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关键词： 前列腺癌   外泌体   免疫逃逸   免疫治疗   肿瘤微环境   Tregs细胞  

摘要： 外泌体最早于1983年被发现,在20世纪90年代,外泌体被认为是细胞用来排泄废物的一种机制。近年来的研究表明,外泌体内携带有复杂的成分,包括蛋白质、核酸、脂质以及其他代谢物。外泌体将这些复杂的成分运输到邻近或远处的细胞,参与细胞间的物质交换和细胞通讯过程,调节细胞稳态、免疫反应和衰老等基本生理过程。几乎所有的细胞都会分泌外泌体,因此外泌体也是恶性肿瘤细胞肿瘤微环境的组成成分,在肿瘤的发生发展、转移、免疫反应及治疗中发挥着重要的作用。前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,外泌体通过其内容物,发挥细胞间物质交换以及信号传递的功能,介导前列腺癌细胞的免疫逃逸过程,促进前列腺癌的发生发展以及转移。本文就外泌体在前列腺癌细胞免疫逃逸中的最新研究进展进行论述。

关键词： 卵巢癌   糖类抗原125   人附睾分泌蛋白4   白细胞介素6   检出率  

摘要： 目的探讨血清糖类抗原125(CA125)、人附睾分泌蛋白4(HE4)及白细胞介素6(IL-6)联合检测卵巢癌患者的价值。方法选取2019年9月至2021年9月我院卵巢癌患者44例为卵巢癌组,1:1配比选取卵巢良性疾病患者44例为良性组,健康体检者44例为健康对照组。对比三组患者血清CA125、HE4、IL-6水平和卵巢癌组不同分期、手术前后血清CA125、HE4、IL-6水平,分析血清CA125、HE4、IL-6对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌组血清CA125、HE4及IL-6水平均较良性组、健康对照组高(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期血清CA125、HE4、IL-6水平均较Ⅰ~Ⅱ期高(P<0.05);术后卵巢癌血清CA125、HE4、IL-6水平较术前低(P<0.05);卵巢癌诊断中血清CA125、HE4及IL-6联合检测的阳性检出率88.64%(39/44)与血清CA125、HE4及IL-6单项检测79.55%(35/44)、75.00%(33/44)、77.27%(34/44)对比无显著差异(P>0.05)。结论卵巢癌患者机体血清CA125、HE4、IL-6表达水平较良性组和健康对照组高,且水平间存在明显差异,卵巢癌患者不同分期、手术前后血清因子水平也存在明显差异,联合检测卵巢癌患者检出率较高,有助于卵巢癌诊断评估。

关键词： PEDV   S1蛋白   单克隆抗体   抗原表位  

摘要： 为研制针对PEDV S1蛋白单克隆抗体,为下一步应用研究奠定材料基础,本研究构建了表达三聚化形态的S1蛋白的重组质粒,利用HEK 293T细胞表达并纯化获得S1蛋白,经免疫小鼠后,制备并筛选分泌S1特异性单克隆抗体的杂交瘤B细胞,制备腹水后利用间接ELISA法测定了腹水效价及单抗的亚型;通过SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验分析制备抗体与病毒S蛋白的特异性结合能力。结果显示,成功表达和纯化三聚化PEDV重组S1蛋白,通过免疫制备筛选了15株特异性识别病毒S蛋白的单克隆抗体。15株单克隆抗体的重链为IgG1型11株,IgG2b型3株,32#抗体未检测到分型结果。除25#抗体未检测到轻链结构外,其余抗体轻链均为kappa链。Western-blot和间接免疫荧光分析表明制备抗体与病毒S蛋白特异性反应。功能域结合试验表明抗体20#、21#、31#与S1 D0区域反应,抗体9#、16#、25#与S1 NTD反应,抗体15#、27#、37#与S1 SD2反应,所制备抗体均无病毒中和活性。结果表明,本研究成功制备了多株可特异性识别PEDVS1蛋白的单克隆抗体,为病毒感染机制研究及免疫学诊断研究提供了重要的生物材料。

