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关键词： 外周血细胞   中性粒细胞   单核细胞   淋巴细胞   深静脉血栓形成  

摘要： 深静脉血栓形成(DVT)因其高发病率、高病死率已经成为威胁人类生命健康的重要疾病之一。目前公认的血栓形成的三大危险因素为血流滞缓、血管壁损伤和高凝状态,但其具体的细胞机制尚不完全清楚。近年来,随着对DVT发病机制研究的深入,越来越多的证据表明外周血中不同细胞的功能异常是其发病机制不可或缺的一部分。本文综述了外周血中中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、血小板、红细胞对DVT发生发展的影响,并探讨了这些影响的潜在机制,以期为DVT的防治提供新的非抗凝靶点。

关键词： 妊娠期糖尿病   微小RNA-126   炎症细胞因子   内质网应激指标   胰岛素抵抗   远期预后   关系  

摘要： 目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小RNA-126(miR-126)、炎症细胞因子及内质网应激指标水平与胰岛素抵抗程度和远期预后的关系。方法 选取2023年2—6月诸暨市妇幼保健院收治的60例GDM患者为观察组,孕周、孕前体质指数(BMI)及孕中BMI增幅匹配的60例正常孕妇为对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组血清miR-126水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)等炎症细胞因子水平和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶12(Caspase-12)等内质网应激指标水平。收集两组基线资料及总胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FINS)水平等实验室数据,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Pearson相关系数分析血清miR-126、炎症细胞因子以及内质网应激指标水平与HOMA-IR的相关性。根据妊娠结局,将观察组患者分为预后良好组(37例)和预后不良组(23例),采用多因素logistic回归模型分析GDM患者远期预后的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析影响因素的预测价值。结果 对照组miR-126水平为(0.14±0.03),hs-CRP水平为(1.62±0.51)mg/L,TNF-α水平为(4.10±0.51)pg/ml, IL-6水平为(63.41±10.47)ng/ml, CHOP水平为(815.23±312.15)μg/L,GRP78水平为(7.41±2.05)μg/L,Caspase-12水平为(85.26±16.04)pmol/L;观察组miR-126水平为(0.09±0.02),hs-CRP水平为(6.03±1.57)mg/L,TNF-α水平为(6.47±0.53)pg/ml, IL-6水平为(92.04±17.64)ng/ml, CHOP水平为(2 325.10±854.15)μg/L,GRP78水平为(48.25±14.27)μg/L,Caspase-12水平为(701.24±250.39)pmol/L。观察组miR-126水平低于对照组,hs-CRP、TNF-α、IL-6、CHOP、GRP78及Caspase-12水平均高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关系数分析显示:HOMA-IR与miR-126呈负相关(P<0.05),与hs-CRP、TNF-α、IL-6、CHOP、GRP78及Caspase-12均呈正相关(均P<0.05)。预后不良组与预后良好组TC、LDL-C、miR-126、IL-6、GRP78及Caspase-12水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:IL-6、GRP78及Caspase-12水平是GDM患者远期预后的独立影响因素(均P<0.05)。ROC曲线显示:IL-6的曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI:0.699~0.921),灵敏度、特异度分别为78.30%、70.30%;GRP78的AUC为0.818(95%CI:0.694~0.942),灵敏度、特异度分别为78.30%、86.50%;Caspase-12的AUC为0.787(95%CI:0.666~0.908),灵敏度、特异度分别为82.60%、67.60%。结论 HOMA-IR与血清miR-126水平呈负相关,与hs-CRP、TNF-α、IL-6、CHOP、GRP78及Caspase-12水平均呈正相关。IL-6、GRP78及Caspase-12水平对GDM患者远期预后具有预测效能,有望成为临床选择防治方案的辅助工具。

