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关键词： ^(89)Zr   单克隆抗体   正电子发射断层显像(PET)  

摘要： 锆-89(^(89)Zr)是一种金属正电子核素,具有较长的半衰期和适中的能量,同时可以通过低能量回旋加速器得到高纯度的^(89)Zr,适用于正电子发射计算机断层显像(PET),尤其成为大分子生物活性物质如抗体标记的核素理想选择。近年来,依托于单克隆抗体药物的发展,^(89)Zr标记单抗药物的研究取得了显著进展,目前已有部分药物进入临床Ⅱ期、Ⅲ期阶段。在标记方法上,^(89)Zr最常用的螯合剂为去铁胺(DFO),已应用于临床,但研究者们仍在不断探索更优的配体。在螯合剂与单抗偶联技术方面,不同形式的DFO衍生物仍是主要研究对象。本文介绍了^(89)Zr的标记方法、螯合剂偶联技术以及^(89)Zr标记单抗类药物的研究进展,并对该类药物所面临的问题与挑战,以及未来发展前景进行分析和展望。

关键词： 高效液相色谱   电喷雾检测器   单克隆抗体药物   泊洛沙姆188   辅料   质量控制  

摘要： 目的建立高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)测定单克隆抗体药物中泊洛沙姆188含量的方法。方法采用HPLC-CAD法建立泊洛沙姆188含量的检测方法,并对该方法的专属性、线性、准确度、中间精密度、重复性和耐用性进行验证。结果该方法专属性强。在2.5~80μg/mL范围内,泊洛沙姆188的含量和峰面积线性相关,决定系数R^(2)>0.99。7个不同泊洛沙姆188含量验证溶液(2.5,5,10,20,40,60,80μg/mL)的回收率在90%~110%范围内。在3个不同工作日内对上述7个验证溶液各进行3次独立测定,其浓度的变异系数分别为5.01%,4.77%,1.06%,1.42%,1.37%,0.37%及0.45%。对40μg/mL浓度水平验证溶液重复进样6次,其泊洛沙姆188含量测定值的RSD为0.61%。配制的样品分别于0 h和室温保存24 h后对40μg/mL浓度水平验证溶液进行检测,泊洛沙姆188浓度的RSD为0.52%。结论成功建立了检测单抗药物中泊洛沙姆188含量的高效液相色谱法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可用于单克隆抗体药物中泊洛沙姆188含量进行质量控制。

关键词： 炎症性肠病   中医药   辅助性T细胞17   调节性T细胞   短链脂肪酸   细胞免疫  

摘要： 炎症性肠病(IBD)是一种慢性非特异性免疫疾病。目前IBD发病机制不明,治疗有局限性。临床表明,IBD发病受环境、遗传、免疫因素影响。研究发现,IBD患者肠道内具有明显的免疫功能紊乱,其中Th17细胞的异常增多和Treg细胞数量持续降低是其典型症状之一。免疫细胞的持续失衡将导致IBD的症状加重且不易治愈。在临床治疗IBD的过程中发现,调节患者肠道内Th17/Treg细胞的平衡可有效减轻IBD相关症状,并提高疾病的治愈率。因此,有学者认为调节Th17/Treg细胞平衡,恢复肠道免疫功能,可作为缓解IBD患者症状的有效治疗靶点。目前,通过调节免疫治疗IBD的西药存在疗效差、副作用较大且价格较为昂贵等缺点。而中药具有作用靶点广、价格较低廉、原料易获得等优势。研究表明,许多中药复方及中药天然产物内的效应成分具有显著的免疫调节作用,并可通过调节Th17细胞与Treg细胞的平衡来改善IBD的症状。本文就近年来中药复方以及中药天然产物中有效成分通过调节Th17、Treg细胞的平衡来治疗IBD的研究进展进行综述。

关键词： 酵母微囊   纳米乳   免疫佐剂   亚单位疫苗   细胞免疫应答  

摘要： 利用酵母衍生的微囊多级装载纳米乳佐剂MF59和抗原,以解决MF59佐剂不能直接包载抗原以及诱导细胞免疫能力不足的问题。利用强酸碱法制备酵母微囊(yeast microcapsules,YC),其具有多孔、中空的结构和较好的佐剂效应。将聚合物聚己内酯-聚乙烯亚胺(polycaprolactone-polyethyleneimine,PCL-PEI)修饰MF59纳米乳获得正电性的乳粒,通过静电力驱动使乳粒自发沉积到YC中,并进一步吸附抗原鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),得到共载抗原和佐剂的疫苗YC-MF59-OVA。YC-MF59-OVA基于囊壳上β-葡聚糖可被抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APCs)识别而内吞,同时在接种部位募集抗原提呈细胞,进而有效激活机体免疫响应,使血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平相比游离OVA升高了2~3倍;诱导了显著高于OVA的IFN-γ^(+)CD8^(+)、IL-4^(+)CD4^(+)T细胞免疫应答,刺激脾组织中记忆性CD44^(+)CD62L^(+)T细胞比例显著升高。本动物实验方案经遵义医科大学实验动物伦理委员会审核批准(批准号:ZMU21-2407-169)。研究结果表明,YC-MF59-OVA能够激活强效的体液免疫应答和细胞免疫应答,证实YC能够显著弥补纳米乳佐剂的不足,为后续疫苗递送系统的开发提供新的参考。

