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关键词： VEGF单克隆抗体   细胞培养工艺   培养基优化   蛋白产量   蛋白纯度  

摘要： 本实验通过优化抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的细胞培养工艺,提升抗体的产量和纯度。实验筛选出高水平表达抗VEGF单克隆抗体的CHO细胞株,并在摇瓶水平和反应器水平分别优化培养基的组成和补料策略,以实现产量和纯度的双重提升。实验结果表明,通过组合使用Dynamis基础培养基和Efficient Feed C+补料培养基,以及采用连续流加的培养方式,能够获得最高的单克隆抗体产量(4.02 g/L)和纯度(96.8%)。本实验为抗VEGF单克隆抗体生物类似药的工艺开发提供了重要的实验数据和理论基础。

关键词： 假设驱动   油气勘探   油气开发   地质模型   数据驱动  

摘要： 2024年6月,笔者到访之江实验室并与国家最高科技奖获得者、中国科学院院士李德仁进行互动交流。在对谈中,李院士不经意地问:“你们油气行业的科研工作是假设驱动还是数据驱动?”笔者略加思索后回答:“油气行业,尤其是上游的勘探开发研究,目前还是以假设驱动为主,也就是先构建一个地质模型,再以此为指导开展迭代研究。”

关键词： 小细胞肺癌   化疗   免疫治疗   疗效预测   外周血T淋巴细胞亚群  

摘要： 目的探讨外周血T淋巴细胞亚群水平对晚期小细胞肺癌(SCLC)化疗联合免疫治疗疗效的预测价值及临床意义。方法收集2023年9月至2024年6月于复旦大学附属中山医院呼吸科接受化疗联合免疫治疗的107例晚期SCLC患者。根据RECIST 1.1标准,72例(CR+PR+SD)纳入有效组,35例(PD)纳入无效组。比较不同疗效组治疗前后患者外周血中T淋巴细胞及肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平变化,分析上述指标对SCLC化疗联合免疫治疗疗效的预测价值。结果外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值)与患者年龄、性别及TNM分期无关(均P>0.05)。治疗2周期后,有效组CD4+/CD8+比值高于无效组(P=0.003),而CEA及NSE水平降低(P<0.001)。治疗4周期后,有效组CD4+水平较无效组升高(P=0.012),CD8+水平降低(P<0.001),CD4+/CD8+比值进一步升高(P<0.001);CEA及NSE水平更低(均P<0.001)。ROC曲线分析显示,CD4+/CD8+比值对治疗反应的独立预测效能最优(AUC=0.812,95%CI:0.726~0.897),CEA和NSE的AUC分别为0.661和0.634。三项指标联合检测提升预测效能(AUC=0.834,95%CI:0.741~0.912),Delong检验证实,联合检测优于单一指标(均P<0.05)。结论外周血T淋巴细胞亚群动态监测联合肿瘤标志物检测可为晚期SCLC免疫联合化疗的疗效评估提供客观依据,CD4+/CD8+比值及CEA、NSE联合对于预测预后具有较高价值。

关键词： 亲环素A   基质金属蛋白酶-9   细胞因子   颞叶癫痫   诊断   预后预测  

摘要： 目的:探讨血清亲环素A(CyPA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)联合细胞因子对颞叶癫痫的诊断及预后预测价值。方法:选取我院2020年10月-2022年10月收治的80例颞叶癫痫患者,根据采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价其认知功能,分为认知功能正常组(n=30)和认知功能异常组(n=50),另选取同期来我院体检的40例健康志愿者作为对照组。对比三组受检者血清CyPA、MMP-9及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(L-6)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用Spearman相关分析血清CyPA、MMP-9及相关细胞因子与颞叶癫痫认知功能的相关性,并建立受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清CyPA、MMP-9联合细胞因子对颞叶癫痫的诊断价值。随后对80例颞叶癫痫患者进行1年随访,依照Engels疗效分级判定其预后水平,将Ⅰ级、Ⅱ级患者设为预后良好组(n=20),将Ⅲ级、Ⅳ级患者设为预后不良组(n=60),对比其血清CyPA、MMP-9及相关细胞因子水平,采用logistics回归模型分析上述指标对颞叶癫痫的预后预测价值。结果:对照组CyPA、MMP-9、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-5、IL-1β水平明显低于认知功能正常组及认知功能异常组(P<0.05),但认知功能正常组与认知功能异常组TNF-α、IFN-γ、IL-5表达水平对比无明显差异(P>0.05);Spearman相关分析结果显示:TNF-α、IFN-γ、IL-5与颞叶癫痫患者认知功能无明显相关性,CyPA、MMP-9、IL-6、IL-1β与颞叶癫痫患者认知功能呈正相关(P<0.05);血清CyPA、MMP-9联合细胞因子的诊断灵敏度为71.57%,特异度为83.56%,联合诊断明显高于单一指标诊断(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者CyPA、MMP-9、IL-6对比差异显著(P<0.05);logistics回归分析显示,CyPA、MMP-9、IL-6是影响癫痫预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清CyPA、MMP-9、IL-6、IL-1β与颞叶癫痫认知功能异常具有一定关系,通过血清CyPA、MMP-9联合细胞因子可提升对颞叶癫痫的诊断效能,且CyPA、MMP-9、IL-6水平可作为颞叶癫痫预后预测的重要指标。

