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关键词： 慢性阻塞性肺疾病   核转录因子κB   白细胞介素   干扰素α   T细胞亚群   预后  

摘要： 目的探究外周血核转录因子κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)、白介素10(IL-10)、干扰素α(IFN-α)、T细胞亚群计数水平在预测慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者预后中的临床价值,以期为该病临床治疗提供参考。方法选取2023年6月-2024年3月河北省胸科医院收治的204例AECOPD患者为研究对象,根据6个月预后情况分为预后不良组(67例)与预后良好组(137例)。比较2组外周血NF-κB、IL-6、IL-10、IFN-α、T细胞亚群计数水平,并分析上述指标对患者预后的预测价值。结果预后不良组外周血NF-κB、IL-6、IL-10、IFN-α水平及CD8^(+)高于预后良好组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)低于预后良好组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,外周血NF-κB、IL-6、IL-10、IFN-α、CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均为影响AECOPD患者预后的相关因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,外周血NF-κB、IL-6、IL-10、IFN-α、CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)预测AECOPD患者预后的曲线下面积分别为0.804、0.806、0.858、0.842、0.626、0.702、0.724、0.854。结论外周血NF-κB、IL-6、IL-10、IFN-α、T细胞亚群计数水平与AECOPD患者预后密切相关,可作为预测AECOPD患者预后的重要指标,具有一定的临床价值。

关键词： 变应性鼻炎   摄涕止鼽方   上皮源细胞因子   辅助型T细胞2  

摘要： 目的 观察摄涕止鼽方(STZQ)治疗肺气虚寒型变应性鼻炎(AR)的临床疗效,并从上皮源细胞因子的角度探讨STZQ治疗AR的作用机制。方法 将纳入的60例AR患者(肺气虚寒型)随机分为试验组与对照组,每组30例。两组分别采用中药STZQ或安慰剂口服治疗,3次/d,疗程共计4周。两组患者于治疗前后记录鼻部症状总积分(TNSS)、鼻部症状单项评分(INSS)、鼻部伴随症状总分(TNNSS)、中医证候量表与鼻结膜炎生活质量问卷(RQLQ);治疗前后收集患者鼻腔灌洗液,采用ELISA检测TSLP、IL-25、IL-5、Eotaxin-1与IL-8水平。通过临床研究探讨中药STZQ治疗AR的临床疗效与作用机制。结果 两组治疗后的TNSS、INSS、TNNSS、RQLQ及中医证候量表评分均比治疗前降低(P<0.05);两组治疗后的TNSS、INSS、TNNSS、RQLQ相比差异无统计学意义(P>0.05);治疗后试验组的中医证候量表评分低于对照组(P<0.05)。试验组治疗后的TSLP、IL-25、IL-5、Eotaxin-1、IL-8水平较治疗前降低(P<0.05);对照组治疗后的IL-5水平低于治疗前(P<0.05),对照组治疗前后的TSLP、IL-25、Eotaxin-1、IL-8水平差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后的IL-5差异无统计学意义(P>0.05),试验组治疗后的TSLP、IL-25、Eotaxin-1、IL-8水平低于对照组(P<0.05)。试验组的总有效率高于对照组(P<0.05)。两组受试者未发生严重不良反应。结论 摄涕止鼽方治疗AR患者(肺气虚寒型)的临床疗效确切,其作用机制可能通过上皮源细胞因子调控Th2从而改善肺气虚寒型变应性鼻炎。

关键词： 猫过敏原   Fel d 1蛋白   单克隆抗体   抗原表位  

摘要： 目的目前国内尚未有针对猫主要过敏原(Fel d 1)的商品化定量检测试剂盒,为建立Fel d 1快速检测方法,本研究制备了Fel d 1蛋白的单克隆抗体。方法本研究利用大肠杆菌密码子偏好性,对Fel d 1基因进行优化与合成,构建原核表达质粒pET-28a-Fel d 1,随后表达并纯化Fel d 1重组蛋白;对BALB/c小鼠进行免疫,制备单克隆抗体。以重组Fel d 1作为包被蛋白建立间接ELISA方法,筛选杂交瘤细胞株;利用Western blot法验证单克隆抗体的特异性并鉴定其抗原表位。将筛选出的杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠腹腔,大量制备单克隆抗体。结果成功构建了重组质粒pET-28a-Fel d 1,对表达条件进行优化后获得了可溶性表达的Fel d 1蛋白。Western blot法及抗体效价测定结果显示,获得了2株稳定分泌抗Fel d 1特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7D11和5H4;抗体鉴定结果显示,5H4抗体亚型为IgG2a,可识别Fel d 1第105-163位氨基酸区域;7D11抗体亚型为IgG1,可识别Fel d 1第1-59位氨基酸区域。结论本研究获得的高纯度重组Fel d 1蛋白将为临床免疫治疗猫毛过敏提供一种备选方案;此外,制备的单克隆抗体将为深入研究Fel d 1的生物学功能及ELISA检测方法的研发奠定物质基础。