关键词： 肝癌   信迪利单抗   仑伐替尼   经导管动脉化疗栓塞术   细胞免疫  

摘要： 目的分析程序性死亡受体-1抑制剂信迪利单抗联合多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂仑伐替尼及经导管动脉化疗栓塞术(TACE)治疗中晚期肝癌患者的疗效及对细胞免疫功能的影响。方法选取2020年6月至2023年6月黄山市人民医院收治的100例中晚期肝癌患者,使用简单随机抽样法分别纳入观察组(n=50)、对照组(n=50),2组均接受信迪利单抗联合仑伐替尼治疗,观察组加用TACE。对比2组近期疗效、治疗前后肿瘤标志物和细胞免疫功能变化、不良反应发生率,通过随访记录其1年生存情况。结果治疗3个月后,观察组客观缓解率、疾病控制率分别为42.00%、82.00%,均较对照组的20.00%、64.00%更高(P<0.05);2组治疗后甲胎蛋白、异常凝血酶原、癌胚抗原、糖类抗原19-9均较治疗前下降,观察组均较对照组更低(P<0.05);2组治疗后CD_(3)^(+)、CD_(8)^(+)均较治疗前下降,CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)均较治疗前升高,观察组CD_(3)^(+)、CD_(8)^(+)均较对照组更低,CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)均对照组更高(P<0.05)。2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗1年后,观察组均较对照组平均无进展生存期[(10.17±2.08)比(8.04±1.75)个月]、总生存期[(18.83±3.19)比(15.34±2.29)个月]更长(P<0.05)。结论在信迪利单抗联合仑伐替尼的基础上,将TACE应用于中晚期肝癌患者的治疗能够取得更为理想的近期疗效,在不增加不良反应的同时改善患者肿瘤标志物和免疫功能,延长生存期。

关键词： 射频消融   硬化剂   剥脱术   下肢静脉曲张   治疗效果   缓激肽  

摘要： 目的:射频消融(RFA)联合泡沫硬化剂注射(FS)与传统剥脱术对下肢静脉曲张患者围术期指标及血清相关细胞因子水平的影响。方法:选取2021年1月至2023年12月郑州四六〇医院收治的87例下肢静脉曲张患者临床资料,做回顾性研究。将患者按治疗方案分为两组,其中予以RFA联合FS治疗的44例为研究组,予以传统剥脱术治疗的43例为对照组。对比两组围术期指标、治疗效果、疾病相关评分[静脉临床严重程度评分(VCSS)、阿伯丁静脉曲张问卷(AVVQ)、慢性静脉功能不全生活质量问卷-14(CIVIQ-14)]、血清相关细胞因子水平[缓激肽、P物质、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]、并发症。结果:对比对照组,研究组手术时间、术中出血量、术后1 d疼痛评分、术后早期下床时间、住院时间均较少(P<0.05);研究组治疗效果优于对照组(P<0.05);术后1个月研究组VCSS、CIVIQ-14、AVVQ评分低于对照组(P<0.05);术后1个月研究组缓激肽、P物质、TNF-α、IL-6低于对照组(P<0.05);研究组并发症发生率低于对照组(P<0.05)。结论:RFA联合FS治疗下肢静脉曲张效果显著,其创伤小、疼痛轻、恢复快,可降低术后并发症,提高患者生活质量。

关键词： 严重急性呼吸综合征冠状病毒2   悬浮芯片   抗体亚型  

摘要： 本研究针对病毒多抗原、多抗体亚型检测的需求,基于悬浮芯片技术建立了一种可同时检测多种抗原蛋白多种抗体亚型的多重检测方法,为血清抗体特征的评估提供了一种高通量、快速的技术手段。以新冠病毒为研究模型,选用荧光编码微球作为反应载体,通过化学偶联技术将新冠病毒的核衣壳蛋白(Nucleocapsid, N)、刺突蛋白S2亚基(spike S2, S2)、受体结合域(Receptor binding domain, RBD)以及N端结构域(N-terminal domain, NTD)固定于微球表面。优化血液样本的稀释倍数和与微球的孵育时间后,采用生物素标记的小鼠抗人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型抗体作为检测二抗,建立针对各IgG亚型的标准品体系,并根据中位荧光强度(Median FluorescenceIntensity, MFI)对血样中的抗体亚型进行定量分析。所建立的检测体系可同时实现对SARS-CoV-2的N、NTD、RBD及S2四种抗原IgG亚型抗体的检测。其中,N-IgG1、NTD-IgG1、RBD-IgG1和S2-IgG1的检测灵敏度分别为84.38%、93.75%、90.63%和96.88%,特异度分别为100%、94.44%、100%和100%。本研究成功构建了一种基于悬浮芯片的多重检测体系,能够高效检测新冠病毒N、NTD、RBD与S2四种抗原对应的IgG亚型,适用于血样中抗体亚型分布特征的通量分析。

