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关键词： 金环蛇   多克隆抗体   胃蛋白酶   F(ab′)_(2)片段   层析纯化  

摘要： 为制备高纯度马源金环蛇毒多克隆抗体F(ab′)_(2),以金环蛇毒高免马血浆为原料,采用Protein G亲和层析捕获马血浆中的IgG,经胃蛋白酶酶解后制得F(ab′)_(2),分别通过亲和层析、凝胶过滤层析和混合模式层析对F(ab′)_(2)进行精制纯化,并以间接ELISA法测定F(ab′)_(2)对金环蛇毒的中和活性。结果表明:Protein G亲和层析捕获的IgG纯度为83.6%,较传统的盐析纯化法有明显提高;在3种层析精制方法中,通过凝胶过滤层析精制的F(ab′)_(2)纯度最高,为89.3%,远高于《中华人民共和国药典》标准(60%以上),且收率为56.0%;间接ELISA法测定结果显示,F(ab′)_(2)的效价高于1∶4096。该研究为马源抗毒素多克隆抗体F(ab′)_(2)的工业化制备提供了工艺参考。

关键词： 淋巴瘤   多发性骨髓瘤   铁代谢   铁死亡  

摘要： 铁作为一种重要的微量元素,参与机体的多种生理过程。研究发现,肿瘤的发生发展与铁代谢异常密切相关,且作用方式呈现明显异质性。肿瘤细胞需要更多的铁来促进自身存活和增殖,但过量的铁也会对肿瘤细胞产生不利的影响,如铁死亡等。铁死亡是一种特殊的调节性细胞死亡机制,不同于其他的细胞调节死亡途径,其主要通过铁依赖的过氧化脂质和活性氧(ROS)过度积累,从而诱导细胞死亡。在血液系统中,淋巴瘤及多发性骨髓瘤(MM)的肿瘤细胞都对铁死亡较敏感,且通过多种机制影响疾病进展。本文就淋巴瘤的部分亚型及MM中的铁死亡机制进行阐述,揭示血液肿瘤细胞铁死亡与血液肿瘤发生发展的相关性,旨在为治疗这些血液系统疾病提供新的思路。

关键词： γ-干扰素   白细胞介素-4   同型半胱氨酸   寻常型银屑病   颈动脉粥样硬化  

摘要： 目的 探讨寻常型银屑病(PV)患者外周血γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法 选取2022年7月—2023年11月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院PV患者128例(PV组)和健康体检者66名(正常对照组)。收集所有研究对象的临床资料,并检测血脂、IFN-γ、IL-4、Hcy水平,测量颈动脉内膜中层厚度(CIMT)。根据是否合并CAS将PV患者分为CAS组(53例)和非CAS组(75例)。采用Pearson相关分析评估PV患者各项指标与CIMT的相关性。采用Logistic回归分析评估PV患者发生CAS的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标单项检测和联合检测判断PV患者发生CAS的效能。结果 与正常对照组比较,PV组血清IFN-γ、Hcy水平和CIMT均显著升高(P <0.001),血清IL-4水平显著降低(P <0.001)。PV患者血清IFN-γ、Hcy与CIMT呈正相关(r值分别为0.273、0.184,P<0.05),血清IL-4与CIMT呈负相关(r=-0.307,P<0.05)。CAS组血清LDL-C、IFN-γ、Hcy水平和CIMT均显著高于非CAS组(P<0.001),血清IL-4水平显著低于非CAS组(P<0.001);其他指标2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。LDL-C、IFN-γ、Hcy水平升高和IL-4水平降低是PV患者发生CAS的危险因素(P<0.05)。血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IFN-γ、IL-4、Hcy单项检测和联合检测判断PV患者发生CAS的曲线下面积(AUC)分别为0.723、0.707、0.855、0.732、0.916。结论 血清IFN-γ、IL-4、Hcy与PV患者发生CAS有关,或可作为PV患者发生CAS的辅助诊断指标。