关键词： 乳腺癌   免疫球蛋白超家族成员3   转移  

摘要： 目的探索免疫球蛋白超家族成员3(IGSF3)在转移性三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达差异及其对TNBC细胞功能的影响。方法通过生信分析IGSF3基因在三阴性乳腺癌中的表达,收集2019年1月至2019年12月经新疆医科大学附属肿瘤医院确诊为TNBC且术后病理证实腋窝淋巴结转移数目≥3个的女性患者20例[年龄(58.628±12.422)岁;Ⅱ期4例,Ⅲ期16例;肿瘤直径>5 cm患者7例,≤5 cm患者13例;组织学分级Ⅱ级14例,Ⅲ级6例],患者的乳腺癌原发灶癌组织、转移淋巴结癌组织以及癌旁正常乳腺组织作为研究对象,使用免疫组织化学法(IHC)检测IGSF3的表达,构建IGSF3敲减MDA-MB-231细胞模型,设置空白对照组:无siRNA;阴性对照组:转染阴性对照siRNA复合物;敲减组:转染IGSF3特异性siRNA复合物,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)验证敲减效率,运用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、迁移和侵袭测定实验(Transwell)检测细胞增殖、转移能力。IHC评分结果采用威尔考克森符号秩检验,组间差异采用两独立样本t检验。结果生信分析表明IGSF3在TNBC组织表达量高于正常组织(5.399比4.951,Z=4.702,P<0.01)。IHC结果显示,TNBC原发灶癌组织中IGSF3表达评分高于癌旁组织(Z=3.963,P<0.01),转移癌组织评分高于原发灶癌组织(Z=3.073,P<0.01)。qRT-PCR结果显示敲减组IGSF3表达量低于阴性对照组及空白对照组(0.230±0.121比0.910±0.060、1.007±0.150,t=8.720、6.985,P<0.05),Western blot检测显示敲减组IGSF3表达量低于阴性对照组及空白对照组(0.443±0.057比0.762±0.079、0.742±0.056,t=5.672、6.481,P<0.05)。CCK-8结果显示敲减组细胞存活率低于阴性对照组及空白对照组[(65.036±4.316)%比(101.299±9.046)%、(100.000±5.391)%,t=6.266、8.770,P<0.05)。Transwell结果显示敲减组细胞迁移数量低于阴性对照组及空白对照组(107.667±12.220比256.333±20.108、249.000±9.000,t=10.943、16.129,P<0.05);敲减组细胞侵袭数量低于阴性对照组及空白对照组(73.333±9.866比185.667±16.042、180.333±15.567,t=10.331、10.056,P<0.05)。结论IGSF3在TNBC癌组织及转移癌组织中高表达。IGSF3的表达影响TNBC细胞MDA-MB-231的增殖及转移能力。

关键词： VEGF单克隆抗体   细胞培养工艺   培养基优化   蛋白产量   蛋白纯度  

摘要： 本实验通过优化抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的细胞培养工艺,提升抗体的产量和纯度。实验筛选出高水平表达抗VEGF单克隆抗体的CHO细胞株,并在摇瓶水平和反应器水平分别优化培养基的组成和补料策略,以实现产量和纯度的双重提升。实验结果表明,通过组合使用Dynamis基础培养基和Efficient Feed C+补料培养基,以及采用连续流加的培养方式,能够获得最高的单克隆抗体产量(4.02 g/L)和纯度(96.8%)。本实验为抗VEGF单克隆抗体生物类似药的工艺开发提供了重要的实验数据和理论基础。

关键词： 假设驱动   油气勘探   油气开发   地质模型   数据驱动  

摘要： 2024年6月,笔者到访之江实验室并与国家最高科技奖获得者、中国科学院院士李德仁进行互动交流。在对谈中,李院士不经意地问:“你们油气行业的科研工作是假设驱动还是数据驱动?”笔者略加思索后回答:“油气行业,尤其是上游的勘探开发研究,目前还是以假设驱动为主,也就是先构建一个地质模型,再以此为指导开展迭代研究。”