关键词： 静脉留置针   一次性钢针   嵌合抗原受体T细胞免疫治疗   全血采集   晚期乳腺癌  

摘要： 目的 观察静脉留置针在嵌合抗原受体T细胞免疫治疗(CAR-T)采集全血中的应用效果。方法 回顾性分析中山大学孙逸仙纪念医院2020年8月至2023年3月进行CAR-T的晚期乳腺癌患者数据,按不同采血方式分为一次性钢针组4次与留置针组7次,比较两组采集全血总耗时、穿刺疼痛情况、采血穿刺次数及当日治疗穿刺总次数。结果 一次性钢针组:采集全血总耗时(4.00±0.01)min,当日治疗穿刺总次数(1.3±0.5)次,穿刺疼痛2次(2/4);留置针组:采集全血总耗时(3.86±1.07)min,当日治疗穿刺总次数均为3次,穿刺疼痛5次(5/7)。结论 CAR-T采集全血中使用静脉留置针与一次性钢针相比,均不影响制备CAR-T细胞的血液质量,未增加总耗时,穿刺疼痛者占比略有提高,但当日治疗穿刺总次数减少。

关键词： 高甘露糖型抗体   凝集素ESA-2   亲和填料  

摘要： 在治疗性重组抗体的应用中,高甘露糖型抗体占比过高会导致非预期的ADCC效应、较短的抗体半衰期以及ADC药物潜在的脱靶毒性。目前工业界主要通过上游表达阶段控制高甘露糖型修饰,缺乏下游纯化阶段降低高甘露糖型抗体占比的手段。因此,本研究找到一种特异性识别N-高甘露糖链的植物凝集素ESA-2蛋白。通过大肠杆菌异源表达纯化后与Ni-NTA填料耦联,以开发一种去除高甘露糖型抗体的亲和填料。通过生物膜干涉技术验证了凝集素ESA-2对高甘露糖型抗体的专一性,其亲和力水平K D为364 nmol/L,而对正常糖型(G0F,G1F)的抗体几乎没有亲和力。耦联在Ni-NTA上的ESA-2亲和填料捕获实验也验证了ESA-2蛋白能够特异性识别高甘露糖型抗体,并可从重组表达的抗体中富集高甘露糖型抗体。

关键词： 原发性免疫缺陷   前B淋巴细胞   核糖核蛋白复合物   RAG1  

摘要： 目的利用优化的CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)技术,高效建立一种通过递送新型Cas9-gRNA核糖核蛋白复合物(RNP)制备人类重组激活基因1(RAG1)c.946T>G点突变的前B淋巴细胞系的方法,并对突变体进行功能分析。方法实验以人前B淋巴细胞系(Nalm6细胞)为研究对象,在体外将化学修饰的gRNA(guide RNA)和高保真HIFI Cas9蛋白孵育形成RNP复合物,通过细胞核转染技术将RNP和含RAG1(T>G)目标突变与同义突变(C>A)的超分子单链寡核苷酸(Ultramer-ssODNs)同源模板带入细胞内,诱导RAG1基因发生切割与重组,T7EⅠ酶切检测基因编辑效率,并经计数稀释法进行单克隆筛选,Sanger测序鉴定基因型。结果成功构建RAG1(c.946T>G)纯合点突变的细胞系,切割效率高达78.21%,单克隆筛选获得较高比例33.33%(4/12)的目标单克隆。通过功能实验发现c.946T>G点突变导致前B淋巴细胞RAG1、RAG2蛋白表达下调,细胞凋亡比例增多,可能是导致最终成熟B淋巴细胞的生成减少的原因。结论该研究通过优化的Cas9 RNP技术高效获得RAG1基因c.946T>G纯合点突变的前B淋巴细胞系,为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,更为提升剪切精确性、提高转染效率提供了新的方法。

