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关键词： 铜绿假单胞菌   中性粒细胞胞外诱捕网   树突状细胞   免疫调节   细胞因子  

摘要： 目的:探讨铜绿假单胞菌(PAO1)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对树突状细胞(DCs)的调控作用。方法:体外分离人外周血中性粒细胞,分别以佛波酯(PMA)和PAO1菌株[感染复数(MOI)=1、10、100]诱导NETs形成,通过免疫荧光染色观察NETs形态,并利用PicoGreen荧光定量法测定NET-DNA浓度。将PAO1诱导的NETs与DCs共培养,采用流式细胞术检测DCs表面共刺激分子(CD40、CD86、CD80)的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的转录及分泌水平。结果:PAO1诱导的NETs呈现核膨大及丝状连接结构,MOI=100组的NET-DNA浓度较MOI=1组显著增加(P<0.01),且NET-DNA释放量在1~3 h先升后降,4 h达峰值。PAO1诱导的NETs显著上调DCs表面共刺激分子CD40、CD86和CD80的表达(P<0.001),并促进IL-1β、IL-12和TNF-α的分泌(P<0.01)。结论:PAO1诱导的NETs能促进DCs的成熟及活化,并分泌促炎因子IL-1β、IL-12及TNF-α,这种促炎作用可能具有双重效应。

关键词： 药物性肝损伤   微小RNA-122   白介素-1β   白介素-10   临床意义  

摘要： 目的探讨药物性肝损伤(DILI)患者血清微小RNA-122(miR-122)、白介素-1β(IL-1β)和IL-10水平变化及其临床意义。方法2023年1月~2024年6月我院收治的DILI患者139例(胆汁淤积型39例,肝细胞损伤型86例,混合型14例;肝损伤1级43例,2级60例,3级36例)和同期体检的健康人75例,采用逆转录实时荧光定量PCR法检测血清miR-122水平,采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-10水平。结果DILI组血清总胆红素、ALT、AST、ALP和GGT水平为(48.6±7.9)μmol/L、(117.9±35.8)U/L、(112.8±42.3)U/L、(193.2±46.5)U/L和(377.6±88.8)U/L,均显著高于健康人组【分别为(10.3±3.2)μmol/L、(24.8±5.4)U/L、(23.1±4.0)U/L、(49.7±17.8)U/L和(50.4±4.2)U/L,P<0.05】;混合型血清miR-122水平为(11.5±2.6),肝细胞损伤型为(10.9±1.6),均显著高于胆汁淤积型【(9.0±1.5),P<0.05】,混合型血清IL-1β水平为(105.3±3.8)pg/mL,肝细胞损伤型为(101.8±3.2)pg/mL,均显著高于胆汁淤积型【(90.6±13.0)pg/mL,P<0.05】,三组血清IL-10水平无显著性差异(P>0.05);3级DILI患者血清miR-122水平为(12.5±1.2),2级DILI患者为(10.3±1.4),均显著高于1级患者【((8.6±1.5),P<0.05】,3级DILI患者血清IL-1β水平为(105.1±13.2)pg/mL,2级为(100.7±13.4)pg/mL,均显著高于1级【(88.8±13.1)pg/mL,P<0.05】,3级DILI患者血清IL-10水平为(1.9±0.8)pg/mL,2级为(2.1±0.9)pg/mL,均显著低于1级DILI患者【(2.8±1.1)pg/mL,P<0.05】。结论DILI患者血清miR-122和IL-1β水平升高,而血清IL-10水平降低,可能与病情严重程度有关,值得进一步研究。

关键词： 白细胞介素-36   类风湿关节炎   间质性肺疾病   促纤维化  

摘要： 白细胞介素-36(IL-36)作为白细胞介素-1超家族的成员,具有促炎、促纤维化以及免疫调节等作用。近年来的研究发现,IL-36与类风湿关节炎以及间质性肺疾病的发生、发展具有一定的相关性。该文对IL-36在类风湿关节炎及间质性肺疾病中作用的研究进展作一综述。

