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关键词： 血小板CD36抗原   胶体金免疫层析   试纸条  

摘要： 目的应用胶体金免疫层析技术,研制一种能快速简便检测血小板CD36抗原的胶体金试纸条。方法提取2024年1-10月广州血液中心健康献血者及临床血液病患者血小板标本,制备成血小板悬液共计420例。制备胶体金溶液浓度,胶体金标记抗体以及包被硝酸纤维素膜抗体,最后组装成试纸条。标记抗体浓度为20μg/mL,抗-CD36抗体包被浓度为1.0 mg/mL,兔IgG包被浓度为1.0 mg/mL,加样量为50μL,反应时间5~15 min。采用流式细胞仪和组装后的胶体金试纸条分别检测该420例血小板标本上的CD36抗原,评估试纸条的临床准确性。结果经组装后的胶体金试纸条检测420例血小板标本上的CD36抗原,其中,CD36阳性表达409例,CD36缺失表达11例。流式细胞仪检测该420例血小板标本,CD36阳性表达412例,CD36缺失表达8例。2种方法结果符合率为99.29%。结论试纸条具有操作简单,携带方便,准确性高,无需购置昂贵仪器等特点,检测样本为血小板悬液,适合医院及血站初筛血小板CD36抗原。

关键词： 喉咽清颗粒   风热证   急性咽炎   便秘   免疫球蛋白  

摘要： 目的探讨喉咽清颗粒对风热证急性咽炎伴便秘成人患者的疗效及免疫球蛋白指标的影响。方法选取2023年1月至2024年4月上海电力医院收治的风热证急性咽炎伴便秘成人患者98例,按随机数字表法分为对照组(常规西医治疗)和观察组(在对照组基础上应用喉咽清颗粒),各49例。比较两组患者临床疗效、中医证候积分、慢性便秘严重度评分量表(CCS)评分,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白-A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)及唾液分泌型免疫球蛋白-A(SIgA)水平。结果观察组治疗总有效率较对照组高(P<0.05)。两组治疗前中医证候积分、CCS评分,血清TNF-α、IL-6、CRP、IgA、IgE及唾液SIgA水平无统计学差异(P>0.05);观察组治疗后中医证候积分、CCS评分,血清TNF-α、IL-6、CRP、IgE水平低于对照组(P<0.05),血清IgA及唾液SIgA水平高于对照组(P<0.05)。结论喉咽清颗粒对风热证急性咽炎伴便秘成人患者疗效显著,能缓解临床症状,减少炎症因子分泌,改善免疫球蛋白指标。

关键词： 急性肺炎   Sema7a   巨噬细胞   蛋白质组学   细胞因子  

摘要： 目的探究Sema7a促进急性肺炎炎症消退的分子机制。方法本研究采用Sema7a-eKO基因敲除小鼠模型、HE染色、ELISA检测及蛋白质组学分析等新技术在分子、组织及动物三个水平上,探明了游离Sema7a在调节急性肺炎小鼠模型中巨噬细胞代谢重编程,促进巨噬细胞向M2分化,加速炎症消退及促进肺组织恢复稳态中的作用。结果Sema7a-/-及Sema7a+/+肺炎小鼠模型显示在24、48、72和96 h时两组小鼠肺泡结构均有不同程度的破坏。与Sema7a+/+小鼠相比,Sema7a-/-小鼠肺组织浸润更多的中性粒细胞及红细胞,肺泡结构破坏更明显,且表现出更强的中性粒细胞浸润及更长的消退间隔(26.2 h vs.13.8 h,P<0.05);ELISA分析显示在第48 h时,Sema7a-/-小鼠肺泡灌洗液中IL-6、KC、TNF-α和IL-1β显著高于Sema7a+/+对照组小鼠(P均<0.05);我们通过5D Label-free蛋白质组学技术明确了Sema7a处理后MΦs中101320个肽段和7357个蛋白质的变化,GO二级功能注释分析显示巨噬细胞生物进程有59个蛋白质分子的变化与其细胞变化过程相关,52个蛋白质分子的变化与生物学功能的调节相关,37个蛋白质分子的变化与其代谢过程相关(P均<0.05);KEGG通路注释和富集分析显示线粒体呼吸链信号通路变化显著,Sema7a刺激后MΦs表面的M1标记物(STAT-1,CD40,CD80)和炎症细胞因子显著降低,而M2标记物(Arg1、CD163和CD20)和IL-10在蛋白水平显著增加。结论游离Sema7a蛋白可通过调节急性肺炎模型中巨噬细胞代谢重编程增强其氧化磷酸化水平,促进巨噬细胞向M2型细胞分化,进而促进肺部炎症消退,最终使肺组织恢复稳态。

关键词： 冠心病合并心肌桥   分泌型卷曲相关蛋白5   血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3   前降支支架置入术   支架内再狭窄  

