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关键词： 度普利尤单抗   重度哮喘   白细胞介素   单克隆抗体  

摘要： 支气管哮喘作为一类异质性疾病,其主要的特征是慢性气道炎症和气道高反应性。作为一种常见的慢性气道疾病,其给患者生活质量带来了严重的影响。哮喘常规治疗方法为长期使用吸入性糖皮质激素联合长效β2激动剂,对大部分患者治疗效果较好,可以改善肺功能并减少恶化,显著降低急性发作频率和死亡率。但仍有部分重度哮喘患者对常规治疗不敏感,症状仍难以控制,反复急性加重,具有高度的疾病风险,造成了严重社会经济负担,是哮喘致残、致死的主要原因。近年来,多种针对哮喘的生物制剂获批上市,代表药物为抗IgE,抗IL-4受体,抗IL-5/IL-5受体和抗TSLP单抗,这些均能够有效地应用于2型重度哮喘疾病的治疗。《全球哮喘防治倡议》推荐,在经第4级治疗仍不能控制的重度哮喘的治疗中,可以将上述生物制剂作为附加治疗药物。在我国上述药物纷纷获批应用于临床。度普利尤单抗作为一种新型生物制剂,针对IL-4受体达到阻断IL-4和IL-13双通路效果,前期数据表明其对于治疗重度哮喘患者有显著疗效,能够明显改善患者肺功能,可有效控制患者哮喘,但目前临床上真实世界数据还比较少,其有效性和安全性仍有待进一步探究。本文就度普利尤单抗在真实世界重度哮喘治疗中的作用及研究进展做一综述。

关键词： 支气管哮喘   血清特异性免疫球蛋白E   过敏原  

摘要： 目的分析支气管哮喘患者血清特异性免疫球蛋白E(sIgE)的检测结果及分布特征。方法收集2019年1月至2024年2月于首都医科大学附属北京朝阳医院确诊支气管哮喘并行sIgE检测的3715例患者,采用荧光免疫法进行检测。患者按照检测结果划分为两组:阳性组(sIgE≥0.35 kU/L,992例)、阴性组(sIgE<0.35 kU/L,2723例);按照年龄分段划分为四组:未成年组(<18岁,183例)、青年组(18~<45岁,1754例)、中年组(45~<60岁,990例)、老年组(≥60岁,788例);按照性别划分为两组:男性组(1559例)、女性组(2156例);按照季节划分为四组:春季组(3-5月,1103例)、夏季组(6-8月,963例)、秋季组(9-11月,998例)、冬季组(12月至次年2月,651例)。结果血清sIgE过敏原检测阳性率为26.70%;男性组总体、多价树木花粉和多价草花粉的sIgE检测阳性率高于女性组(P<0.05);总体、多价草花粉、多价霉菌、多价树木花粉、狗毛发皮屑、猫毛/狗毛/马毛/牛毛、猫毛发皮屑、篙花粉、屋尘螨、烟曲霉的IgE检测阳性率在不同年龄组比较,差异有统计学意义(P<0.05);总体、多价草花粉和屋尘螨的sIgE检测阳性率在不同季节组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管哮喘患者血清sIgE检测结果显示吸入性过敏原为主,且存在性别、年龄及季节差异。

