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关键词： 急性脑梗死   血塞通注射液   神经功能缺损程度   炎症反应   神经细胞因子  

摘要： 目的 分析血塞通注射液对老年急性脑梗死(ACI)患者神经细胞因子的影响。方法 采用前瞻性单中心对照试验,选取2019年1月~2023年7月于宝鸡高新医院神经内科接受基础治疗(包括常规吸氧、抗凝、抗血小板、调血脂、营养治疗、扩血管、改善循环等),阿替普酶及血塞通注射液治疗的老年ACI患者102例纳入血塞通组(n=102);另按1∶1比例纳入102例接受基础治疗、阿替普酶治疗的老年ACI患者纳入阿替普酶组(n=102)。两组治疗时间为10 d。比较两组患者治疗前、治疗10 d后神经功能缺损程度、运动功能、生活能力、炎症反应、神经细胞因子,治疗10 d后疗效,治疗期间安全性。结果 较治疗前,治疗10 d后两组患者血清白介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CPR)、淀粉样蛋白(SAA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)水平,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分降低,两组差异有统计学意义(t=11.668、11.518、9.738、12.500、18.460、6.345,P<0.05)。治疗10 d后两组Fugl-Meyer评定量表(FMA)、Barthel指数(BI)评分,血清神经生长因子(NGF)水平升高,差异有统计学意义(t=12.266、24.434、7.092,P<0.05)。治疗10 d后,两组总有效率比较,血塞通组更高(92.16%vs.76.47%),差异有统计学意义(χ^(2)=9.488,P<0.05)。治疗期间,两组不良反应发生率差异无统计学意义(χ^(2)=1.005,P> 0.05)。结论 血塞通注射液可改善老年ACI患者神经功能缺损程度,提高运动功能、生活能力,可能与其调节炎症反应、神经细胞因子有关,疗效确切,安全性良好。

关键词： 根皮素   急性肺损伤   炎症   白细胞介素-6/酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3通路  

摘要： 目的探讨根皮素调节白介素(IL)-6/酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对急性肺损伤(ALI)大鼠炎性反应的影响。方法SPF级SD大鼠60只随机分为ALI组、对照组、根皮素组、重组大鼠IL-6蛋白(rRIL-6)组、根皮素+rRIL-6组,每组12只。除对照组外,其他各组大鼠均通过气管内滴注LPS的方法构建ALI模型,建模成功后立即给药,1次/d,持续2周。检测大鼠肺功能气峰流速(PIF)、每分钟通气量(MV)、呼气峰流速(PEF)的变化;流式细胞术检测大鼠肺泡中CD86+M1型巨噬细胞、CD206+M2型巨噬细胞变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-10、精氨酸酶1(Arg-1)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;检测肺组织湿重/干重比值;HE染色检测肺组织病理变化;Western blot检测肺组织p-JAK2、IL-6、p-STAT3蛋白。结果与对照组比较,ALI组肺组织可观察到炎症细胞浸润、肺泡壁增厚、肺泡破坏等病理损伤,PIF、MV、PEF、BALF中IL-10、Arg-1水平降低,肺泡中CD86+M1型巨噬细胞增多,CD206+M2型巨噬细胞减少,BALF中IFN-γ水平、肺组织湿重/干重比值及p-JAK2、IL-6、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05);与ALI组比较,根皮素组肺组织病理损伤减轻,PIF、MV、PEF、BALF中IL-10、Arg-1水平升高,肺泡中CD86+M1型巨噬细胞减少,CD206+M2型巨噬细胞增多,BALF中IFN-γ水平、肺组织湿重/干重比值及p-JAK2、IL-6、p-STAT3蛋白表达降低,rRIL-6组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);rRIL-6减弱了根皮素对ALI大鼠炎性反应的抑制作用以及对肺水肿和肺损伤的改善作用。结论根皮素抑制ALI大鼠炎性反应,减轻肺水肿以及肺损伤的机制可能与阻断IL-6/JAK2/STAT3通路有关。