关键词： 重症肺炎   淋巴细胞   宿主导向   免疫治疗  

摘要： 重症肺炎目前仍是全球面临的重点问题之一。淋巴细胞介导的免疫失衡和细胞因子失调与肺炎重症转化及组织损伤有关,有望成为重症肺炎的潜在治疗靶点。该文对淋巴细胞在重症肺炎中的保护及致病机制进行阐述,并分别从增强宿主免疫和改善免疫病理损伤2个方面进一步介绍宿主导向免疫治疗在重症肺炎中的临床应用及研究现状,同时也介绍了免疫治疗在未来的临床转化应用过程中面临的诸多挑战,旨在为其临床诊治及研究提供新的思考方向。

关键词： 乳腺癌   TrxR1   肿瘤相关巨噬细胞   微环境   免疫抑制性  

摘要： 目的:探讨TrxR1在乳腺癌中重编程肿瘤相关巨噬细胞的作用及其机制,为乳腺癌的临床治疗提供新的观点和理论依据。方法:利用TISIDB数据库分析TXNRD1 (编码TrxR1)与肿瘤免疫相关性。收集小鼠乳腺癌4T1细胞条件培养基,与骨髓来源巨噬细胞(BMDM)作用48 h,检测巨噬细胞免疫抑制相关因子的表达。通过ELISA试剂盒检测肿瘤细胞TrxR1分泌情况,Westernblot法检测敲低肿瘤细胞TXNRD1的效率。利用荧光定量PCR和流式细胞术进一步检测肿瘤细胞TrxR1的缺乏对巨噬细胞中免疫抑制性因子表达的影响。利用JASPAR数据库分析寻找潜在的调节因子,进一步验证其通路相关蛋白表达和激活情况。结果:数据库表明TXNRD1表达与多种肿瘤生存风险指数成正比,并且TXNRD1与乳腺癌的肿瘤免疫相关性最高。进一步分析发现,随着TXNRD1表达的升高,M1型巨噬细胞和NK细胞浸润减少,而M2型巨噬细胞浸润增多。荧光定量PCR和流式细胞术分析结果显示肿瘤条件培养基可以促进巨噬细胞的免疫抑制性,而敲低肿瘤细胞TXNRD1后的条件培养基则可以抑制巨噬细胞的免疫抑制性。TrxR1中和抗体可明显逆转肿瘤条件培养基对BMDM免疫抑制性因子的诱导作用。利用JASPAR数据库分析得到STAT3和STAT6这2种潜在转录因子,而Western blot法发现敲低肿瘤细胞TXNRD1可以明显抑制巨噬细胞STAT6信号通路的激活。结论:在复杂的肿瘤微环境中,肿瘤来源的TxrR1可促进巨噬细胞免疫抑制性,其机制可能与巨噬细胞中STAT6通路激活相关。

关键词： 溃疡性结肠炎   肠内营养   免疫强化   活菌   免疫球蛋白  

摘要： 目的观察早期免疫强化型肠内营养联合活菌制剂对营养不良的溃疡性结肠炎(UC)患者机体免疫、肠黏膜屏障的影响。方法选取2022年1月至2024年1月濮阳市人民医院收治的UC患者87例,根据治疗方案分为两组,其中接受普通肠内营养联合活菌制剂治疗的43例为对照组,接受免疫强化型肠内营养联合活菌制剂治疗的44例为研究组。对比两组疗效、营养状况[血红蛋白(Hb)、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)]、肠黏膜屏障功能[二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)、内毒素(ET)]、免疫功能[补体C3、免疫球蛋白(Ig)A、IgG]及不良反应。结果研究组总有效率(93.18%)高于对照组(76.74%)(P<0.05);治疗14 d后研究组Hb、ALB、PA高于对照组(P<0.05);治疗14 d后研究组DAO、ET、D-LA低于对照组(P<0.05);治疗14 d后研究组IgA、IgG高于对照组,补体C3低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率(2.27%比9.30%)对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论免疫增强型肠内营养联合活菌制剂治疗营养不良的UC疗效显著,可改善营养状况、肠黏膜屏障功能、免疫功能,安全性较高。