摘要： 目的探讨冠心病合并心肌桥患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、血清补体C1q/肿瘤坏死因子(TNF)相关蛋白3(CTRP3)水平与前降支支架置入术后支架内再狭窄(ISR)的相关性。方法将100例行前降支支架置入术的冠心病合并心肌桥患者根据ISR发生情况分为良好组(68例)与不良组(32例)。收集所有患者的一般临床资料与实验室检查结果并分组进行比较。采用pearson相关分析评估术后发生ISR患者血清SFRP5与CTRP3的相关性;采用多因素logistic回归分析评估患者术后发生ISR的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清SFRP5、CTRP3对冠心病合并心肌桥患者患者前降支支架置入术后发生ISR的预测价值。结果良好组患者血清SFRP5、CTRP3水平显著高于不良组,心肌桥长度低于不良组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,术后发生ISR患者血清SFRP5与CTRP3呈正相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,血清SFRP5、CTRP3均为患者术后发生ISR的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清SFRP5、CTRP3两者联合对患者术后ISR的预测价值高于二者单独预测(P<0.05)。结论前降支支架置入术后发生ISR的冠心病合并心肌桥患者血清SFRP5、CTRP3水平均显著降低,血清SFRP5、CTRP3降低增加患者术后发生ISR的风险,两者联合对患者术后发生ISR有一定预测价值。

关键词： 头颈鳞癌   m7G甲基转移酶1   淋巴细胞激活基因-3   细胞生物学  

摘要： 目的探讨m7G甲基转移酶1(METTL1)调控淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)表达对头颈鳞癌(HNSCC)细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响及可能机制。方法收集2022年5月至2024年5月荆门市中心医院手术切除的50例HNSCC组织及对应癌旁正常组织。头颈鳞癌FaDu细胞根据不同的处理分为siRNA-阴性对照(si-NC组)、干扰METTL1(si-METTL1组)、si-METTL1与过表达阴性对照共转染(si-METTL1+oe-NC组)及si-METTL1与过表达LAG-3共转染(si-METTL1+oe-LAG-3组)。蛋白质免疫印迹法检测组织和细胞中METTL1和LAG-3表达。双荧光素酶报告基因实验分析METTL1和LAG-3的靶向关系。CCK-8法和EdU法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭能力。Western blotting检测各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及上皮间充质转化相关蛋白上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。结果与HOK细胞和癌旁组织比较,FaDu细胞和HNSCC组织中METTL1蛋白表达升高[(1.00±0.08)vs.(1.58±0.11),(1.00±0.10)vs.(2.34±0.12)],LAG-3蛋白表达也升高[(1.02±0.10)vs.(1.94±0.13),(1.01±0.09)vs.(1.87±0.11)],差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实METTL1和LAG-3存在靶向关系。与si-NC组比较,si-METTL1组METTL1蛋白表达[(1.00±0.10)vs.(0.39±0.08)]、细胞增殖率[(53.56±6.07)%vs.(22.67±4.25)%]、迁移细胞数[(80.35±9.10)个vs.(33.84±5.27)个]、侵袭细胞数[(89.48±11.05)个vs.(41.56±4.27)个]、PCNA蛋白[(1.00±0.11)vs.(0.61±0.08)]及N-cadherin蛋白[(1.00±0.10)vs.(0.53±0.08)]表达均显著降低(P<0.05),LAG-3蛋白[(1.00±0.09)vs.(1.84±0.13)]、E-cadherin蛋白[(1.00±0.10)vs.(1.37±0.12)]表达明显升高(P<0.05);与si-METTL1+oe-NC组比较,si-METTL1+oe-LAG-3组LAG-3蛋白表达[(1.77±0.11)vs.(2.94±0.13)]、增殖率[(21.57±4.31)%vs.(51.28±6.57)%]、迁移细胞数[(32.16±5.65)个vs.(69.15±6.02)个]、侵袭细胞数[(43.08±4.09)个vs.(73.68±8.91)个]、PCNA蛋白[(0.59±0.07)vs.(0.95±0.10)]及N-cadherin蛋白[(0.55±0.10)vs.(0.89±0.09)]表达均明显升高(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达[(1.40±0.10)vs.(0.98±0.09)]明显降低(P<0.05)。结论METTL1在HNSCC中高表达,并通过靶向LAG-3调控HNSCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

