型肝炎标志物、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、HBV DNA载量。分离CHB患者和HC的PBMC,分为IL-21处理组与未处理组,采用流式细胞术检测Treg比例,qRT-PCR检测叉头状蛋白3(forkhead box protein 3,Foxp3)、IL-10、TGF-βmRNA的表达水平,ELISA检测培养上清液中IL-10、TGF-β蛋白的表达水平,Western blotting检测STAT3、磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)表达。结果显示,IL-21处理前,CHB组的Treg比例、Foxp3 mRNA、IL-10 mRNA、IL-10蛋白表达水平均较HC组显著升高(P<0.01);TGF-βmRNA和TGF-β蛋白表达水平均较HC组显著降低(P<0.001)。经IL-21处理后,CHB组和HC组的Treg比例、Foxp3 mRNA、TGF-βmRNA、TGF-β蛋白的表达水平均较处理前显著降低(P<0.05);IL-10 mRNA、IL-10蛋白表达水平均显著高于处理前(P<0.05)。经IL-21处理后,HC组、CHB组的STAT3、p-STAT3表达均显著高于处理前(P<0.05)。该研究提示,IL-21可能通过激活STAT3信号通路抑制Treg增殖和TGF-β分泌,使Treg数量降低和功能受损,减弱其对相关效应细胞的抑制作用,进而参与CHB的发病过程。

关键词： 全身炎性反应综合征   诊断   中性粒细胞与淋巴细胞比值   血小板与淋巴细胞比值   预测  

摘要： 目的探究中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合血小板与淋巴细胞比值(PLR)对儿童全身炎性反应综合征(SIRS)早期预测价值。方法回顾性选择2021年1月至2023年2月合肥市第八人民医院诊治的136例SIRS患儿(SIRS组)和同期120例健康儿童(对照组)为研究对象。比较两组炎性反应指标和外周血NLR、PLR水平,采用Pearson检验分析SIRS患儿NLR、PLR与其他炎性反应指标的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析NLR、PLR单独及联合检测对SIRS的预测价值。结果SIRS组血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和白细胞介素-6(IL-6)水平高于对照组[(1.56±0.41)μg/L比(0.57±0.15)μg/L、(56.04±17.71)mg/L比(4.50±1.38)mg/L、(8.54±1.95)ng/L比(0.95±0.21)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05)。SIRS组外周血NLR、PLR水平高于对照组(4.08±1.32比2.01±0.58、269.15±80.09比194.01±62.41),差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验结果显示,SIRS患儿外周血NLR、PLR水平与血清PCT、CRP和IL-6水平呈正相关(r=0.245、0.540、0.492、0.282、0.365、0.721,P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,NLR、PLR联合检测预测SIRS的曲线下面积为0.747(95%CI 0.650~0.828),高于任一单项指标。结论外周血NLR、PLR水平与SIRS患儿发病相关,两者联合检测对儿童SIRS早期诊断具有一定的临床价值。

关键词： 杂交瘤   单克隆抗体   癌胚抗原细胞黏附分子5   抗体偶联药物  

摘要： 目的 制备靶向人癌胚抗原相关细胞黏附分子5(carcinoembryonic antigen cell adhesion molecule 5,CEACAM5)单克隆抗体及其抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),并对其生物学活性进行初步评价。方法 用人CEACAM5与hFc融合蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,采用电融合技术制备杂交瘤,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过RACE PCR法获得鼠源抗体的可变区序列,并构建嵌合抗体,采用ELISA法和流式细胞术对嵌合抗体的特性进行评价,报告基因法对嵌合抗体的抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)活性进行检测。利用糖基偶联技术制备ADC,并对其活性进行评价。结果 利用杂交瘤技术筛选获得1株具有特异性结合活性的杂交瘤细胞株,命名为mAb186;成功获得抗体可变区序列,并构建了嵌合抗体ch186,其特异性结合人CEACAM5的B3结构域,未检测到对靶细胞的ADCC活性。成功制备了偶联甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E,MMAE)小分子的ADC,其对靶细胞具有杀伤作用,且具有一定的剂量效应。结论 成功制备了特异性结合人CEACAM5的单克隆抗体,并对嵌合抗体和ADC的结合活性及细胞杀伤活性进行了评价。