关键词： 前列腺癌   外泌体   免疫逃逸   免疫治疗   肿瘤微环境   Tregs细胞  

摘要： 外泌体最早于1983年被发现,在20世纪90年代,外泌体被认为是细胞用来排泄废物的一种机制。近年来的研究表明,外泌体内携带有复杂的成分,包括蛋白质、核酸、脂质以及其他代谢物。外泌体将这些复杂的成分运输到邻近或远处的细胞,参与细胞间的物质交换和细胞通讯过程,调节细胞稳态、免疫反应和衰老等基本生理过程。几乎所有的细胞都会分泌外泌体,因此外泌体也是恶性肿瘤细胞肿瘤微环境的组成成分,在肿瘤的发生发展、转移、免疫反应及治疗中发挥着重要的作用。前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,外泌体通过其内容物,发挥细胞间物质交换以及信号传递的功能,介导前列腺癌细胞的免疫逃逸过程,促进前列腺癌的发生发展以及转移。本文就外泌体在前列腺癌细胞免疫逃逸中的最新研究进展进行论述。

关键词： 卵巢癌   糖类抗原125   人附睾分泌蛋白4   白细胞介素6   检出率  

摘要： 目的探讨血清糖类抗原125(CA125)、人附睾分泌蛋白4(HE4)及白细胞介素6(IL-6)联合检测卵巢癌患者的价值。方法选取2019年9月至2021年9月我院卵巢癌患者44例为卵巢癌组,1:1配比选取卵巢良性疾病患者44例为良性组,健康体检者44例为健康对照组。对比三组患者血清CA125、HE4、IL-6水平和卵巢癌组不同分期、手术前后血清CA125、HE4、IL-6水平,分析血清CA125、HE4、IL-6对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌组血清CA125、HE4及IL-6水平均较良性组、健康对照组高(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期血清CA125、HE4、IL-6水平均较Ⅰ~Ⅱ期高(P<0.05);术后卵巢癌血清CA125、HE4、IL-6水平较术前低(P<0.05);卵巢癌诊断中血清CA125、HE4及IL-6联合检测的阳性检出率88.64%(39/44)与血清CA125、HE4及IL-6单项检测79.55%(35/44)、75.00%(33/44)、77.27%(34/44)对比无显著差异(P>0.05)。结论卵巢癌患者机体血清CA125、HE4、IL-6表达水平较良性组和健康对照组高,且水平间存在明显差异,卵巢癌患者不同分期、手术前后血清因子水平也存在明显差异,联合检测卵巢癌患者检出率较高,有助于卵巢癌诊断评估。

关键词： 肠道菌群   体液免疫   细胞因子   类风湿   关节炎   骨质疏松  

摘要： 目的探讨肠道菌群和体液免疫细胞因子水平与类风湿关节炎(RA)患者骨质疏松的关系。方法选取2021年10月至2024年3月在河北中石油中心医院治疗的100例RA患者为研究对象,根据是否伴骨质疏松分为伴骨质疏松组(n=44)和不伴骨质疏松组(n=56),分析比较两组患者临床资料、体液免疫细胞因子指标及肠道菌群的差异。结果伴骨质疏松组患者腰椎T值低于不伴骨质疏松组患者(P<0.05);伴骨质疏松组患者白细胞介素-10(IL-10)水平低于不伴骨质疏松组患者(P<0.05),而红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)水平高于不伴骨质疏松组患者(P<0.05);伴骨质疏松组患者变形菌门相对丰度为高于不伴骨质疏松组患者(P<0.05),疣微菌门相对丰度为低于骨质疏松组患者(P<0.05);变形菌门相对丰度、ESR和CRP与腰椎T值呈负相关(P<0.05),IL-10和疣微菌门相对丰度与腰椎T值呈正相关(P<0.05)。结论类风湿性关节炎患者骨质疏松可能与肠道菌群和体液免疫细胞因子有关。

