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关键词： 金环蛇   多克隆抗体   胃蛋白酶   F(ab′)_(2)片段   层析纯化  

摘要： 为制备高纯度马源金环蛇毒多克隆抗体F(ab′)_(2),以金环蛇毒高免马血浆为原料,采用Protein G亲和层析捕获马血浆中的IgG,经胃蛋白酶酶解后制得F(ab′)_(2),分别通过亲和层析、凝胶过滤层析和混合模式层析对F(ab′)_(2)进行精制纯化,并以间接ELISA法测定F(ab′)_(2)对金环蛇毒的中和活性。结果表明:Protein G亲和层析捕获的IgG纯度为83.6%,较传统的盐析纯化法有明显提高;在3种层析精制方法中,通过凝胶过滤层析精制的F(ab′)_(2)纯度最高,为89.3%,远高于《中华人民共和国药典》标准(60%以上),且收率为56.0%;间接ELISA法测定结果显示,F(ab′)_(2)的效价高于1∶4096。该研究为马源抗毒素多克隆抗体F(ab′)_(2)的工业化制备提供了工艺参考。

关键词： 淋巴瘤   多发性骨髓瘤   铁代谢   铁死亡  

摘要： 铁作为一种重要的微量元素,参与机体的多种生理过程。研究发现,肿瘤的发生发展与铁代谢异常密切相关,且作用方式呈现明显异质性。肿瘤细胞需要更多的铁来促进自身存活和增殖,但过量的铁也会对肿瘤细胞产生不利的影响,如铁死亡等。铁死亡是一种特殊的调节性细胞死亡机制,不同于其他的细胞调节死亡途径,其主要通过铁依赖的过氧化脂质和活性氧(ROS)过度积累,从而诱导细胞死亡。在血液系统中,淋巴瘤及多发性骨髓瘤(MM)的肿瘤细胞都对铁死亡较敏感,且通过多种机制影响疾病进展。本文就淋巴瘤的部分亚型及MM中的铁死亡机制进行阐述,揭示血液肿瘤细胞铁死亡与血液肿瘤发生发展的相关性,旨在为治疗这些血液系统疾病提供新的思路。

关键词： γ-干扰素   白细胞介素-4   同型半胱氨酸   寻常型银屑病   颈动脉粥样硬化  

摘要： 目的 探讨寻常型银屑病(PV)患者外周血γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法 选取2022年7月—2023年11月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院PV患者128例(PV组)和健康体检者66名(正常对照组)。收集所有研究对象的临床资料,并检测血脂、IFN-γ、IL-4、Hcy水平,测量颈动脉内膜中层厚度(CIMT)。根据是否合并CAS将PV患者分为CAS组(53例)和非CAS组(75例)。采用Pearson相关分析评估PV患者各项指标与CIMT的相关性。采用Logistic回归分析评估PV患者发生CAS的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标单项检测和联合检测判断PV患者发生CAS的效能。结果 与正常对照组比较,PV组血清IFN-γ、Hcy水平和CIMT均显著升高(P <0.001),血清IL-4水平显著降低(P <0.001)。PV患者血清IFN-γ、Hcy与CIMT呈正相关(r值分别为0.273、0.184,P<0.05),血清IL-4与CIMT呈负相关(r=-0.307,P<0.05)。CAS组血清LDL-C、IFN-γ、Hcy水平和CIMT均显著高于非CAS组(P<0.001),血清IL-4水平显著低于非CAS组(P<0.001);其他指标2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。LDL-C、IFN-γ、Hcy水平升高和IL-4水平降低是PV患者发生CAS的危险因素(P<0.05)。血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IFN-γ、IL-4、Hcy单项检测和联合检测判断PV患者发生CAS的曲线下面积(AUC)分别为0.723、0.707、0.855、0.732、0.916。结论 血清IFN-γ、IL-4、Hcy与PV患者发生CAS有关,或可作为PV患者发生CAS的辅助诊断指标。