关键词： 乙肝   肝硬化   抗病毒   地衣芽孢杆菌   菌群   肝功能  

摘要： 目的探讨益生菌辅助常规抗病毒药物通过调节肠道菌群抑制IL-23/IL-17轴激活治疗乙肝肝硬化的效果。方法选取广元市第一人民医院2020年6月至2022年6月收治的112例乙肝肝硬化患者,随机分为两组,各56例。对照组予以常规抗病毒药物治疗,观察组予以地衣芽孢杆菌活菌辅助常规抗病毒药物。对比两组HBV-DNA检测方法、HBeAg血清学转换率、HBeAg滴度下降50%率、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白介素-23(IL-23)/白介素-17(IL-17)轴相关指标、乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌水平。结果治疗12个月观察组HBV-DNA转阴率为87.50%(49/56)、HBeAg血清学转换率为66.07%(37/56)及HBeAg滴度下降50%率为23.21%(13/56),均高于对照组71.43%(40/56)、28.57%(16/56)、8.93%(5/56)(P<0.05);治疗6个月、12个月观察组ALT、TBIL、AST水平低于对照组(P<0.05);治疗3个月、6个月、12个月观察组肠球菌、肠杆菌、血氮、类氮水平低于对照组,乳杆菌、双歧杆菌高于对照组(P<0.05);治疗6个月、12个月观察组IL-23、IL-17水平低于对照组(P<0.05);观察组12个月内并发症发生率3.57%(2/56)低于对照组16.07%(9/56)。结论地衣芽孢杆菌活菌辅助常规抗病毒药物治疗乙肝肝硬化患者远期疗效良好,可调节IL-23/IL-17轴相关因子表达水平,维持肠道菌群平衡,降低并发症风险,改善肝功能。

关键词： 血液恶性肿瘤   血流感染   T淋巴细胞亚群   诊断价值  

摘要： 目的探讨外周血T淋巴细胞亚群检测对血液恶性肿瘤患者合并血流感染(BSI)的诊断价值。方法前瞻性选取2023年1月至2023年11月四川省隆昌市人民医院收治的120例血液恶性肿瘤合并BSI患者作为BSI组,选取同期收治的135例未合并BSI的血液恶性肿瘤患者作为非BSI组,另选取同期139例健康志愿者作为对照组。采用流式细胞仪检测三组患者血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比。采用多因素logistic回归分析探讨血液恶性肿瘤患者合并BSI的影响因素。受试者操作特征(ROC)曲线分析CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值对血液恶性肿瘤患者合并BSI的诊断价值。结果BSI组120例患者血培养共检出菌株132株,其中革兰氏阴性菌占65.91%,革兰氏阳性菌占28.79%,真菌占5.30%。BSI组、非BSI组CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值均明显低于对照组,且BSI组低于非BSI组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,CD3^(+)T淋巴细胞百分比(OR=0.773)、CD4^(+)T淋巴细胞百分比(OR=0.745)、CD4^(+)/CD8^(+)比值(OR=0.714)、降钙素原(PCT)(OR=1.874)、白细胞计数(OR=1.742)、经外周静脉置入中心静脉导管留置时间(OR=1.581)、抗生素使用种类(OR=1.396)均为血液恶性肿瘤患者合并BSI的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值联合诊断恶性血液肿瘤患者合并BSI的曲线下面积(0.913,95%CI 0.872~0.945)高于CD3^(+)T淋巴细胞(Z=3.716,P<0.001)、CD4^(+)T淋巴细胞(Z=4.093,P<0.001)、CD4^(+)/CD8^(+)比值(Z=4.764,P<0.001)单独诊断。结论血液恶性肿瘤合并BSI患者的T淋巴细胞亚群失衡,CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值联合应用对血液恶性肿瘤患者合并BSI具有一定诊断价值。

关键词： 后发性白内障   白介素-8(IL-8)   晶状体上皮细胞   细胞迁移   单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)   NF-κB/p65信号通路  