关键词： 免疫球蛋白   干扰素   EV71   手足口病   免疫功能   炎症因子  

摘要： 目的观察人免疫球蛋白与干扰素联用方案对肠道病毒71型(EV71)感染致重症手足口病患儿免疫功能及外周血炎症因子水平的影响。方法选取本院120例EV71型感染致重症手足口病患儿为研究人群,采用抽签法均分为干扰素组和联合组。两组均采用抗感染、退热、调节水电解质失衡及补液等常规治疗,干扰素组在常规治疗的基础上雾化吸入干扰素,联合组在干扰素组基础上联用人免疫球蛋白治疗。比较两组治疗前后外周血炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、内皮素(ET)-1、γ干扰素诱导蛋白(IP)-10、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平。比较两组临床疗效、症状消失时间、住院时间、不良反应发生率。结果治疗后,两组IL-6、IL-8、ET-1、IP-10水平及CD8^(+)值均降低,且联合组低于干扰素组(P<0.05);两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,且联合组高于干扰素组(P<0.05)。联合组总有效率高于干扰素组(P<0.05),症状消失时间和住院时间均短于干扰素组(P<0.05)。两组不良反应比较,差异无显著性(P>0.05)。结论人免疫球蛋白联用干扰素可改善EV71型感染致重症手足口病患儿免疫功能,降低炎症因子水平,提高临床疗效。

关键词： 补肺汤   肺炎克雷伯菌   转录组学   白细胞介素-17(IL-17)信号通路   细胞凋亡  

摘要： 基于白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)信号通路探讨补肺汤对肺炎克雷伯菌肺炎大鼠的作用及机制。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺汤低剂量组(6.68 g·kg^(-1)·d^(-1))、补肺汤高剂量组(13.36 g·kg^(-1)·d^(-1))和地塞米松组(1.04 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。采用气管滴注肺炎克雷伯菌方法建立肺炎大鼠模型,成功后观察药物对大鼠肺组织损伤的改善作用。转录组学筛选核心靶点和信号通路;实时荧光定量聚合酶链式反应检测核心靶点白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和趋化因子CXC配体6(chemokine CXC ligand 6, CXCL6)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测IL-17信号通路中关键蛋白白细胞介素-17A(interleukin-17A, IL-17A)、核转录因子-κB激活剂1(nuclear transcription factor-κB activator 1, Act1)、肿瘤坏死因子相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6)以及下游磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase, p-p38 MAPK)、磷酸化核转录因子-κB p65(phosphorylated nuclear transcription factor kappa B p65, p-NF-κB p65)的表达;原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)检测肺组织细胞凋亡情况。结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肺组织发生明显病理损伤,肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL6 mRNA的表达以及IL-17A、Act1、TRAF6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平均显著升高,凋亡细胞显著增多,表示造模成功。与模型组相比,补肺汤低、高剂量组大鼠肺组织病理损伤减轻,肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、CXCL6 mRNA的表达以及L-17A、Act1、TRAF6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低,且补肺汤高剂量组凋亡细胞显著减少。综上,补肺汤能有效改善肺炎克雷伯菌肺炎大鼠肺组织损伤,降低机体炎症反应,其机制可能与调控IL-17信号通路和减少细胞凋亡相关。

关键词： 心力衰竭   中性粒细胞   淋巴细胞   再入院   死亡  

摘要： 目的探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对慢性心力衰竭(CHF)患者1年内再入院及死亡的预测价值。方法回顾性抽取2022年1月至2023年1月于汉中市中心医院住院诊治的306例CHF患者,收集患者的临床资料及入院24 h内的NLR。对患者进行随访,研究终点是出院后1年内因心力衰竭加重再入院或全因死亡,根据是否发生上述事件将CHF患者分为预后良好组(248例)和预后不良组(58例)。采用单因素与多因素Cox回归模型分析CHF患者1年内再入院或全因死亡的影响因素。采用受试者工作特征曲线评估NLR对CHF患者1年内再入院或全因死亡的预测价值。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同NLR患者的生存情况。结果入院时,预后不良组NLR(6.78±1.83)高于预后良好组(5.13±1.21),P<0.05。多因素Cox回归模型分析结果显示,血红蛋白、N端脑钠肽前体、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数以及NLR是CHF患者1年内再入院或死亡的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,NLR预测CHF患者1年内再入院及全因死亡的最佳截断值为6.51,受试者工作特征曲线下面积为0.774(95%CI:0.698~0.850)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,高NLR患者生存率低于低NLR患者(χ^(2)=67.41,P<0.001)。结论NLR与CHF患者1年内再入院及全因死亡率独立相关,是CHF患者1年内再入院及全因死亡的影响因素,对CHF患者预后具有良好的预测价值,早识别、早治疗高NLR值的CHF患者可改善临床预后。