关键词： 干扰素-γ   Wnt信号通路   人牙髓干细胞   成骨向分化   牙髓损伤  

摘要： 目的:探讨干扰素-γ(IFN-γ)对牙髓损伤修复的影响。方法:分离培养hDPSCs,将hDPSCs分为对照组、0.05 ng/mL IFN-γ组、0.5 ng/mL IFN-γ组、5 ng/mL IFN-γ组、0.5 ng/mL IFN-γ+PDTC组。通过Transwell实验检测hDPSCs迁移能力,采用茜素红染色实验评估IFN-γ对hDPSCs成骨分化能力的影响,Western blot检测hDPSCs的Wnt/β-catenin信号通路表达。构建大鼠牙髓机械性损伤的模型,将三维培养hDPSCs细胞团、添加0.5 ng/mL IFN-γ的hDPSCs细胞团置于建立的大鼠牙髓损伤模型洞内,玻璃离子充填窝洞,HE染色比较各组大鼠牙髓组织修复情况。结果:IFN-γ组迁移的细胞数目明显多于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),0.5 ng/mL IFN-γ组迁移的细胞数目多于0.05 ng/mL IFN-γ组和5 ng/mL IFN-γ组(P<0.05)。与对照组相比不同浓度的IFN-γ组的hDPSCs的矿化结节、成骨向分化受到明显抑制(P<0.05);与0.5 ng/mL IFN-γ组相比,0.5 ng/mL IFN-γ+信号通路抑制剂PDTC组hDPSCs的矿化结节形成、成骨向分化得到增强(P<0.05)。与对照组比较,IFN-γ组和IFN-γ+PDTC组细胞ALP活性明显降低(P<0.05),且IFN-γ+PDTC组细胞ALP活性高于IFN-γ组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,IFN-γ组、IFN-γ+PDTC组Wnt1、β-catenin、RUNX2、CyclinD1、OCN蛋白表达水平明显降低,而p-GSK-3β、GSK-3β蛋白表达水平明显增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),IFN-γ+PDTC组Wnt1、β-catenin、RUNX2、CyclinD1、OCN蛋白表达明显高于IFN-γ组,而p-GSK-3β、GSK-3β蛋白表达水平低于IFN-γ组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果表明,与对照组相比,IFN-γ组大鼠牙髓机械损伤模型炎症反应加剧,牙本质形成受到明显抑制。结论:IFN-γ能够促进hDPSCs迁移,抑制hDPSCs成骨向分化,对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有抑制作用,可能与Wnt信号通路表达调控有关。

关键词： OBE理念   免疫组织化学   实验教学   教学改革   创新能力  

摘要： 在中医药院校医学教育体系中,实验教学是理论与实践融合的关键环节,对于医学生科研素养和创新能力的培养具有重要意义。本研究以OBE(成果导向教育)理念为指导,选取“小鼠胰岛素细胞免疫组织化学染色”作为综合性实验案例,围绕实验设计、教学实施、课程思政融入及多元化考核方式进行教学探索。该实验涵盖免疫组织化学、组织切片及显微图像分析等多学科技术,具有较强的系统性与操作性,有助于提升学生在实践中应用理论知识的能力。通过课程思政元素的自然融入,引导学生树立正确的科研伦理与社会责任意识。教学实践表明,该实验不仅激发了学生的科研兴趣和自主学习能力,也为其后续科研训练和专业成长奠定了良好基础。研究结果为中医药院校实验教学改革提供了有效参考,有助于推进高质量医学人才的培养。

关键词： 弓形虫   假激酶   ROP8   多克隆抗体  

摘要： 为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(DE3)感受态大肠杆菌IPTG,诱导并筛选诱导条件,用纯化后的蛋白免疫新西兰兔后获得多克隆抗体。Western blot显示弓形虫裂解蛋白产生了两个条带,表明以ME49虫株为总DNA模板,成功扩增出369 bp的ROP8截短基因,构建出pET28a-ROP8质粒,经过测序和比对后与基因文库中的蛋白序列完全相同。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物显示,在20 kDa有特异性条带且在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达6 h时表达量最高。弓形虫增殖实验结果显示,该多克隆抗体能够抑制弓形虫的增殖,可为研究ROP8在弓形虫增殖过程中的作用及其机制奠定基础,并为其作为疫苗候选分子提供新线索。