关键词： IL-17A inhibitor   imidazo[1, 2-b]pyridazine   alpha-bromoketone   bromination   biocatalysis   concomitant decarboxylation following enzymatic ester hydrolysis  

摘要： A route to the key alpha-bromoketone intermediate for the synthesis of an imidazo[1,2-b]pyridazine IL-17A inhibitor via Horner-Wadsworth-Emmons condensation of commercially available 4,4-difluorocyclohexan-1-one (8) and methyl 2-(((benzyloxy)carbonyl)amino)-2-(dimethoxyphosphoryl)acetate (7) was developed and scaled up to support the production of drug substance for toxicology and clinical studies. The alpha,beta-didehydroamino acid ester product 13 from Horner-Wadsworth-Emmons condensation was hydrolyzed under basic conditions to afford the corresponding N-protected alpha,beta-didehydroamino acid 14, which was asymmetrically hydrogenated in the presence of the Ru-S-Xyl-Segphos dimer to afford the desired chiral amino acid 15. After activation with carbonyl diimidazole, the resulting acyl imidazole was reacted with the magnesium ethyl malonate complex to afford a beta-oxo ester 17, which was brominated followed by concomitant decarboxylation after enzymatic ester hydrolysis with Lipozyme TL IM to afford the desired alpha-bromoketone intermediate 5. Stress tests and range-finding studies were carried out for all steps to support production. The optimized process was successfully scaled up to deliver 110 kg of alpha-bromoketone intermediate 5 to support the production of an IL-17A inhibitor. The overall yield of the optimized process was significantly improved to 46.5% from the 19.1% of the preclinical supplies process.

关键词： 急性髓系白血病   T细胞免疫治疗   双特异性抗体  

摘要： 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种髓系原始细胞克隆增生的恶性血液肿瘤,具有高度异质性。AML的发生、发展与T细胞表型和功能的改变密切相关,可使T细胞群发生异常,最终导致机体免疫功能衰竭。近些年来,在研究者利用T细胞抗肿瘤活性治疗AML的过程中发现,患者体内功能恢复的T细胞对白血病细胞具有较强的抑制作用。目前,基于T细胞的免疫疗法可分为肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)治疗、双特异性抗体招募T细胞治疗、免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)治疗、嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)治疗和肿瘤特异性受体基因转导的T细胞(tumor-specific receptor gene-transduced T cell,TCR-T)治疗。该文结合了近年来国内外报道T细胞免疫疗法的研究进展,全面综述T细胞免疫疗法对AML治疗的作用及其机制,以期为临床治疗AML提供新策略。

关键词： 老年萎缩性胃炎   早期胃癌   幽门螺杆菌抗体   胃泌素-17   白细胞介素-6   血小板与淋巴细胞比值  

摘要： 目的探讨幽门螺杆菌(Hp)抗体联合血清胃泌素-17(G-17)、白细胞介素-6(IL-6)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)检测对老年萎缩性胃炎与早期胃癌中的临床诊断价值,为临床早期诊治老年萎缩性胃炎与早期胃癌提供支持。方法回顾性分析2023年3月至2024年6月西安交通大学第一附属医院榆林医院收治的94例老年萎缩性胃炎患者的临床资料,纳入萎缩性胃炎组,回顾性分析同期102例老年早期胃癌患者的临床资料,纳入早期胃癌组。比较两组患者Hp抗体阳性率,血清G-17、IL-6水平及全血PLR水平;比较早期胃癌组中Hp抗体阳性患者和Hp抗体阴性患者血清G-17、IL-6及全血PLR水平;利用受试者工作特征(ROC)曲线分析Hp抗体、血清G-17、IL-6、全血PLR单独检测与联合检测对老年萎缩性胃炎与早期胃癌的鉴别诊断效能。结果早期胃癌组Hp抗体阳性占比及血清G-17、IL-6、全血PLR水平均高于萎缩性胃炎组;早期胃癌组中Hp抗体阳性患者血清G-17、IL-6及全血PLR水平均高于Hp抗体阴性患者;ROC曲线分析结果显示,Hp抗体、血清G-17、IL-6及全血PLR均能鉴别诊断老年萎缩性胃炎与早期胃癌,且联合检测的鉴别诊断价值更高(均P<0.05)。结论相较于老年萎缩性胃炎,老年早期胃癌患者Hp抗体阳性占比、血清G-17、IL-6及全血PLR水平均较高,且血清G-17、IL-6及全血PLR升高均与Hp感染密切相关,均可用于鉴别诊断老年萎缩性胃炎与早期胃癌,且联合检测的鉴别诊断价值更高。