关键词： 支气管哮喘   白细胞介素-35   信号转导和转录激活因子1   细胞免疫   Th1   Th2   免疫平衡   小鼠  

摘要： [目的]探究IL-35调控STAT1途径对支气管哮喘中Th1/Th2细胞免疫失衡的影响。[方法]选择BALB/c小鼠40只,将小鼠分成空白组、模型组、IL-35干预组、IL-35+STAT1抑制剂组,每组各10只。通过光镜法观察支气管肺泡灌洗液细胞总数和嗜酸粒细胞;酶联免疫吸附法测定IL-4和IFN-γ;苏木精-伊红染色检测肺组织病理改变;流式细胞术测定Th1/Th2细胞;Western blot法检测p-STAT1和STAT1蛋白表达。[结果]空白组、模型组、IL-35干预组、IL-35+STAT1抑制剂组小鼠咳嗽次数差异明显。相比模型组,IL-35干预组小鼠的病理结构得到改善。而IL-35和STAT1抑制剂组小鼠肺组织病理结果与模型组相似。空白组、模型组、IL-35干预组和IL-35+STAT1抑制剂组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、嗜酸粒细胞、IL-4和IFN-γ差异有统计学意义。空白组、模型组、IL-35干预组和IL-35和STAT1抑制剂组小鼠体内CD4^(+)IFN-γ^(+)(28.91±4.27 vs 14.55±3.22 vs 19.25±4.00 vs 16.02±4.17,F=26.905,P<0.001)、CD4^(+)IL-4^(+)(10.66±1.33 vs 30.29±2.01 vs 13.17±1.81 vs 24.59±1.67,F=292.427,P<0.001)和Th1/Th2(1.16±0.17 vs 0.21±0.03 vs 0.65±0.02 vs 0.33±0.02,F=235.501,P<0.001)差异极显著。空白组、模型组、IL-35干预组和IL-35和STAT1抑制剂组小鼠p-STAT1蛋白(1.26±0.43 vs 0.19±0.05 vs 0.48±0.10 vs 0.26±0.09,F=46.889,P<0.001)差异极显著。[结论]支气管哮喘小鼠可出现Th1/Th2细胞免疫失衡,IL-35可激活STAT1信号通路表达,以纠正Th1/Th2细胞免疫失衡。

关键词： 单抗   毒蛇咬伤   诊断   试剂盒  

摘要： 目的构建一种用于毒蛇咬伤蛇种诊断的检测试剂盒,以协助临床上毒蛇咬伤的蛇种诊断。方法将20只BALB/c小鼠分为五步蛇毒组、银环蛇毒素、眼镜蛇毒素、蝮蛇毒组,每组5只小鼠,采用杂交瘤技术通过对应的蛇毒免疫小鼠获得鼠源单克隆抗体。使用单克隆抗体制作蛇毒检测试剂卡,同时配置各种已知浓度的蛇毒稀释液,检测4种蛇毒溶液的浓度和Dr值并建立标准曲线,构建蛇伤检测试剂盒。通过构建的蛇伤中毒小鼠模型,检验蛇伤检测试剂盒临床使用的可行性。结果4种毒蛇抗原的线性检测范围均为0~300 ng/ml,其对应的Dr值范围分别为五步蛇3.35~37.56、银环蛇2.78~16.67、眼镜蛇0.98~6.12、蝮蛇0.42~3.45。基于该线性范围建立试剂盒,并检测4种蛇毒中毒小鼠模型的血清样本,结果五步蛇毒组的平均Dr值为9.58,对应抗原浓度为82.67 ng/ml;银环蛇毒组的平均Dr值为6.62,抗原浓度为87.07 ng/ml;眼镜蛇毒组的平均Dr值为4.53,抗原浓度为28.02 ng/ml;蝮蛇毒组的平均Dr值为1.08,抗原浓度为84.17 ng/ml。结论免疫荧光仪通过检测样本中的Dr值,能够较好地识别伤口中的各种蛇毒素,可以快速得到检测结果,为毒蛇咬伤的快速诊断提供可靠工具。

关键词： 急性胰腺炎   脓毒症   白细胞介素-1   中性粒细胞/淋巴细胞比值   单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白   调节性T细胞/辅助性T细胞17比值  