关键词： PEDV   S1蛋白   单克隆抗体   抗原表位  

摘要： 为研制针对PEDV S1蛋白单克隆抗体,为下一步应用研究奠定材料基础,本研究构建了表达三聚化形态的S1蛋白的重组质粒,利用HEK 293T细胞表达并纯化获得S1蛋白,经免疫小鼠后,制备并筛选分泌S1特异性单克隆抗体的杂交瘤B细胞,制备腹水后利用间接ELISA法测定了腹水效价及单抗的亚型;通过SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验分析制备抗体与病毒S蛋白的特异性结合能力。结果显示,成功表达和纯化三聚化PEDV重组S1蛋白,通过免疫制备筛选了15株特异性识别病毒S蛋白的单克隆抗体。15株单克隆抗体的重链为IgG1型11株,IgG2b型3株,32#抗体未检测到分型结果。除25#抗体未检测到轻链结构外,其余抗体轻链均为kappa链。Western-blot和间接免疫荧光分析表明制备抗体与病毒S蛋白特异性反应。功能域结合试验表明抗体20#、21#、31#与S1 D0区域反应,抗体9#、16#、25#与S1 NTD反应,抗体15#、27#、37#与S1 SD2反应,所制备抗体均无病毒中和活性。结果表明,本研究成功制备了多株可特异性识别PEDVS1蛋白的单克隆抗体,为病毒感染机制研究及免疫学诊断研究提供了重要的生物材料。

关键词： 肝细胞癌   外泌体   Huh-7细胞   抗增殖作用  

摘要： 目的研究所制备的外泌体对肿瘤来源细胞的组织传递和抗增殖作用。方法在37℃、5%二氧化碳、含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM中培养HuH-7细胞系。首先,通过0.22μm过滤器和超离心法分离外泌体。随后,将Cas9和sgRNA质粒转染到HuH-7细胞中,并收集基因组DNA进行T7E1检测,以评估基因编辑效率。通过齐塔电位分析仪、电子显微镜和蛋白印迹技术分析工程外泌体的表征。电穿孔法将sRNA质粒导入外泌体后,采用did标记的外泌体评估细胞摄取情况。采用细胞活力和细胞凋亡试验检测其抗肿瘤活性,采用免疫印迹法检测细胞凋亡标志物。结果HuH-7细胞中HN3LC9-293exo和C9HuH-7exo的荧光信号无差异,而LC9-293exo的荧光信号较低。C9HuH-7exo和HN3LC9-293exo均比LC9-293表现出更好的内化性。CCK-8检测结果显示,HN3LC9-293exo的抗增殖作用强于C9HuH-7exo(P<0.05)。电穿孔的HN3LC9-293exo和C9HuH-7exo进行sRNA传递评估,C9HuH-7exo的摄取效率最高(P<0.05)。经sRNA负载的外泌体处理后,BAX和Caspase 3显著上调,BCL2显著下调。结论HN3LC9-293exo可通过sRNA传递到HuH-7细胞肿瘤微环境中,诱导细胞凋亡,使CRISPR/Cas9基因治疗具有临床意义。

关键词： 固相多肽合成   9-芴甲氧羰基保护基   微波固相多肽合成仪   前列腺靶向膜抗原  

摘要： 目的优化固相多肽合成(SPPS)技术以解决多肽链增长导致的合成效率下降、副产物增加及纯化困难等问题,提升前列腺靶向膜抗原C(Trt)Y-PSMA-1的合成效能。方法采用9-芴甲氧羰基保护基(Fmoc)化学保护策略,结合微波辅助固相合成仪与手工合成技术,以4-甲氧基苄基氨基(MBHA)树脂为固相载体,逐步构建序列为Cys-Tyr-(Lys)-Glu-Glu-Glu-Ahx-Amc-Glu'-CO-Glu(n=1,2,4)的多肽链;通过酸性条件切割多肽-树脂复合物,并利用高效液相色谱(HPLC)纯化与冷冻干燥获取终产物。结果改进方法使偶联效率提升60%,并通过手工补充合成策略解决了长链多肽合成中常见的末端环化问题。结论融合微波辅助与Fmoc保护的SPPS技术显著提高了长链多肽合成效率,为前列腺癌靶向生物材料的规模化制备提供了可重复的技术方案,相关优化策略可推广至其他功能性多肽的合成研究。