关键词： 西方蜜蜂   意大利蜜蜂   纳米孔测序   体液免疫   可变剪接   可变多聚腺苷酸化  

摘要： 本研究旨在利用已获得的纳米孔长读段测序数据鉴定和分析意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica体液免疫通路相关基因及全长转录本,为深入开展功能研究提供资源与基础。使用Blast工具将鉴定到的所有全长转录本比对Nr数据库以筛选出体液免疫通路相关基因和剪接体。采用gffcompare软件将全长转录本与西方蜜蜂Apis mellifera参考基因组(Amel_HAv3.1)上注释的转录本进行比较来优化已注释基因的结构。利用TAPIS pipeline预测和分析相关基因的可变多聚腺苷酸化(Alternative polyadenylation,APA)位点,再通过TBtools软件鉴定APA位点上游的基序。使用Astalavista软件鉴定可变剪接(Alternative splicing,AS)事件,进而通过IGV浏览器进行结构可视化。通过RT-PCR验证AS事件的真实性。分别鉴定到Toll信号通路相关的26个基因和41条剪接体,Imd信号通路相关的9个基因和11条剪接体,JNK-MAPK-p38信号通路相关的18个基因和21条剪接体,JAK-STAT信号通路相关的9个基因和13条剪接体。共对西方蜜蜂参考基因组上注释到体液免疫通路的20个基因进行了结构优化,正链和负链结构优化的基因分别有5个和15个,5'端和3'端延长的基因有13个和7个,其中有两个基因(LOC724728;LOC411861)的5'端和3'端都有延长。共鉴定到体液免疫通路相关基因的69次AS事件,包括2次可变3'端剪接(Alternative 3'splice site,A3SS)、17次内含子保留(Intron retention,IR)、14次可变5'端剪接(Alternative 5'splice site,A5SS)和36次外显子跳跃(Exon skipping,ES)。RT-PCR结果显示目的片段大小符合预期,证实了随机选择的6次AS事件的真实性。共鉴定到体液免疫通路相关的40个基因含1个及以上APA位点。在APA位点上游鉴定到多个基序,一致性序列为:GGWRRWRTHAARHTWKSYGAYTTTGGTRTWTCNGSDHRMHTDRYHGMWWS。通过3'RACE证实了2个基因的APA位点真实性。鉴定到意大利蜜蜂体液免疫通路相关的62个基因和86条剪接体,优化了西方蜜蜂体液免疫通路相关的20个基因结构,发掘出体液免疫通路相关基因的69次AS事件与106个APA位点,证实了相关基因的AS事件和APA位点的真实性。

关键词： 重症肺炎   成人   支气管肺泡灌洗术   临床症状   血清指标  

摘要： 目的评估支气管肺泡灌洗术对成人重症肺炎疗效以及对血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法共纳入安康市中医医院2020年1月至2023年12月收治的102例成人重症肺炎患者,采用随机分层抽样法将患者分为对照组和研究组。对照组男28例,女23例;年龄45~70(58.24±6.53)岁;体重指数(24.56±3.21)kg/m^(2);病程7~20(12.48±3.67)d。研究组男27例,女24例;年龄46~69(57.92±6.28)岁;体重指数(24.78±3.15)kg/m^(2);病程8~19(12.35±3.54)d。对照组接受盐酸氨溴索注射液治疗,15 mg盐酸氨溴索与50 ml 5%葡萄糖注射液混合后静脉滴注,滴注时间约30 min,每日两次;研究组在此基础上联合电子支气管镜支气管肺泡灌洗术治疗,每周1~2次,两组均治疗14 d。比较两组患者临床症状(咳嗽、咳痰、发热)消失时间,血清指标(sICAM-1、IL-6)、呼吸力学指标[气道阻力(RAW)、肺动态顺应性(Cdyn)、呼吸做功量(WOB)]、临床肺部感染评分(CPIS)、急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分和不良反应(恶心、皮肤瘙痒、气道出血、气道痉挛、腹泻)发生情况。统计学方法采用t检验、χ^(2)检验。结果研究组咳嗽、发热、咳痰消失时间为(2.22±1.11)d、(1.46±0.38)d、(2.41±0.34)d,短于对照组(6.45±1.06)d、(2.51±0.57)d、(5.77±0.82)d,差异均有统计学意义(t=19.682、10.946、27.031,均P<0.05)。治疗14 d后,研究组的sICAM-1和IL-6水平为(134.51±28.17)µg/L、(17.41±1.53)µg/L,低于对照组(168.25±35.44)µg/L、(23.20±1.86)µg/L,差异均有统计学意义(t=5.322、17.168,均P<0.05);研究组的RAW和WOB为(9.71±2.15)cmH_(2)O/(L·s)(1 cmH_(2)O=0.098 kPa)、(0.53±0.09)J/L,低于对照组(11.87±2.68)cmH_(2)O/(L·s)、(0.65±0.14)J/L,Cdyn为(36.84±4.99)ml/cmH_(2)O,高于对照组(32.63±4.85)ml/cmH_(2)O,差异均有统计学意义(t=4.490、5.149、4.321,均P<0.05);研究组的CPIS和APACHEⅡ评分为(3.41±0.83)分、(11.65±2.74)分,低于对照组(4.76±1.21)分、(14.55±3.19)分,差异均有统计学意义(t=6.570、4.925,均P<0.05)。研究组的不良反应发生率为3.92%(2/51),低于对照组的13.73%(7/51),但差异无统计学意义(χ^(2)=3.047,P=0.081)。结论支气管肺泡灌洗术能有效改善成人重症肺炎患者的临床症状,降低sICAM-1和IL-6水平,改善呼吸力学指标,并降低CPIS和APACHEⅡ评分,显示出较高的安全性和耐受性。