摘要： 目的分析外周血单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)、白细胞介素-1(IL-1)、调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)比值、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与急性胰腺炎患者病情程度及预后的关联性。方法回顾性分析2021年1月至2024年1月安康市人民医院收治的120例急性胰腺炎患者的临床资料,根据患者病情严重程度分为两组,继发脓毒症组56例,未继发脓毒症组64例,另选取同期健康体检者50例为对照组,随访1个月,根据患者预后情况,将其分为生存组86例,死亡组34例,收集所有受试者的外周血内SIGIRR、IL-1、Treg/Th17、NLR等资料,比较不同组别患者间的指标水平差异,使用Spearman分析外周血内SIGIRR、IL-1、Treg/Th17、NLR与急性胰腺炎继发脓毒症患者病情程度及预后的关联性;采用Logistic多因素回归模型,评估效能绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)评估各指标对急性胰腺炎继发脓毒症预后的预测价值。结果急性胰腺炎继发脓毒症组SIGIRR、IL-1、Treg/Th17、NLR水平均高于未继发脓毒症组、对照组,未继发脓毒症组各指标水平均高于对照组(P<0.05),死亡组SIGIRR、IL-1、Treg/Th17、NLR水平均高于生存组(P<0.05)。单因素及Logistic多因素回归分析显示,SIGIRR≥80.45 pg/L、IL-1≥576.54 ng/L、Treg/Th17≥0.26、NLR≥10.14均为预测急性胰腺炎继发脓毒症患者预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,SIGIRR的AUC最高(0.856,95%CI 0.810~0.902),Treg/Th17次之(0.841,95%CI 0.793~0.889),四项指标联合的AUC达0.886(95%CI 0.828~0.931),显著高于任一单一指标(Delong检验,P<0.05)。联合模型的敏感度为84.4%,特异度为86.7%。结论外周血SIGIRR、IL-1、Treg/Th17和NLR在急性胰腺炎继发脓毒症患者病情程度及预后呈显著相关,四项指标联合检测具有优异的预测效能,同时监测有助于反映临床诊疗和预后评估。

关键词： 糖尿病   活性氧   T淋巴细胞   调节性   细胞凋亡   转化生长因子β   高血糖症  

摘要： 目的探讨血糖控制不良的糖尿病后期CD4^(+)Foxp3^(+)调节性T细胞(Treg细胞)比例升高的原因及机制,以期为预防和治疗糖尿病后期的继发感染寻找新的思路和治疗靶点。方法将6~8周龄的野生型C57BL/6小鼠随机分为两组(实验组和对照组,每组5只),实验组通过注射链脲佐菌素(STZ)构建1型糖尿病小鼠,对照组注射等体积0.1 mol/L Citrate buffer;用高脂饲料饲喂6~8周龄的野生型C57BL/6小鼠2个月后将小鼠随机分为两组(实验组和对照组,每组3只),实验组通过少量多次注射STZ构建小鼠2型糖尿病模型,对照组注射等体积0.1 mol/L Citrate buffer。在小鼠糖尿病稳定发病2周后,收取小鼠的脾脏和外周淋巴结,通过流式细胞术检测其T细胞免疫反应。通过免疫磁珠分选幼稚T细胞进行原代培养,研究高糖调控T细胞分化和功能的机制。将小鼠组织单细胞悬液和T细胞培养后的样本,通过多色流式细胞术检测Treg细胞、效应T细胞(Teff细胞)的比例,以及细胞增殖标志物Ki67、细胞凋亡率、胞内活性氧(ROS)的表达水平。结果在血糖控制不良的1型糖尿病和2型糖尿病小鼠发病后期,外周CD4^(+)Foxp3^(+)Treg细胞比例升高(P<0.05);同时,这些糖尿病小鼠中Treg细胞的Ki67表达上调(P<0.01),而非Treg细胞(Foxp3-non-Treg cells)的凋亡比例升高(P<0.05);Teff细胞在高糖处理条件下ROS的产生增加,细胞凋亡率升高(P<0.05);高糖处理诱导了转化生长因子-β(TGF-β)的活化,并促进了Treg细胞的分化增加,阻断TGF-β信号通路或清除ROS均能完全抑制高糖诱导的Treg细胞分化(P<0.01)。结论糖尿病中失控的高糖内环境通过诱导Teff细胞发生氧化应激产生高水平的ROS,从而引起Teff细胞的凋亡增加,并通过活化TGF-β促进了Treg细胞的分化,最终引起糖尿病后期免疫抑制内环境的加剧。抑制晚期糖尿病患者的ROS水平,可能有利于抑制Teff细胞的凋亡和Treg细胞比例的升高,并有望为改善糖尿病后期由高血糖引起的免疫抑制和继发感染提供新的视角。