关键词： 肺结核   IL-31   乳铁蛋白   IL-10   诊断  

摘要： 目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-31、乳铁蛋白(lactoferrin,LF)、IL-10联合检测对肺结核的诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月邯郸市第一医院收治的活动期肺结核患者100例作为结核组,非结核肺部疾病患者100例作为非结核肺病组,并招募健康体检者50例作为对照组。采用双抗体夹心检测3组研究对象血清IL-31、IL-10水平,酶联免疫吸附法检测血清LF水平,高分辨率CT(high resolution CT,HRCT)评分检测肺结核活动度,实时荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌载量。比较3组研究对象及结核组不同特征患者血清IL-31、LF、IL-10水平,分析血清IL-31、LF、IL-10水平与HRCT评分、结核分枝杆菌载量相关性,评价血清IL-31、LF、IL-10联合诊断肺结核价值及不同诊断方案的临床效用。结果与非结核肺病组、对照组相比,结核组血清IL-31、LF、IL-10水平明显升高,差异有统计学意义[pg/L:(14.83±4.90)比(8.79±2.86)比(39.66±12.57),pg/mL:(839.76±278.03)比(812.59±268.34)比(1103.64±359.77),pg/mL:(60.83±17.19)比(52.42±13.78)比(94.57±25.60),F=298.02,23.13、98.48,P值均<0.001]。结核组不同性别、年龄、体质量指数患者血清IL-31、LF、IL-10水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病变肺野数>2个患者、有空洞患者、菌阳性患者、重症患者血清IL-31、LF、IL-10水平均明显高于病变肺野数≤2个患者、无空洞患者、痰菌阴性患者、轻症患者,差异有统计学意义[IL-31(pg/L):(47.25±13.94)比(30.00±9.99),(49.18±14.87)比(25.38±8.26),(51.34±12.78)比(30.10±9.52),(59.04±13.85)比(30.54±9.11);LF(pg/mL):(1395.18±348.00)比(924.95±232.08),(1491.50±381.69)比(521.85±171.22),(1267.88±308.26)比(969.26±281.59),(1548.71±368.47)比(894.20±257.19);IL-10(pg/mL):(136.58±19.66)比(68.82±14.02),(133.22±28.49)比(36.60±11.34),(120.79±22.62)比(73.12±14.58),(157.38±21.74)比(65.01±16.68),t=7.19、9.21、6.52、12.27、8.02、15.07、5.06、10.28、20.08、20.37、12.73,23.38,P值均<0.001]。Pearson相关分析显示,血清IL-31、LF、IL-10水平与HRCT评分、结核分枝杆菌载量呈正相关(r=0.77、0.72、0.66、0.77、0.76、0.72,P值均<0.05)。血清IL-31+LF+IL-10联合诊断肺结核的AUC为0.933,特异度为91.33%,敏感度为83.00%,临床决策曲线(decision curve analysis,DCA)显示三者联合的临床净获益阈值范围最大。结论肺结核患者血清-IL-31、LF、IL-10水平异常表达,三者联合检测具有一定诊断效用和临床应用性,可为肺结核临床诊断提供参考。

关键词： 新生抗原   预测流程   管道   生物信息学  

摘要： 新生抗原是由肿瘤细胞基因突变产生的特异性肽段这些肽段通过肿瘤细胞表面的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)分子被免疫系统识别,使其成为肿瘤免疫疗法中的理想靶点。基于新生抗原的个性化癌症疫苗和过继性T细胞疗法已在多种癌症治疗中显示出巨大潜力。新生抗原的准确预测是实现这些个性化疗法的关键,尽管已建立一系列预测流程及管道,但行业内仍缺乏广泛认可的统一标准和规范。本文详细梳理了新生抗原的概况、预测流程及预测管道现状,并探讨了新生抗原预测存在的问题,旨在为我国新生抗原个性化疗法的药学研究提供参考。

关键词： 磁共振成像   新生儿化脓性脑膜炎   脑脊液   白介素10   基质金属蛋白酶-9  

摘要： 目的 探讨磁共振成像(MRI)联合脑脊液白介素10(IL-10)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平在新生儿化脓性脑膜炎(NPM)诊断中的临床价值。方法 选取湘潭市第一人民医院2022年1月至2023年6月收治的疑似NPM患儿90例为研究对象,根据脑脊液常规检测及生化检查结果分为NPM组和对照组,每组45例。采用ELISA法检测脑脊液IL-10、MMP-9水平;Logistic回归分析影响NPM发生的因素;ROC曲线评估MRI联合脑脊液IL-10、MMP-9水平对NPM的诊断效能。结果 NPM组MRI异常率(77.78%)明显高于对照组(17.78%)(P<0.05);与对照组相比,NPM组患儿脑脊液CRP、PCT、IL-10、MMP-9水平明显升高(P<0.05);脑脊液IL-10、MMP-9水平升高均是影响NPM发生的危险因素(P<0.05);脑脊液IL-10、MMP-9水平、MRI单独诊断NPM的AUC分别为0.830、0.818、0.797,三者联合诊断的AUC为0.932,优于各自单独预测(Z_(二者联合-IL-10)=2.700、Z_(二者联合-MMP-9)=2.957、Z_(二者联合-MRI)=3.923,P=0.007、0.003、<0.001)。结论 NPM患儿脑脊液IL-10、MMP-9水平及MRI异常率升高,脑脊液IL-10、MMP-9水平是影响患儿发生NPM的潜在因素,MRI联合脑脊液IL-10、MMP-9水平在NPM诊断中展现出更高的效能。