关键词： 肝细胞癌   外泌体   Huh-7细胞   抗增殖作用  

摘要： 目的研究所制备的外泌体对肿瘤来源细胞的组织传递和抗增殖作用。方法在37℃、5%二氧化碳、含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM中培养HuH-7细胞系。首先,通过0.22μm过滤器和超离心法分离外泌体。随后,将Cas9和sgRNA质粒转染到HuH-7细胞中,并收集基因组DNA进行T7E1检测,以评估基因编辑效率。通过齐塔电位分析仪、电子显微镜和蛋白印迹技术分析工程外泌体的表征。电穿孔法将sRNA质粒导入外泌体后,采用did标记的外泌体评估细胞摄取情况。采用细胞活力和细胞凋亡试验检测其抗肿瘤活性,采用免疫印迹法检测细胞凋亡标志物。结果HuH-7细胞中HN3LC9-293exo和C9HuH-7exo的荧光信号无差异,而LC9-293exo的荧光信号较低。C9HuH-7exo和HN3LC9-293exo均比LC9-293表现出更好的内化性。CCK-8检测结果显示,HN3LC9-293exo的抗增殖作用强于C9HuH-7exo(P<0.05)。电穿孔的HN3LC9-293exo和C9HuH-7exo进行sRNA传递评估,C9HuH-7exo的摄取效率最高(P<0.05)。经sRNA负载的外泌体处理后,BAX和Caspase 3显著上调,BCL2显著下调。结论HN3LC9-293exo可通过sRNA传递到HuH-7细胞肿瘤微环境中,诱导细胞凋亡,使CRISPR/Cas9基因治疗具有临床意义。

关键词： 固相多肽合成   9-芴甲氧羰基保护基   微波固相多肽合成仪   前列腺靶向膜抗原  

摘要： 目的优化固相多肽合成(SPPS)技术以解决多肽链增长导致的合成效率下降、副产物增加及纯化困难等问题,提升前列腺靶向膜抗原C(Trt)Y-PSMA-1的合成效能。方法采用9-芴甲氧羰基保护基(Fmoc)化学保护策略,结合微波辅助固相合成仪与手工合成技术,以4-甲氧基苄基氨基(MBHA)树脂为固相载体,逐步构建序列为Cys-Tyr-(Lys)-Glu-Glu-Glu-Ahx-Amc-Glu'-CO-Glu(n=1,2,4)的多肽链;通过酸性条件切割多肽-树脂复合物,并利用高效液相色谱(HPLC)纯化与冷冻干燥获取终产物。结果改进方法使偶联效率提升60%,并通过手工补充合成策略解决了长链多肽合成中常见的末端环化问题。结论融合微波辅助与Fmoc保护的SPPS技术显著提高了长链多肽合成效率,为前列腺癌靶向生物材料的规模化制备提供了可重复的技术方案,相关优化策略可推广至其他功能性多肽的合成研究。

关键词： 脓毒症   中性粒细胞   淋巴细胞   单核细胞   诊断   预后  

摘要： 目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)和淋巴细胞与单核细胞比值(LMR)对脓毒症患者诊断和预后的价值。方法 回顾性分析2022年1-12月苏州大学附属第一医院感染病科诊治的脓毒症患者47例(脓毒症组)、有感染但未诊断为脓毒症患者31例(感染组)和同时期健康体检者25名(正常对照组)。脓毒症组根据临床诊断及预后进一步分为未休克组(32例)、休克组(15例)及生存组(38例)、死亡组(9例)。检测降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及血常规项目。比较不同组间的差异,用Spearman相关性分析NLR、LMR与PCT、CRP、淋巴细胞(Lym)、单核细胞(Mon)、中性粒细胞(Neu)、血小板(Plt)及SOFA 评分之间的相关性,通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价NLR、LMR对脓毒症的诊断价值。结果 脓毒症组、感染组和正常对照组的NLR分别为12.54(7.53,23.42)、3.85 (1.83,5.64) 和1.71(1.39,2.20),LMR分别为1.58(1.07,3.03)、2.81(1.53,4.76)和5.16(4.04,6.59)。NLR与LMR呈负相关,相关系数为-0.469(P<0.05)。脓毒症未休克组和休克组的NLR7分别为6.56(3.90,10.72)和15.20(7.53,27.31),入院后7 d NLR-入院后3 d NLR(ΔNLR7)分别为-1.64(-5.75,0.41)和1.98(-0.48,13.79),休克组均显著高于未休克组(P均<0.05);脓毒症生存组和死亡组的NLR7分别为7.10(4.09,12.96)和15.20(10.45,32.82),ΔNLR7分别为 -0.65(-5.58、1.58)和5.02(-1.12,17.06),死亡组均显著高于生存组(P均<0.05)。脓毒症未休克组和休克组的LMR7分别为2.22(1.64,3.78)和1.29(0.66,2.03),入院后7 d LMR-入院后3 d LMR(ΔLMR7)分别为0.38(-0.37,1.17)和-0.19(-0.78,0.25),休克组均显著低于未休克组(P均<0.05);脓毒症生存组和死亡组LMR7分别为2.12(1.49,3.42)和1.09(0.53,1.78),死亡组显著低于生存组(P<0.05)。NLR诊断脓毒症的AUC为0.959 1(95%CI:0.910 5-1.000 0),最佳截断值为4.16;LMR诊断脓毒症的AUC为0.913 6(95%CI:0.846 4-0.980 8),最佳截断值为3.21。结论 NLR和LMR可用于脓毒症严重程度及预后的比较,且在脓毒症的诊断中具有一定的临床参考价值。