关键词： 短期PM_(2.5)暴露   定组研究   MGMT基因   DNA甲基化   特异性CpG位点  

摘要： 目的:筛查健康成人短期PM_(2.5)暴露后O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)特异CpG位点甲基化修饰改变及其生物学意义。方法:在PM_(2.5)高污染地区河北石家庄市河北医科大学招募30名健康男性志愿者进行为期35 d的定组研究,基于个体时间-活动模式评估个体每日PM_(2.5)外暴露水平;分别在PM_(2.5)高、低暴露时间点下采集志愿者外周血,分离淋巴细胞提取DNA,采用焦磷酸测序法检测MGMT甲基化水平。同时定量分析尿1-羟基芘(1-OHP)、8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-OHd G)水平和血浆促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,评估PM_(2.5)短期暴露对DNA氧化损伤和炎症反应的影响。结果:PM_(2.5)高暴露时间点前3天的环境PM_(2.5)平均浓度(110.09μg/m^(3))是低暴露时间点(47.37μg/m^(3))的2.32倍,PM_(2.5)内暴露水平指标尿1-OHP浓度是低暴露时间点的1.73倍(P<0.01),尿8-OHd G和血浆TNF-α浓度分别是低暴露下的1.18倍和1.66倍(均为P<0.01)。PM_(2.5)高暴露时间点机体DNA氧化损伤和炎症反应增加的同时,MGMT Cp G位点1、3、4、5、6、10的甲基化率分别下降37.31%、42.60%、19.69%、15.29%、34.95%和32.12%(均为P<0.05);其中Cp G位点1、3和10的低甲基化修饰不仅与PM_(2.5)内暴露水平1-OHP呈负相关(β≥-0.40,P<0.05),还与DNA氧化损伤(β≥-0.46,P<0.05)和炎症反应(β≥-0.26,P<0.05)呈负相关。这些Cp G热点甲基化修饰改变均与个体PM_(2.5)移动平均浓度呈负相关(β≥-0.53,P<0.05)。结论:MGMT基因低甲基化修饰Cp G热点1、3和10,与PM_(2.5)内、外暴露和生物学效应均存在相关性,可作为人群PM_(2.5)暴露的潜在生物标志物。

关键词： 嵌合抗原受体   调节性T细胞   自身免疫性疾病   Treg细胞  

摘要： 调节性T(Treg)细胞在维持机体免疫耐受中起到重要作用,其数量减少或功能缺失可能导致自身免疫性疾病(AIDs)。在临床试验中,过继性Treg细胞疗法被证明能在一定程度上缓解AIDs。嵌合抗原受体(CAR)技术的发展促使研究将Treg细胞拓展至过继性Treg细胞疗法,从而产生CAR-Treg细胞,为AIDs提供了新颖的治疗策略。主要综述了CAR-Treg细胞的结构、功能、制备方法和作用机制及其在7种常见AIDs中的应用,并对其未来研究方向进行展望。

关键词： 柯萨奇病毒B3   细胞毒性T细胞   HLA-A*02:01   交叉免疫   疫苗设计  

摘要： 目的:筛选柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)中可被细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)高效识别的抗原表位,为开发针对CVB3及其他肠道病毒的广谱疫苗提供理论依据。方法:基于免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)及NetMHCpan EL 4.1算法预测CVB3的CTL候选表位;针对HLA-A*02:01限制性表位,通过AlphaFold 2.3.2模拟其与人类白细胞抗原的复合物结构,分析表位保守性及交叉免疫潜力;利用T2细胞结合实验验证候选表位与HLA-A*02:01的亲和力。结果:共鉴定71个潜在CTL表位,筛选出6个HLA-A*02:01高亲和力表位(评分>0.9)。体外实验证实其中5个表位(CTL1~5)可显著诱导HLA-A*02:01表达(P<0.05),而CTL6无结合活性。保守性分析显示,CTL1~6表位在柯萨奇病毒、埃可病毒及肠道病毒中高度保守,提示其交叉保护潜力。结论:鉴定了CVB3的HLA-A*02:01限制性CTL表位,为开发针对CVB3及其他肠道病毒的广谱疫苗提供了关键靶点。

关键词： 非结核分枝杆菌   海分枝杆菌   结核分枝杆菌   交叉抗原   结核疫苗  

摘要： 目的初步评价海分枝杆菌(Mycobacterium marinum,MM)全菌体蛋白抗原免疫性能,为研制新型候选结核疫苗提供基础科学依据。方法常规培养MM 95014和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)H37Rv,收集菌体,灭活后,以低温超声破碎方法提取全菌体蛋白抗原,与DDA/Poly:IC佐剂混合后,皮下多点方式免疫BALB/c小鼠3次,每次50μg/只·次,间隔10 d。每次免疫前均收集血样,末次免疫10 d后采取血样和脾脏,以酶联免疫吸附技术检测血清抗体效价和细胞因子水平;采用体外结核分枝杆菌生长抑制试验(MGIA)检测MM全菌体蛋白免疫组小鼠骨髓源巨噬细胞体外抑制MTB生长的能力;应用MTB全菌体蛋白质组芯片分析MM全菌体蛋白免疫小鼠体内血清和MTB蛋白的相互作用。结果与佐剂对照组相比,MM全菌体蛋白抗原诱导小鼠产生较高水平的Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-12、TNF-α),结果差异具有统计学意义(均P<0.05);MM免疫组诱导的IgG抗体滴度达到1∶608874,IgM抗体滴度达到1∶304437;MGIA结果显示,MM免疫组具有明显体外抑制MTB生长的能力(均P<0.05);MTB蛋白质组芯片结果显示,IgG抗体中有226个蛋白交叉反应,IgM抗体中有324个MTB交叉蛋白。结论MM和MTB存在交叉共同抗原,MM全菌体蛋白抗原诱导小鼠产生较高水平的细胞免疫和体液免疫应答,并表现较强的体外抑制MTB生长的能力,其具有作为结核新型候选疫苗的潜在价值。