摘要： 目的:探究炎症因子白介素-8(IL-8)影响后发性白内障(PCO)细胞迁移的过程中对晶状体上皮细胞(LEC)分泌的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的调控作用。方法:构建大鼠晶状体囊袋模型,采用10%胎牛血清培养撕囊后的晶状体囊袋使LEC迁移至后囊30%-50%面积后,撤去血清,将囊袋分为对照组和15 ng/mL IL-8组,并在不同时间点进行拍照观察囊袋LEC迁移。ELISA法和RT-qPCR检测不同组MCP-1的分泌和信使RNA(mRNA)相对表达水平。免疫荧光检测不同组MCP-1表达水平。将SRA01/04细胞分为对照组、15 ng/mL IL-8组和15 ng/mL IL-8+200μmol/L Bindarit(BND)组,用Transwell法检测不同组迁移细胞数量。将SRA01/04细胞分为阴性对照(NC)组、NC+15 ng/mL IL-8组及15 ng/mL IL-8+p65 siRNA组,ELISA法和RT-qPCR检测不同组MCP-1的分泌和mRNA相对表达水平。结果:体外培养的大鼠晶状体囊袋LEC迁移水平显示,在48、72、96 h时15 ng/mL IL-8组囊袋内细胞迁移明显增加(均P<0.05)。ELISA的结果显示,15 ng/mL IL-8组囊袋和SRA01/04细胞与对照组相比较,在12、24 h分泌的MCP-1的水平升高(均P<0.05);RT-qPCR的结果同样显示15 ng/mL IL-8组SRA01/04细胞在12、24 h分泌的MCP-1 mRNA的相对表达水平增高(均P<0.05)。免疫荧光的结果显示,与对照组相比,24 h时15 ng/mL IL-8组的囊袋上皮细胞MCP-1表达水平升高(P=0.007)。Transwell的检测结果显示,与对照组相比,15 ng/mL IL-8组迁移数量增加(P=0.001);与15 ng/mL IL-8组相比,15 ng/mL IL-8+200μmol/L BND组迁移数量减少(P=0.003)。ELISA和RT-qPCR的结果显示,与NC组相比,NC+15 ng/mL IL-8组在12、24 h时的MCP-1分泌和mRNA的相对表达增加(均P<0.01);与NC+15 ng/mL IL-8组比较,15 ng/mL IL-8+p65 siRNA组在12、24 h时的MCP-1分泌和mRNA的相对表达减少(均P<0.01)。结论:IL-8可促进囊袋内残留上皮细胞的迁移,调控晶状体上皮细胞MCP-1的分泌和表达水平,推测其作用机制与NF-κB/p65信号通路有关。

关键词： 质粒DNA   参考品   数字PCR   紫外分光光度法  

摘要： 目的建立可检测早期区域1A(early region 1A,E1A)蛋白和猿猴病毒40大T抗原(simian virus 40 large T anti-gen,SV40LTA)残留DNA的质粒参考品,并探索基于数字PCR法对质粒参考品拷贝数标定的分析技术,从而准确定量质粒参考品,为生物制品中宿主DNA残留检测提供新的思路。方法构建质粒pUC19-E1A-SV40LTA,全基因合成后进行扩增,以得到足够的质粒参考品;采用数字PCR仪,分别用E1A和SV40LTA引物探针体系的双荧光通道对其进行拷贝数检测;将数字PCR标定拷贝数的参考品应用于qPCR中,建立检测E1A和SV40LTA特定序列的方法。对建立的qPCR体系进行质粒参考品线性、准确性、定量限、精密性、特异性、适用性、稳定性验证,并应用建立的qPCR体系对重组腺病毒(recombinant adenovirus,rAdV)、重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)样本进行检测。结果用数字PCR双荧光通道检测质料参考品的E1A和SV40LTA靶点的拷贝数基本一致,其中用E1A引物探针体系检测值为3.55×10^(9)copies/μL,SV40LTA引物探针体系检测值为3.48×10^(9)copies/μL,这两种检测值的变异系数(CV)为1.42%,取平均值3.51×10^(9)copies/μL作为数字PCR的标定值。用数字PCR标定拷贝数建立的qPCR体系线性、准确性、定量限、精密性、特异性、适用性、稳定性良好,检测rAdV、rAAV样本的回收率均在70%130%之间。结论建立了可检测生物制品中E1A和SV40LTA残留的质粒参考品,并引入了更为灵敏和准确的数字PCR方法对其进行定量。该参考品可应用于以HEK293、HEK293T为宿主细胞生产的基因治疗产品中E1A和SV40LTA残留DNA检测。