关键词： 血液恶性肿瘤   血流感染   T淋巴细胞亚群   诊断价值  

摘要： 目的探讨外周血T淋巴细胞亚群检测对血液恶性肿瘤患者合并血流感染(BSI)的诊断价值。方法前瞻性选取2023年1月至2023年11月四川省隆昌市人民医院收治的120例血液恶性肿瘤合并BSI患者作为BSI组,选取同期收治的135例未合并BSI的血液恶性肿瘤患者作为非BSI组,另选取同期139例健康志愿者作为对照组。采用流式细胞仪检测三组患者血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比。采用多因素logistic回归分析探讨血液恶性肿瘤患者合并BSI的影响因素。受试者操作特征(ROC)曲线分析CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值对血液恶性肿瘤患者合并BSI的诊断价值。结果BSI组120例患者血培养共检出菌株132株,其中革兰氏阴性菌占65.91%,革兰氏阳性菌占28.79%,真菌占5.30%。BSI组、非BSI组CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值均明显低于对照组,且BSI组低于非BSI组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,CD3^(+)T淋巴细胞百分比(OR=0.773)、CD4^(+)T淋巴细胞百分比(OR=0.745)、CD4^(+)/CD8^(+)比值(OR=0.714)、降钙素原(PCT)(OR=1.874)、白细胞计数(OR=1.742)、经外周静脉置入中心静脉导管留置时间(OR=1.581)、抗生素使用种类(OR=1.396)均为血液恶性肿瘤患者合并BSI的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值联合诊断恶性血液肿瘤患者合并BSI的曲线下面积(0.913,95%CI 0.872~0.945)高于CD3^(+)T淋巴细胞(Z=3.716,P<0.001)、CD4^(+)T淋巴细胞(Z=4.093,P<0.001)、CD4^(+)/CD8^(+)比值(Z=4.764,P<0.001)单独诊断。结论血液恶性肿瘤合并BSI患者的T淋巴细胞亚群失衡,CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值联合应用对血液恶性肿瘤患者合并BSI具有一定诊断价值。

关键词： 后发性白内障   白介素-8(IL-8)   晶状体上皮细胞   细胞迁移   单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)   NF-κB/p65信号通路  

摘要： 目的:探究炎症因子白介素-8(IL-8)影响后发性白内障(PCO)细胞迁移的过程中对晶状体上皮细胞(LEC)分泌的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的调控作用。方法:构建大鼠晶状体囊袋模型,采用10%胎牛血清培养撕囊后的晶状体囊袋使LEC迁移至后囊30%-50%面积后,撤去血清,将囊袋分为对照组和15 ng/mL IL-8组,并在不同时间点进行拍照观察囊袋LEC迁移。ELISA法和RT-qPCR检测不同组MCP-1的分泌和信使RNA(mRNA)相对表达水平。免疫荧光检测不同组MCP-1表达水平。将SRA01/04细胞分为对照组、15 ng/mL IL-8组和15 ng/mL IL-8+200μmol/L Bindarit(BND)组,用Transwell法检测不同组迁移细胞数量。将SRA01/04细胞分为阴性对照(NC)组、NC+15 ng/mL IL-8组及15 ng/mL IL-8+p65 siRNA组,ELISA法和RT-qPCR检测不同组MCP-1的分泌和mRNA相对表达水平。结果:体外培养的大鼠晶状体囊袋LEC迁移水平显示,在48、72、96 h时15 ng/mL IL-8组囊袋内细胞迁移明显增加(均P<0.05)。ELISA的结果显示,15 ng/mL IL-8组囊袋和SRA01/04细胞与对照组相比较,在12、24 h分泌的MCP-1的水平升高(均P<0.05);RT-qPCR的结果同样显示15 ng/mL IL-8组SRA01/04细胞在12、24 h分泌的MCP-1 mRNA的相对表达水平增高(均P<0.05)。免疫荧光的结果显示,与对照组相比,24 h时15 ng/mL IL-8组的囊袋上皮细胞MCP-1表达水平升高(P=0.007)。Transwell的检测结果显示,与对照组相比,15 ng/mL IL-8组迁移数量增加(P=0.001);与15 ng/mL IL-8组相比,15 ng/mL IL-8+200μmol/L BND组迁移数量减少(P=0.003)。ELISA和RT-qPCR的结果显示,与NC组相比,NC+15 ng/mL IL-8组在12、24 h时的MCP-1分泌和mRNA的相对表达增加(均P<0.01);与NC+15 ng/mL IL-8组比较,15 ng/mL IL-8+p65 siRNA组在12、24 h时的MCP-1分泌和mRNA的相对表达减少(均P<0.01)。结论:IL-8可促进囊袋内残留上皮细胞的迁移,调控晶状体上皮细胞MCP-1的分泌和表达水平,推测其作用机制与NF-κB/p65信号通路有关。