关键词： 儿童   热性惊厥   肿瘤坏死因子-α   基因多态性  

摘要： 目的分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)308基因位点多态性在热性惊厥(febrile seizures,FS)患儿中的分布,探讨TNF-α308基因多态性与儿童FS的相关性。方法收集2020年9月1日至2021年6月30日收治于上海市儿童医院急诊科诊断为FS的患儿320例作为研究对象,基于其临床特征分为单纯型热性惊厥(simple febrile seizures,SFS)组232例和复杂型热性惊厥(complex febrile seizures,CFS)组88例,比较两组临床特征与实验室指标;选择既往无惊厥史的健康体检儿童160例为对照组。应用高分辨率熔解曲线和基因测序分析各组患儿TNF-α308基因多态性,比较不同基因类型及等位基因频率在各组间的分布,构建多因素Logistic回归模型分析TNF-α308基因多态性与FS的关系。结果CFS组患儿年龄、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量、血小板分布宽度均高于SFS组,差异有统计学意义(均P<0.05);性别分布、FS家族史、FS既往史、惊厥时体温、WBC、Hb、CRP、PLT在两组间比较,差异无统计学意义(均P>0.05);三组TNF-α308多态性的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);该研究群体中未检测到TNF-α308位点的AA基因型;与对照组[17例(10.6%)]相比,CFS组[22例(25.0%)]和SFS组[52例(22.4%)]GA基因型分布比例较高,差异有统计学意义(χ^(2)=11.126,P=0.004);与对照组[17频次(5.3%)]相比,CFS组[22频次(12.5%)]和SFS组[52频次(11.2%)]等位基因A频率分布比例亦较高,差异有统计学意义(χ^(2)=9.960,P=0.007)。加入性别、年龄、FS家族史、惊厥时体温及血常规各指标等控制因素,构建多因素Logistic回归模型提示TNF-α308基因型与儿童CFS的关联无统计学意义(OR=1.805,95%CI:0.926~3.519,P=0.083)。结论在该研究儿童群体中,未发现TNF-α308基因位点多态性与CFS的显著相关性。

关键词： 碱性成纤维细胞生长因子   热休克蛋白70   肿瘤坏死因子-α   年轻恒牙牙髓坏死   牙髓血管再生术  

摘要： 目的探讨术前龈沟液碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、热休克蛋白70(HSP70)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平对年轻恒牙牙髓坏死患者牙髓血管再生术预后的预测价值。方法前瞻性选取2022年1月—2023年5月在秦皇岛市妇幼保健院行牙髓血管再生术治疗的103例年轻恒牙牙髓坏死患者作为研究对象。于术前检测所有患者龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平,并收集其他基线资料。对可能影响牙髓血管再生术预后的相关因素使用二元logistic回归模型分析。使用受试者工作特征(ROC)曲线评价术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α对牙髓血管再生术预后不良的预测价值。结果年轻恒牙牙髓坏死患者中预后良好率84.47%(87/103),预后不良率15.53%(16/103)。预后良好组与预后不良组年龄、病程、根尖孔直径、牙髓坏死原因,术前bFGF、HSP70、TNF-α水平差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic分析示,牙髓坏死原因为外伤及术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平均是牙髓血管再生术不良预后的独立影响因素(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平预测年轻恒牙牙髓坏死患者牙髓血管再生术预后不良的最佳截断值分别是11.82 ng/ml、34.39 ng/ml、79.49 pg/ml,三者联合检测预测牙髓血管再生术预后不良的价值更高,其曲线下面积为0.864。结论年轻恒牙牙髓坏死患者术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平是牙髓血管再生术预后的独立影响因素,三者联合检测对牙髓血管再生术短期预后具有更好的预测价值。