关键词： 肌骨超声   中性粒细胞   淋巴细胞   血小板   白细胞介素8(IL-8)   类风湿关节炎  

摘要： 目的探讨临床上采用肌骨超声检查与外周血血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)及白细胞介素8(IL-8)联合评估类风湿关节炎(RA)患者病情的价值。方法设计方案采用病例对照研究方法,选择南京市江宁医院风湿免疫科2022年1月至2023年12月收治的197例RA患者(RA组),其中男性83例,女性114例;年龄44~71岁,平均年龄54.8岁;身体质量指数(BMI)19.22~25.61 kg/m^(2),平均BMI 22.66 kg/m^(2);吸烟54例,饮酒62例;收缩压110~138 mmHg,平均收缩压122.5 mmHg;舒张压65~86 mmHg,平均舒张压75.4 mmHg。健康体检中心选取的志愿者96例(对照组),其中男性36例,女性60例;年龄42~68岁,平均年龄53.3岁;BMI 19.40~25.38 kg/m^(2),平均BMI 22.31 kg/m^(2);吸烟32例,饮酒24例;收缩压112~135 mmHg,平均收缩压124.0 mmHg;舒张压62~82 mmHg,平均舒张压73.6 mmHg。两组患者均接受肌骨超声检查及外周血中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、IL-8检查,计算NLR、PLR,并按照疾病情况RA组分为缓解期、低活动期、中活动期、高活动期进行分层对比分析。结果采用肌骨超声对患者的病情程度进行评估检查,对患者的滑膜增生情况、血流信号分布程度、患者骨侵蚀程度、患侧关节积液严重程度分别进行评分,经统计学分析,RA组上述各项指标评分及肌骨超声半定量总分均明显高于对照组[(1.89±0.61)分vs(0.10±0.03)分、(1.90±0.55)分vs(0.09±0.02)分、(1.83±0.53)分vs(0.11±0.03)分、(1.43±0.50)分vs(0.08±0.03)分、(7.05±2.16)分vs(0.38±0.06)分。P<0.05];RA组患者外周血中NLR、PLR、IL-8水平显著高于对照组[2.86±0.76 vs 1.54±0.39、178.60±23.10 vs 115.30±16.80、(41.50±9.30)ng/L vs(25.80±5.90)ng/L。P<0.05];197例RA患者,其中缓解期患者63例,低活动期患者56例,中活动期患者43例,高活动期患者35例。缓解期、低活动期、中活动期、高活动期RA患者的肌骨超声滑膜增生评分、血流信号评分、骨侵蚀评分、关节积液评分、肌骨超声半定量总分均呈逐渐升高的趋势(P<0.05);缓解期、低活动期、中活动期、高活动期外周血中NLR、PLR、IL-8水平均呈逐渐升高的趋势(P<0.05)。结论RA患者肌骨超声相关评分增高,外周血中NLR、PLR、IL-8水平升高,且均与疾病活动程度有关,可作为临床诊疗重要参考指标。

关键词： antiretroviral therapy interruption   biomarkers   inflammation   set point   viral rebound  

摘要： Objective:After analytical treatment interruption (ATI), viral rebound occurs in most people with HIV. The time to viral rebound (TTVR) is likely determined by the properties of the viral reservoir as well as the antiviral immune response. Soluble biomarkers of immune activation may be predictive of TTVR and plasma viral load (pVL) setpoint after ATI. The objective of this study is to identify these soluble ***:A retrospective biomarker analysis of the Primo-SHM trial who were treated 24 or 60 weeks during early HIV ***:Thirty-five biomarkers were measured at ATI in 65 participants. Association between biomarkers and reservoir size, TTVR and pVL at setpoint was ***:SCD14 correlated to pVL setpoint (B = 0.598;P = 0.004) and lower levels of IL-12p70 to a higher level of pVL setpoint (B = -0.448;P = 0.04). SCD163 correlated to levels of total HIV-DNA (B = 0.413;P = 0.007).Conclusion:An increased pVL setpoint was associated with higher sCD14 and lower IL-12p70 at ATI, and increased total HIV-DNA was associated with higher sCD163 at ATI. SCD14 and sCD163 are biomarkers of monocyte activation, whereas IL-12p70, produced by monocytes, is essential for inducing Th1 responses. This underscores the relation between immune activation and diminished immune control of HIV. Our findings indicate that sCD14 and IL-12p70 could serve as predictive biomarkers for favorable outcomes in cure interventions.