关键词： 鸡传染性贫血病毒   转移因子   免疫抑制   细胞因子  

摘要： 为探索转移因子的免疫增强作用及其对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)感染的抑制作用,试验研究了高、低两种剂量转移因子对SPF鸡CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞水平,鸡白细胞介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)等6种细胞因子和Mx抗病毒蛋白表达的影响,以及对SPF鸡体重、器官发育指数、红细胞压积(HCT)值和血液、肝脏、胸腺中CIAV增殖的影响。结果显示:转移因子可引起CD4^(+)和CD8^(+)T细胞比重显著增加并上调IFN-γ、Mx蛋白表达量(P<0.01);CIAV感染组的脾脏发育指数相对于空白对照组显著增加(P<0.05),胸腺发育指数极显著降低(P<0.01),转移因子可以缓解感染CIAV带来的脾脏肿大和胸腺萎缩;转移因子可显著抑制CIAV在血液、肝脏和胸腺中的复制(P<0.01),且高剂量组抑制作用强于低剂量组;CIAV感染组血浆HCT值极显著低于空白对照组(P<0.01),高剂量转移因子使用后缓解了CIAV感染引起的HCT值下降。研究表明,转移因子对缓解CIAV感染引起的危害具有良好的应用价值,为防控鸡传染性贫血提供新的辅助措施。

关键词： 质粒DNA   参考品   数字PCR   紫外分光光度法  

摘要： 目的建立可检测早期区域1A(early region 1A,E1A)蛋白和猿猴病毒40大T抗原(simian virus 40 large T anti-gen,SV40LTA)残留DNA的质粒参考品,并探索基于数字PCR法对质粒参考品拷贝数标定的分析技术,从而准确定量质粒参考品,为生物制品中宿主DNA残留检测提供新的思路。方法构建质粒pUC19-E1A-SV40LTA,全基因合成后进行扩增,以得到足够的质粒参考品;采用数字PCR仪,分别用E1A和SV40LTA引物探针体系的双荧光通道对其进行拷贝数检测;将数字PCR标定拷贝数的参考品应用于qPCR中,建立检测E1A和SV40LTA特定序列的方法。对建立的qPCR体系进行质粒参考品线性、准确性、定量限、精密性、特异性、适用性、稳定性验证,并应用建立的qPCR体系对重组腺病毒(recombinant adenovirus,rAdV)、重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)样本进行检测。结果用数字PCR双荧光通道检测质料参考品的E1A和SV40LTA靶点的拷贝数基本一致,其中用E1A引物探针体系检测值为3.55×10^(9)copies/μL,SV40LTA引物探针体系检测值为3.48×10^(9)copies/μL,这两种检测值的变异系数(CV)为1.42%,取平均值3.51×10^(9)copies/μL作为数字PCR的标定值。用数字PCR标定拷贝数建立的qPCR体系线性、准确性、定量限、精密性、特异性、适用性、稳定性良好,检测rAdV、rAAV样本的回收率均在70%130%之间。结论建立了可检测生物制品中E1A和SV40LTA残留的质粒参考品,并引入了更为灵敏和准确的数字PCR方法对其进行定量。该参考品可应用于以HEK293、HEK293T为宿主细胞生产的基因治疗产品中E1A和SV40LTA残留DNA检测。