关键词： 神经病理性疼痛   推拿   委中穴   脊髓   小胶质细胞   白细胞介素10   β-内啡肽  

摘要： 目的 探讨推拿“委中”穴对坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及可能的脊髓中枢机制。方法 32只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、推拿组和阻断组,每组8只。模型组、推拿组和阻断组均采用羊肠线坐骨神经结扎制备CCI模型,假手术组仅暴露坐骨神经不行结扎。推拿组及阻断组自术后第4至14天,采用手套动态压力分布测量系统于“委中”穴行推拿按揉法,压力5 N、频率2 Hz,每次10 min,每日1次;阻断组与推拿时间同步按10 mg/kg予小胶质细胞阻断剂米诺环素腹腔注射,每日1次;假手术组与模型组行与推拿组相同的抓取与固定。观察各组大鼠造模前及造模第3、7、10、14天大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWL);采用透射电镜观察坐骨神经损伤修复情况,测量轴突直径和有髓纤维总直径,计算g-ratio值;蛋白质印迹法检测术侧脊髓背角离子钙结合适配器分子1(Iba-1)、CD206、CD68、白细胞介素10 (IL-10)和β-内啡肽(β-EP)前体阿黑皮素原(POMC)蛋白水平。结果与假手术组同时间比较,模型组大鼠在造模第3、7、10、14天时MWT和PWL均降低(P<0.01);与模型组同时间比较,推拿组和阻断组在造模第10、14天时MWT和PWL均升高(P<0.05);与推拿组同时间比较,阻断组在造模第7、10、14天时MWT升高,在造模第10天时PWL升高(P<0.05)。坐骨神经病理形态学显示,假手术组髓鞘结构完整、形态规则,模型组可见髓鞘崩脱、扭曲及髓鞘球,推拿组髓鞘部分形态不规则、偶见髓鞘崩脱,阻断组髓鞘部分形态不规则、磷脂脱落。与假手术组比较,模型组g-ratio值降低,脊髓背角Iba-1、CD68蛋白水平升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,推拿组和阻断组g-ratio值升高,推拿组和阻断组大鼠Iba-1、CD68水平降低,推拿组CD206、IL-10、POMC蛋白水平升高,阻断组CD206蛋白水平降低(P<0.05)。结论 推拿“委中”穴可缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛,其机制可能是通过调控脊髓小胶质细胞活化,抑制其向M1型极化、促进其向M2型极化,激活IL-10/β-EP通路进而发挥镇痛效应。

关键词： 病毒性心肌炎   预后评估   白细胞介素-6   中性粒细胞与淋巴细胞比值   初始T1值  

摘要： 目的探讨白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophils to lymphocytes ratio,NLR)联合心肌组织平扫初始T1值在病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)预后评估中的价值。方法选取156例VMC确诊患者为研究对象,随访12个月,根据随访结果将患者分为预后不良组(n=40)和预后良好组(n=116)。收集患者的临床资料,采用Logistic回归分析,探讨IL-6、NLR、初始T1值对VMC患者预后的影响。采用ROC曲线评估上述参数对VMC患者预后的预测效能。结果预后不良组IL-6、hs-cTn I、NT-proBNP水平及NLR、初始T1值显著高于预后良好组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic二元回归分析提示,IL-6、NLR、初始T1值均为VMC预后的独立影响因素。ROC曲线分析显示,IL-6、NLR、初始T1值分别以12.895 pg/mL、3.495、1122.0 ms为最佳截断值,三者联合预测VMC患者预后不良的效果优于单项指标,敏感性为87.5%,特异性为96.6%。结论VMC预后不良患者血清IL-6、NLR、初始T1值明显增高,可作为患者预后的辅助预测指标。三项指标联合检测对VMC预后不良具有良好的预测效能。