关键词： 肌红蛋白   单链抗体   噬菌体展示   Mb-scFv抗体库   固相筛选   重组单克隆抗体  

摘要： 利用噬菌体展示技术筛选人源肌红蛋白(Myoglobin,Mb)的单链抗体(single chain antibody fragment,scFv),以制备应用于临床免疫组化的Mb单克隆抗体。利用重组Mb抗原免疫新西兰白兔,提取脾脏组织的总RNA,RT-PCR扩增出轻、重链可变区基因序列,经重叠延伸PCR(overlap-PCR)拼接成scFv并克隆至pComb3XSS噬菌粒中,成功构建库容量为2×10^(7) cfu的Mb-scFv抗体库。利用噬菌体展示技术对该文库进行3轮固相筛选,经基因测序获得Mb-scFv的阳性克隆序列。将此序列的重链、轻链可变区基因与兔源IgG_(1)相应的恒定区连接后,分别克隆至pcDNA3.4表达载体中,并共转染Expi239F细胞以获得重组单克隆抗体Mb-IgG_(1)。间接ELISA显示Mb-IgG_(1)的亲和力常数为9.24×10^(12)L/mol,IHC实验显示该抗体特异性识别人骨骼肌组织中的天然Mb抗原。Mb-IgG_(1)单克隆抗体的研发,为丰富Mb抗原的临床检测以及横纹肌溶解综合症快速诊断的产品开发奠定了临床应用基础。

关键词： 化痰安神方   HT22细胞   凋亡   NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路   炎症小体  

摘要： 目的基于核因子激活的B细胞的NOD-样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)/白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)/κ-轻链(nuclear factor-activated B cellκ-light chain,NF-κB)信号通路探讨化痰安神汤抑制神经元细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HT22小鼠海马神经元细胞,C57小鼠灌胃化痰安神方后制备含药小鼠血清,CCK-8法筛选化痰安神方含药血清最佳干预浓度。采用不同浓度含药血清处理HT22细胞后,予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导其发生凋亡,CCK-8法L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,L-LDH)生化检测法和Annexin V/PI染色法用于检测细胞损伤与凋亡情况,Western blotting法用于测定通路相关蛋白P-NF-κB/NF-κB、凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing,ASC)、NLRP3、Caspase-1的表达,酶联免疫吸附测定法用于测定IL-18的表达。过表达NLRP3后重复试验,进行单基因功能验证。结果化痰安神方含药血清可改善LPS诱导的细胞损伤和凋亡,降低细胞L-LDH浓度(P<0.05);显著下调NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路相关蛋白的转录表达(P<0.05);显著降低细胞内IL-18浓度;同时过表达NLRP3可逆转化痰安神方含药血清对HT22细胞凋亡抑制作用(P<0.05)。结论化痰安神方能够通过抑制NLRP3/IL-18/NF-κB信号通路改善神经元细胞凋亡。

关键词： 乳酸脱氢酶   肺炎支原体肺炎   细胞免疫   儿童  

摘要： 目的探究不同血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿临床特征及其与细胞免疫相关性。方法选取2019年6月至2023年6月在北京市大兴区人民医院就诊的MPP患儿350例为研究对象,根据病情病情程度将其分为轻症组(n=118)、重症组(n=120)和危重症组(n=112)。分析不同血清LDH水平与MPP病情程度的独立相关性,按LDH水平从低到高等分为五分位数组(Q1~Q5),进行LDH水平与细胞免疫的相关性的亚组分析,并进行血清LDH水平影响因素的分层回归分析。结果LDH水平与MPP的病情程度存在独立相关性。在临床因素分层分析中,血清LDH水平与MPP病情程度的相关性稳定存在。在高免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、IgM、IgA水平下,随着LDH水平升高,MPP的发生风险升高;在低CD3^(+)T细胞、低CD8^(+)T细胞、低CD4^(+)T细胞、低CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)自然杀伤细胞(natural killer,NK)细胞、CD19+T细胞及CD4^(+)/CD8^(+)水平下,随着LDH水平升高,MPP的发生风险升高,LDH与IgG、IgM、IgA、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)NK细胞、CD19+T细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)具有且明显交互作用(P交互<0.05)。无论男性还是女性,随着LDH增高,重度MPP的发生风险均呈先增高后平稳的趋势。结论LDH水平随着MPP病情程度增加而升高。LDH水平与IgG、IgM、IgA水平存在显著正相关关系;与CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD45^(+)T细胞、CD16^(+)56^(+)NK细胞、CD19+T细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)存在显著负相关关系,可作为评估MPP发展及患儿免疫功能评估的重要指标。