关键词： 小细胞肺癌   化疗   免疫治疗   疗效预测   外周血T淋巴细胞亚群  

摘要： 目的探讨外周血T淋巴细胞亚群水平对晚期小细胞肺癌(SCLC)化疗联合免疫治疗疗效的预测价值及临床意义。方法收集2023年9月至2024年6月于复旦大学附属中山医院呼吸科接受化疗联合免疫治疗的107例晚期SCLC患者。根据RECIST 1.1标准,72例(CR+PR+SD)纳入有效组,35例(PD)纳入无效组。比较不同疗效组治疗前后患者外周血中T淋巴细胞及肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平变化,分析上述指标对SCLC化疗联合免疫治疗疗效的预测价值。结果外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值)与患者年龄、性别及TNM分期无关(均P>0.05)。治疗2周期后,有效组CD4+/CD8+比值高于无效组(P=0.003),而CEA及NSE水平降低(P<0.001)。治疗4周期后,有效组CD4+水平较无效组升高(P=0.012),CD8+水平降低(P<0.001),CD4+/CD8+比值进一步升高(P<0.001);CEA及NSE水平更低(均P<0.001)。ROC曲线分析显示,CD4+/CD8+比值对治疗反应的独立预测效能最优(AUC=0.812,95%CI:0.726~0.897),CEA和NSE的AUC分别为0.661和0.634。三项指标联合检测提升预测效能(AUC=0.834,95%CI:0.741~0.912),Delong检验证实,联合检测优于单一指标(均P<0.05)。结论外周血T淋巴细胞亚群动态监测联合肿瘤标志物检测可为晚期SCLC免疫联合化疗的疗效评估提供客观依据,CD4+/CD8+比值及CEA、NSE联合对于预测预后具有较高价值。

关键词： IL-17A inhibitor   imidazo[1, 2-b]pyridazine   alpha-bromoketone   bromination   biocatalysis   concomitant decarboxylation following enzymatic ester hydrolysis  

摘要： A route to the key alpha-bromoketone intermediate for the synthesis of an imidazo[1,2-b]pyridazine IL-17A inhibitor via Horner-Wadsworth-Emmons condensation of commercially available 4,4-difluorocyclohexan-1-one (8) and methyl 2-(((benzyloxy)carbonyl)amino)-2-(dimethoxyphosphoryl)acetate (7) was developed and scaled up to support the production of drug substance for toxicology and clinical studies. The alpha,beta-didehydroamino acid ester product 13 from Horner-Wadsworth-Emmons condensation was hydrolyzed under basic conditions to afford the corresponding N-protected alpha,beta-didehydroamino acid 14, which was asymmetrically hydrogenated in the presence of the Ru-S-Xyl-Segphos dimer to afford the desired chiral amino acid 15. After activation with carbonyl diimidazole, the resulting acyl imidazole was reacted with the magnesium ethyl malonate complex to afford a beta-oxo ester 17, which was brominated followed by concomitant decarboxylation after enzymatic ester hydrolysis with Lipozyme TL IM to afford the desired alpha-bromoketone intermediate 5. Stress tests and range-finding studies were carried out for all steps to support production. The optimized process was successfully scaled up to deliver 110 kg of alpha-bromoketone intermediate 5 to support the production of an IL-17A inhibitor. The overall yield of the optimized process was significantly improved to 46.5% from the 19.1% of the preclinical supplies process.

关键词： 亲环素A   基质金属蛋白酶-9   细胞因子   颞叶癫痫   诊断   预后预测  

摘要： 目的:探讨血清亲环素A(CyPA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)联合细胞因子对颞叶癫痫的诊断及预后预测价值。方法:选取我院2020年10月-2022年10月收治的80例颞叶癫痫患者,根据采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价其认知功能,分为认知功能正常组(n=30)和认知功能异常组(n=50),另选取同期来我院体检的40例健康志愿者作为对照组。对比三组受检者血清CyPA、MMP-9及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(L-6)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用Spearman相关分析血清CyPA、MMP-9及相关细胞因子与颞叶癫痫认知功能的相关性,并建立受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清CyPA、MMP-9联合细胞因子对颞叶癫痫的诊断价值。随后对80例颞叶癫痫患者进行1年随访,依照Engels疗效分级判定其预后水平,将Ⅰ级、Ⅱ级患者设为预后良好组(n=20),将Ⅲ级、Ⅳ级患者设为预后不良组(n=60),对比其血清CyPA、MMP-9及相关细胞因子水平,采用logistics回归模型分析上述指标对颞叶癫痫的预后预测价值。结果:对照组CyPA、MMP-9、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-5、IL-1β水平明显低于认知功能正常组及认知功能异常组(P<0.05),但认知功能正常组与认知功能异常组TNF-α、IFN-γ、IL-5表达水平对比无明显差异(P>0.05);Spearman相关分析结果显示:TNF-α、IFN-γ、IL-5与颞叶癫痫患者认知功能无明显相关性,CyPA、MMP-9、IL-6、IL-1β与颞叶癫痫患者认知功能呈正相关(P<0.05);血清CyPA、MMP-9联合细胞因子的诊断灵敏度为71.57%,特异度为83.56%,联合诊断明显高于单一指标诊断(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者CyPA、MMP-9、IL-6对比差异显著(P<0.05);logistics回归分析显示,CyPA、MMP-9、IL-6是影响癫痫预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清CyPA、MMP-9、IL-6、IL-1β与颞叶癫痫认知功能异常具有一定关系,通过血清CyPA、MMP-9联合细胞因子可提升对颞叶癫痫的诊断效能,且CyPA、MMP-9、IL-6水平可作为颞叶癫痫预后预测的重要指标。