关键词： 癌胚抗原   细胞角质蛋白19片段抗原21-1   肺腺癌   淋巴结受累  

摘要： 目的 分析术前血清癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)水平与肺腺癌患者淋巴结受累的相关性。方法 选取91例肺腺癌患者作为肺腺癌组,另选取84例良性肺结节患者作为良性组,采用全自动电化学发光免疫分析仪检测血清CEA、CYFRA21-1水平,并比较肺腺癌组和良性组患者的血清CEA、CYFRA21-1水平。根据淋巴结受累情况,将肺腺癌患者分为受累组和未受累组,比较受累组和未受累组患者的术前血清CEA、CYFRA21-1水平。采用Spearman相关性分析法分析术前血清CEA、CYFRA21-1水平与肺腺癌患者淋巴结受累的相关性。结果 肺腺癌组患者血清CEA、CYFRA21-1水平均明显高于良性组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。病理检查结果显示,91例肺腺癌患者中,淋巴结受累44例(48.35%),淋巴结未受累47例(51.65%)。受累组患者术前血清CEA、CYFRA21-1水平均明显高于未受累组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。术前血清CEA、CYFRA21-1水平与肺腺癌患者淋巴结受累均呈正相关(P﹤0.05)。结论 肺腺癌患者血清CEA、CYFRA21-1水平较高,术前血清CEA、CYFRA21-1水平与肺腺癌患者淋巴结受累均呈正相关。

关键词： 解表清里方   甲型流感病毒(IAV)   流行性感冒   Toll样受体7(TLR7)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路   细胞因子  

摘要： 目的:探讨解表清里方对甲型流感病毒(IAV)感染所致肺炎的药效机制。方法:将132只Balb/c小鼠随机分为空白(NC)组,模型(IAV)组,奥司他韦(OSV)组(37.5mg·kg^(-1)),解表清里方高、中、低剂量(H、M、L-JQD)组(6.05、3.02、1.51 g·kg^(-1))。NC组给予生理盐水滴鼻,其他各组在鼻内接种A/Brisbane/02/2018(H1N1)[pdm09-like virus(H1N1)]构建流感病毒感染的动物模型。造模2 h后,NC组和IAV组给予生理盐水灌胃,其他各组给予对应药物灌胃,7 d。给药期间每日记录小鼠体质量、生存状态、死亡数量。第3、7天测量小鼠肺指数;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态学变化;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中病毒载量(IAV-M)、Toll样受体7(TLR7)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB(NF-κB)m RNA表达;使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中p38 MAPK、NF-κB蛋白表达水平;使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-2、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量。结果:与NC组比较,IAV组小鼠生存质量下降,生存天数减少(P<0.01),肺部充血、炎性细胞浸润,肺指数升高(P<0.01),病毒载量升高(P<0.01),TLR7、p38 MAPK、NF-κB表达升高(P<0.05,P<0.01),IL-2含量降低(P<0.01),IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01)。与IAV组比较,H-JQD组小鼠生存天数延长(P<0.05);JQD三组小鼠肺组织病理改变减轻,肺指数下降(P<0.01);M、H-JQD组小鼠肺组织病毒载量减少(P<0.01)。与IAV组比较,H-JQD组小鼠TLR7、p38 MAPK、NF-κB m RNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38MAPK、NF-κB蛋白表达水平减少(P<0.01),血清中IL-2含量增加(P<0.01),IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05,P<0.01);M-JQD组小鼠肺组织NF-κB m RNA表达降低(P<0.01),p38 MAPK蛋白表达水平减少(P<0.05),血清中IL-2含量增加(P<0.01),TNF-α含量减少(P<0.01)。结论:M、H-JQD剂量依赖性地下调TLR7/MAPK/NF-κB信号通路,增加IL-2,减少IL-6、TNF-α细胞因子的过度分泌,从而改善IAV感染所致的肺炎。