关键词： 鸡传染性贫血病毒   转移因子   免疫抑制   细胞因子  

摘要： 为探索转移因子的免疫增强作用及其对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)感染的抑制作用,试验研究了高、低两种剂量转移因子对SPF鸡CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞水平,鸡白细胞介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)等6种细胞因子和Mx抗病毒蛋白表达的影响,以及对SPF鸡体重、器官发育指数、红细胞压积(HCT)值和血液、肝脏、胸腺中CIAV增殖的影响。结果显示:转移因子可引起CD4^(+)和CD8^(+)T细胞比重显著增加并上调IFN-γ、Mx蛋白表达量(P<0.01);CIAV感染组的脾脏发育指数相对于空白对照组显著增加(P<0.05),胸腺发育指数极显著降低(P<0.01),转移因子可以缓解感染CIAV带来的脾脏肿大和胸腺萎缩;转移因子可显著抑制CIAV在血液、肝脏和胸腺中的复制(P<0.01),且高剂量组抑制作用强于低剂量组;CIAV感染组血浆HCT值极显著低于空白对照组(P<0.01),高剂量转移因子使用后缓解了CIAV感染引起的HCT值下降。研究表明,转移因子对缓解CIAV感染引起的危害具有良好的应用价值,为防控鸡传染性贫血提供新的辅助措施。

关键词： 糖尿病   骨髓细胞   炎症   血糖   细胞因子  

摘要： 目的:探讨糖尿病状态下,骨髓细胞内的炎症与相关因子表达的变化特点。方法:首先通过分析24周龄的Db/db小鼠和同周龄Db/m小鼠的血糖、白细胞亚群以及对白细胞内各成分定量分析等,来验证糖尿病小鼠模型。使用QAM-INF-1芯片,通过Quantibody mouse炎症阵列方法检测8周龄和24周龄的Db/db小鼠骨髓细胞中的炎症因子表达水平,并通过GO富集分析来了解其在细胞组成、生物过程和分子功能方面的作用,以及将差异表达基因进行KEGG富集分析,把差异显著的通路进行富集,找到显著性差异变化的生物学调控通路,探讨在糖尿病小鼠的病程长短与骨髓细胞内的炎症状态变化的关系。结果:空腹血糖的检测结果表示,Db/db小鼠的血糖水平显著高于Db/m小鼠;通过全血血常规对血液细胞分类及计数,Db/db小鼠的血液中的白细胞数、粒细胞数、粒细胞百分比均高于Db/m小鼠;与8周龄的糖尿病小鼠相比,在24周龄的糖尿病小鼠骨髓细胞内,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、金属肽酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达降低,趋化因子配体5(RANTES)、化学趋化因子(CXCL1)、肿瘤坏死因子受体-2(TNFR2)的表达增高。通过GO数据库和KEGG富集分析对筛选出的基因进行了功能注释和通路注释,并用统计方法计算差异基因的富集程度,确定了它们参与的代谢和信号通路。结论:随着糖尿病病程的延长,骨髓细胞的炎症状态逐渐加剧,骨髓细胞内MCP-1和TIMP-1的表达降低,CXCL1、RANTES、TNFR2的表达增高。