关键词： 糖尿病   骨髓细胞   炎症   血糖   细胞因子  

摘要： 目的:探讨糖尿病状态下,骨髓细胞内的炎症与相关因子表达的变化特点。方法:首先通过分析24周龄的Db/db小鼠和同周龄Db/m小鼠的血糖、白细胞亚群以及对白细胞内各成分定量分析等,来验证糖尿病小鼠模型。使用QAM-INF-1芯片,通过Quantibody mouse炎症阵列方法检测8周龄和24周龄的Db/db小鼠骨髓细胞中的炎症因子表达水平,并通过GO富集分析来了解其在细胞组成、生物过程和分子功能方面的作用,以及将差异表达基因进行KEGG富集分析,把差异显著的通路进行富集,找到显著性差异变化的生物学调控通路,探讨在糖尿病小鼠的病程长短与骨髓细胞内的炎症状态变化的关系。结果:空腹血糖的检测结果表示,Db/db小鼠的血糖水平显著高于Db/m小鼠;通过全血血常规对血液细胞分类及计数,Db/db小鼠的血液中的白细胞数、粒细胞数、粒细胞百分比均高于Db/m小鼠;与8周龄的糖尿病小鼠相比,在24周龄的糖尿病小鼠骨髓细胞内,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、金属肽酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达降低,趋化因子配体5(RANTES)、化学趋化因子(CXCL1)、肿瘤坏死因子受体-2(TNFR2)的表达增高。通过GO数据库和KEGG富集分析对筛选出的基因进行了功能注释和通路注释,并用统计方法计算差异基因的富集程度,确定了它们参与的代谢和信号通路。结论:随着糖尿病病程的延长,骨髓细胞的炎症状态逐渐加剧,骨髓细胞内MCP-1和TIMP-1的表达降低,CXCL1、RANTES、TNFR2的表达增高。

关键词： 辅助性T淋巴细胞   C-反应蛋白   脓毒性休克   预测价值  

摘要： 目的 探索辅助性T淋巴细胞(CD3^(+)CD4^(+))和C-反应蛋白(CRP)对脓毒性休克患者28d预后的预测价值。方法 回顾性收集2021年3月至2024年4月金华市人民医院收治的101例脓毒性休克患者的临床资料,根据患者28d预后分为死亡组(40例)和存活组(61例),利用Logistic回归分析探究脓毒性休克患者28d死亡的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析CD3^(+)CD4^(+)、CRP单独及联合检测对脓毒休克患者28d死亡的预测价值。根据最佳cut-off值对患者进行亚组分析,绘制Kaplan-Meier生存曲线。结果 多因素Logistic回归分析显示,高CRP (OR=1.009,95%CI=1.001~1.018,P <0.05)、高CD3+CD4+(OR=0.996,95%CI=0.993~0.999,P <0.05)、高SOFA评分(OR=1.229,95%CI=1.050~1.440,P <0.05)、合并急性肾损伤(OR=4.559,95%CI=1.409~14.745,P <0.05)为脓毒性休克患者28 d死亡的独立影响因素。CD3^(+)CD4^(+)、CRP单独及联合预测脓毒性休克患者28d死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.642、0.654、0.700。亚组分析显示,CD3^(+)CD4^(+)<210.14个/μl组脓毒性休克患者28d病死率显著高于CD3^(+)CD4^(+)≥210.14个/μl组(P<0.05),CRP>102.08 mg/L组脓毒性休克患者28d病死率显著高于CRP≤102.08mg/L组(P<0.05),其与Kaplan-Meier生存曲线分析结果一致。结论 CD3+CD4+和CRP均对脓毒性休克患者28 d预后有一定的预测价值,且两者联合预测效果更优。

关键词： 肝肿瘤   乙肝核心抗体   乙型肝炎,隐匿性,慢性   功能性治愈   感染后免疫  

摘要： 肝癌是全球最常见的癌症类型之一,发病率在中国尤为突出。乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝细胞癌(HCC)的最主要风险因素。隐匿性乙肝感染(OBI)、感染后免疫(PII)和功能性治愈(FC)的人群,尽管乙肝表面抗原阴性,但因HBV基因组残留和慢性炎症等因素,其肝癌风险仍显著高于从未感染过HBV的个体。本文对OBI、PII和FC与肝癌的关联,特别是乙肝核心抗体阳性下肝癌患者的特点、风险机制的研究进展进行综述。