关键词： 重度痤疮   外泌体   miR-144-5p   皮脂腺细胞   TNF-α   IL-6  

摘要： 目的探索重度痤疮患者外泌体对人皮脂腺细胞功能状态的影响及潜在机制。方法提取15例重度痤疮患者及15例正常人外周血外泌体,基于二代测序分析miRNA差异表达谱并预测靶基因。荧光定量PCR检测miR-144-5p水平,CCK-8法检测皮脂腺细胞增殖能力,ELISA法检测TNF-α及IL-6水平。结果二代测序分析对比重度痤疮与正常人群循环外泌体,共筛选出19个差异表达miRNA,其中miR-144-5p痤疮组为正常组的4.36倍(t=5.096,P<0.01)。与正常人相比,患者外泌体可明显增强人皮脂腺细胞的增殖能力、及上调TNF-α及IL-6水平,上述作用可被转染miR-144-5p抑制剂阻断(P值均小于0.01)。结论重度痤疮患者循环外泌体通过miR-144-5p介导皮脂腺细胞增殖及TNF-α、IL-6上调。

关键词： 炎症性肠病   锌稳态   金属硫蛋白相关巨噬细胞   单细胞RNA测序   抗肿瘤坏死因子   治疗反应  

摘要： 目的在单细胞水平上分析锌稳态相关基因及相关细胞在炎症性肠病(IBD)患者肠黏膜中的表达,评估其在预测IBD患者抗肿瘤坏死因子(TNF)治疗反应的价值。方法收集4个基因表达综合(GEO)数据库中75例回肠或结直肠活检样本的单细胞RNA测序数据,包括克罗恩病(CD)、溃疡性结肠炎(UC)患者以及正常对照者(NC)。在R语言环境下,首先通过无监督聚类分析将IBD细胞分群,再采用锌稳态相关基因评分评估各细胞群的锌稳态情况,鉴定出与锌稳态相关基因密切相关的细胞群,即金属硫蛋白相关巨噬细胞(MT Mph)。随后收集中山大学附属第一医院收治的IBD患者及健康体检人群的结肠组织进行免疫荧光(IF)染色,验证比较IBD和NC组织中MT Mph数量差异。为进一步探讨MT Mph的功能和来源,在R语言环境下,比较GEO数据库MT Mph和非金属硫蛋白相关巨噬细胞(non-MT Mph)特征基因,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析进一步富集特征基因,采用细胞通讯分析MT Mph与不同细胞间的通讯机制,采用拟时序分析MT Mph来源及相关的信号通路,分析对比单核细胞、MT Mph与non-MT Mph之间的转录因子差异。通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)评估MT Mph特征基因的表达,采用ssGSEA和抗TNF治疗反应构建模型,评价MT Mph特征基因对IBD患者抗TNF治疗反应的预测效能。结果IBD细胞聚类注释为7个主要细胞群,分别为T细胞、B细胞、浆细胞、髓系细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞。IBD髓系细胞锌稳态相关基因评分高于NC组。髓系细胞可分为单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞。根据细胞表达锌稳态基因特别是高表达金属硫蛋白基因的情况,可进一步将巨噬细胞分为MT Mph和non-MT Mph,且IBD肠道MT Mph的数量较NC组显著增加。通过IF验证,每个高倍镜视野下UC和CD中CD68+MT1G+阳性细胞(MT Mph)数量显著多于NC组(UC比NC:30.80±7.29比9.80±1.80,P<0.001;CD比NC:36.00±9.30比9.80±1.80,P<0.001)。KEGG通路富集分析发现,MT Mph差异基因富集出炎症相关通路的关键基因,特别是TNF信号通路;细胞通讯分析发现MT Mph与其他细胞在IBD的TNF信号通路较NC显著增强。拟时序分析结果显示,单核细胞可分化为MT Mph,且分化过程中金属硫蛋白基因(MT2A、MT1X、MT1H和MT1G)的表达显著上调。转录因子分析表明,MT Mph转录因子SMARCB1以及ZMYND8活性较单核细胞显著升高,经典炎症转录因子HIF1A、STAT3、NFKB1活性较non-MT Mph显著升高。根据ssGSEA和TNF治疗反应分别构建CD和UC相应的预测模型[CD:曲线下面积(AUC)=0.966,P<0.01;AUC=0.793,P<0.01]。验证结果显示,该模型不能预测CD和UC患者对维得利珠单克隆抗体的治疗反应(均P>0.05)。结论IBD肠道存在锌稳态失衡,MT Mph是一组高度表达锌稳态相关基因的细胞群,其与TNF炎症通路密切相关。以MT Mph特征基因构建的预测模型可能可预测IBD抗TNF的治疗反应。