关键词： 原发性高胆固醇血症   混合型高脂血症   前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂  

摘要： 目前,前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂作为一类新兴的药物,在原发性高胆固醇和混合型高脂血症疾病临床实践中占据了一席之地。《2022 ACC专家共识决策路径:非他汀类药物降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在动脉粥样硬化性心血管疾病风险管理中的作用》根据心血管结局试验现有结局数据和安全性特征,推荐将PCSK9单克隆抗体作为PCSK9抑制剂首选治疗药物。该共识进一步肯定PCSK9单克隆抗体的治疗地位,明确推荐其作为部分心血管病一级预防和二级预防人群的联合治疗首选药物。

关键词： 布托啡诺   HMGB1-RAGE   IL-1β   人关节软骨细胞   凋亡  

摘要： 目的:探究布托啡诺调节HMGB1-RAGE信号通路对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡的影响。方法:体外培养人关节软骨细胞,CCK-8法测定0、1、2、4、6、8μmol/L布托啡诺处理的10 ng/ml IL-1β诱导前后人关节软骨细胞存活率,选出布托啡诺最佳作用浓度。体外培养人关节软骨细胞并随机分为对照组、IL-1β组、IL-1β+布托啡诺组、IL-1β+空载组、IL-1β+布托啡诺+HMGB1过表达组,除对照组外,其余各组以10 ng/ml IL-1β诱导建立骨关节炎(OA)体外细胞模型,布托啡诺和质粒分组处理各组细胞后CCK-8、EdU染色检测各组细胞增殖;流式细胞实验检测各组细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组人关节软骨细胞ROS含量;ELISA检测各组细胞炎症相关因子IL-6、TNF-α、IL-18产生水平;试剂盒检测各组细胞抗氧化酶过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性水平;免疫印迹检测各组细胞凋亡蛋白(Bax、Cleaved Caspase-3)与HMGB1-RAGE通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,IL-1β组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-1β组相比,IL-1β+布托啡诺组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达降低(P<0.05);IL-1β+空载组各指标无明显变化(P>0.05)。与IL-1β+布托啡诺组相比,IL-1β+布托啡诺+HMGB1过表达组人关节软骨细胞存活率、增殖率、CAT、SOD、GSH-Px水平降低(P<0.05),凋亡率、ROS相对含量、IL-6、TNF-α与IL-18产生水平、Bax、Cleaved Caspase-3、HMGB1、RAGE蛋白表达升高(P<0.05)。结论:布托啡诺可通过降低HMGB1-RAGE信号活性减轻IL-1β诱导的人关节软骨细胞炎症,增强其抗氧化活性,从而抑制软骨细胞凋亡。

关键词： 慢性阻塞性肺疾病   清金化浊方   免疫炎症反应   IL-33/ST2通路  

摘要： 目的:从白细胞介素33(IL-33)/血清刺激素2(ST2)通路介导的炎症损伤角度研究清金化浊方治疗慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)痰热瘀肺证模型大鼠的作用机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、清金化浊方干预组,采取复合因素创立大鼠COPD痰热瘀肺证模型,给予清金化浊方干预14 d后收集实验动物肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)及外周血清。HE染色观察动物气道黏膜和肺泡结构病理改变;免疫组化检测肺组织中IL-33、ST2的表达;荧光定量PCR检测肺组织中IL-33 mRNA、ST2 mRNA表达;ELISA检测肺组织、BALF及外周血清中白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素9(IL-9)含量。结果:HE染色提示模型组大鼠肺组织有显著的炎性细胞浸润,经清金化浊方干预后炎性细胞浸润减少。与空白组相比,模型组大鼠肺组织IL-33、ST2表达增多(P<0.05),IL-33 mRNA、ST2 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组相比,清金化浊方干预组大鼠肺组织IL-33、ST2表达降低(P<0.05),IL-33 mRNA、ST2 mRNA水平降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组大鼠BALF、肺组织中IL-4、IL-9蛋白表达升高(P<0.05),血清IL-9蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,清金化浊方干预组大鼠BALF中IL-4蛋白表达降低(P<0.05),血清、肺组织中IL-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论:清金化浊方可通过抑制IL-33/ST2通路,降低IL-4、IL-9的分泌,抑制炎症反应,发挥治疗COPD痰热瘀肺证的作用。