关键词： 碱性成纤维细胞生长因子   热休克蛋白70   肿瘤坏死因子-α   年轻恒牙牙髓坏死   牙髓血管再生术  

摘要： 目的探讨术前龈沟液碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、热休克蛋白70(HSP70)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平对年轻恒牙牙髓坏死患者牙髓血管再生术预后的预测价值。方法前瞻性选取2022年1月—2023年5月在秦皇岛市妇幼保健院行牙髓血管再生术治疗的103例年轻恒牙牙髓坏死患者作为研究对象。于术前检测所有患者龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平,并收集其他基线资料。对可能影响牙髓血管再生术预后的相关因素使用二元logistic回归模型分析。使用受试者工作特征(ROC)曲线评价术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α对牙髓血管再生术预后不良的预测价值。结果年轻恒牙牙髓坏死患者中预后良好率84.47%(87/103),预后不良率15.53%(16/103)。预后良好组与预后不良组年龄、病程、根尖孔直径、牙髓坏死原因,术前bFGF、HSP70、TNF-α水平差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic分析示,牙髓坏死原因为外伤及术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平均是牙髓血管再生术不良预后的独立影响因素(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平预测年轻恒牙牙髓坏死患者牙髓血管再生术预后不良的最佳截断值分别是11.82 ng/ml、34.39 ng/ml、79.49 pg/ml,三者联合检测预测牙髓血管再生术预后不良的价值更高,其曲线下面积为0.864。结论年轻恒牙牙髓坏死患者术前龈沟液bFGF、HSP70、TNF-α水平是牙髓血管再生术预后的独立影响因素,三者联合检测对牙髓血管再生术短期预后具有更好的预测价值。

关键词： 儿童   热性惊厥   肿瘤坏死因子-α   基因多态性  

摘要： 目的分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)308基因位点多态性在热性惊厥(febrile seizures,FS)患儿中的分布,探讨TNF-α308基因多态性与儿童FS的相关性。方法收集2020年9月1日至2021年6月30日收治于上海市儿童医院急诊科诊断为FS的患儿320例作为研究对象,基于其临床特征分为单纯型热性惊厥(simple febrile seizures,SFS)组232例和复杂型热性惊厥(complex febrile seizures,CFS)组88例,比较两组临床特征与实验室指标;选择既往无惊厥史的健康体检儿童160例为对照组。应用高分辨率熔解曲线和基因测序分析各组患儿TNF-α308基因多态性,比较不同基因类型及等位基因频率在各组间的分布,构建多因素Logistic回归模型分析TNF-α308基因多态性与FS的关系。结果CFS组患儿年龄、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量、血小板分布宽度均高于SFS组,差异有统计学意义(均P<0.05);性别分布、FS家族史、FS既往史、惊厥时体温、WBC、Hb、CRP、PLT在两组间比较,差异无统计学意义(均P>0.05);三组TNF-α308多态性的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);该研究群体中未检测到TNF-α308位点的AA基因型;与对照组[17例(10.6%)]相比,CFS组[22例(25.0%)]和SFS组[52例(22.4%)]GA基因型分布比例较高,差异有统计学意义(χ^(2)=11.126,P=0.004);与对照组[17频次(5.3%)]相比,CFS组[22频次(12.5%)]和SFS组[52频次(11.2%)]等位基因A频率分布比例亦较高,差异有统计学意义(χ^(2)=9.960,P=0.007)。加入性别、年龄、FS家族史、惊厥时体温及血常规各指标等控制因素,构建多因素Logistic回归模型提示TNF-α308基因型与儿童CFS的关联无统计学意义(OR=1.805,95%CI:0.926~3.519,P=0.083)。结论在该研究儿童群体中,未发现TNF-α308基因位点多态性与CFS的显著相关性。