关键词： 肝纤维化   HSC-肌成纤维细胞转分化  

摘要： 肝纤维化的核心效应细胞是肌成纤维细胞,这类细胞通过分泌纤维性基质蛋白参与细胞外基质重构。在正常生理状态下,肝脏中并不存在肌成纤维细胞,肌成纤维细胞仅在肝损伤后被激活并介导纤维化进程。而肝纤维化的逆转则依赖于这些细胞通过转分化、衰老或凋亡等途径被及时清除。位于肝实质与肝窦间隙、富含脂滴的肝星状细胞(HSC)是肌成纤维细胞最主要的前体细胞。在“HSC-肌成纤维细胞转分化”过程中,静息态HSC可发生显著的形态与功能转变,获得更强的增殖、迁移、收缩及基质合成能力,这些变化本质上是由细胞转录组的系统性重编程所驱动的。2025年3月,南京大学医学院附属鼓楼医院感染性疾病科李婕教授与山东第一医科大学脑科学与类脑研究院李子龙教授、中国药科大学孔明教授作为共同通信作者,南京大学医学院附属鼓楼医院感染性疾病科赵倩雯作为第一作者在Hepatology上发表文章,研究分别通过腹腔注射四氯化碳和胆管结扎诱导肝纤维化小鼠模型,并采用RNAseq和CUT&Tag-seq检测细胞转录组等方法。结果发现,基于肝纤维化相关单细胞RNA-seq数据挖掘,前B细胞白血病因子1(PBX1)为HSC活化过程中上调最显著的转录因子。Ingenuity通路分析结合报告基因检测和染色质免疫共沉淀实验证实,Notch3在转录水平上介导HSC中PBX1的表达上调。PBX1基因敲除在体外可抑制HSC-肌成纤维细胞转化,在体内小鼠模型中减轻肝纤维化程度。整合转录组分析表明,PBX1通过激活包括白细胞介素7受体(IL-7R/CD127)在内的多个促纤维化分子促进HSC活化。与之一致,重组IL-7处理可促进HSC活化,而IL-7R敲除则显著抑制这一过程。在机制上,IL-7R与TGF-β受体(TβRⅠ/Ⅱ)相互作用,触发促纤维化信号级联。重要的是,使用中和抗体阻断IL-7/IL-7R信号传导显著改善了小鼠的肝纤维化。最后,在肝硬化患者中也发现了PBX1、IL-7R与HSC激活呈正相关。

关键词： Crohn's disease   TNF-alpha   Infliximab   Cytokines  

摘要： A pilot study investigated the cytokine profile (IL-6, TNF-alpha, IL-17 A, and IL-10) at diagnosis, affecting infliximab (IFX) trough levels (TLs) in pediatric patients with Crohn's disease (CD). In this follow-up study, we evaluated the changes in cytokine level changes after Crohn's disease treatment. Cytokines were re-measured after 1 year of treatment. infliximab trough levels and total anti-infliximab antibodies were also measured in patients who had started infliximab treatment. In total, 29 patients followed up for a year after moderate to severe Crohn's disease diagnosis from June 2020 to June 2021 were enrolled. The mean concentrations of all cytokines at one year were significantly lower than those at the time of diagnosis. IL-6, IL-17 A, and IL-10 concentrations at 1 year maintained their correlation with each other observed at diagnosis, unlike TNF-alpha following infliximab treatment. At 1 year, TNF-alpha concentration exhibited a negative correlation with infliximab trough levels (Pearson coefficient = -0.500, p = 0.009), and a positive correlation with anti-infliximab antibody titre (Pearson coefficient = 0.510, p = 0.018). The diagnostic capability of 1-year TNF-alpha concentration to predict achievement of deep remission had an area under the ROC of 0.802 (p = 0.008), with a TNF-alpha cut-off concentration set at 9.40 pg/mL. Decreased cytokine concentrations following Crohn's disease treatment reflected reduced inflammatory burden. Targeted medical intervention (infliximab) aimed at specific cytokines, such as TNF-alpha, led to the reduction of the corresponding cytokines. High TNF-alpha level post-treatment, combined with suboptimal infliximab trough levels and increased antibody formation, may contribute to deep remission failure in patients.