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关键词： 周围神经病   干燥综合征   T细胞大颗粒淋巴细胞白血病  

摘要： 本文报告1例38岁男性患者,因“行走不稳伴视物重影半年”就诊于复旦大学附属华山医院神经内科,入院后完善神经电生理、实验室化验、臂丛神经MRI、髓流式细胞检测、唇腺活检、淋巴结切除活检等检查,最终确诊为干燥综合征相关周围神经病合并T细胞大颗粒淋巴细胞白血病,予以甲泼尼龙冲击加环磷酰胺免疫治疗,患者症状及实验室指标改善。该病例的诊疗过程揭示了两种疾病的相关性,也为类似患者的早期诊断与治疗管理提供了参考。

摘要：

Abstract

A novel T-cell bispecific antibody (TCB), RO7283420, engaging CD3 and the HLA-A2-Wilms tumor protein 1 complex, was evaluated in this phase 1 study to characterize safety and tolerability, determine the maximum tolerated dose (MTD), and recommend a phase 2 dose for patients with relapsed/refractory acute myeloid leukemia in 2 groups: hematologic (group I, n = 57) and molecular (group 2, n = 5) relapse. In group I, 51 received RO7283420 intravenously (IV) and 6 subcutaneously. The IV doses ranged from 0.15-4 mg (flat; n = 13), 3-18 mg (step-up; n = 34) every 3 weeks, or 9 mg weekly (step-up; n = 4). The MTD was 1/3/12 mg every 3 weeks. The most frequent adverse event in the overall population was cytokine release syndrome (61.3%) with grade ≥3 recorded in 9.7% of patients. Twelve dose-limiting toxicities were reported in 11 patients and 12 (19.4%) grade 5 adverse events, including 1 hemophagocytic lymphohistiocytosis case related to RO7283420. Among the 42 efficacy-evaluable IV patients in group I, 4.8% achieved complete remission (CR), and 2.4% achieved CR with incomplete hematologic recovery. RO7283420 induced pharmacodynamic changes in peripheral blood (PB) at doses ≥1 mg, including significant T-cell activation and expansion in the PB and bone marrow (BM). Significant associations were found between blast reduction and baseline immunophenotype, including lower regulatory T cells and higher non-exhausted CD8⁺ T cells in BM. Although dose escalation was discontinued because of limited efficacy and lack of an exposure-BM response relationship, the observed pharmacodynamics underscore the promising potential of this class of TCBs targeting intracellular antigens. This trial was registered at

牛冠状病毒S蛋白生物信息学分析及其受体结合域的多克隆抗体制备

韩翔舒 宫震 刘淑悦 范昊宇 付修龙 李晓卓 梁纤纤 郑启铭 李月 平继辉 蒋松 夏俊 

石河子大学动物科技学院 新疆石河子832061新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心) 新疆乌鲁木齐830000新疆农业大学动物医学学院 新疆乌鲁木齐830000南京农业大学动物医学院 江苏南京210095

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关键词： 牛冠状病毒   S蛋白   受体结合域   生物特性   多克隆抗体  

摘要： 旨在预测和分析牛冠状病毒(BCoV)S蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为疫苗研究和实验室诊断提供基础。利用生物信息学软件预测分析S蛋白生物学特性,克隆其受体结合域(RBD)基因并与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒后转化BL21感受态细胞并利用IPTG诱导表达,表达的蛋白经镍柱纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体并检测。结果:S蛋白由1364个氨基酸组成,相对分子质量为150.81 kDa,等电点为5.51,不稳定指数为33.22,脂溶性指数为87.22;该蛋白1~1307 aa为胞外区,1308~1330 aa为跨膜区,1331~1363 aa为胞内区,1~14 aa为信号肽,310~612 aa为RBD;有36个潜在的B细胞表位,RBD中包含12个;该蛋白α-螺旋占27.95%,β-折叠占23.04%,无规则卷曲占49.01%;分析S蛋白三级结构,与二级结构预测结果基本一致;成功克隆了S蛋白RBD,大小与预期相符,与载体pET-30a(+)连接后经双酶切、测序验证表明载体构建成功;经SDS-PAGE与Western blot验证蛋白成功表达后,将纯化后的蛋白免疫小鼠并分离血清,效价可达1∶128000;经间接免疫荧光试验与Western blot验证多克隆抗体能够识别病毒S蛋白,证明重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导产生病毒特异性抗体。结论:成功分析和预测了BCoV S蛋白的结构及功能,并获得S蛋白RBD的重组蛋白及多克隆抗体,为后续的研究奠定了基础。

关键词： 原发性胆汁性胆管炎   熊去氧胆酸   金属基质蛋白酶1   白细胞介素6   治疗  

摘要： 目的 探讨影响熊去氧胆酸(UDCA)治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者血清金属基质蛋白酶1(MMP-1)和白细胞介素6(IL-6)水平变化及其临床意义。方法 2022年1月~2024年1月我院诊治的疗52例PBC患者,均接受UDCA治疗6个月,另选择同期健康体检者50例作为对照,采用ELISA法检测血清MMP-1和IL-6水平,采用多因素Logistic回归分析影响治疗应答的因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清MMP-1和IL-6水平预测治疗应答的效能。结果 治疗前PBC患者血清MMP-1水平为(8.6±1.9)ng/mL,显著低于健康人【(12.1±2.8)ng/mL,P<0.05】,血清IL-6水平为(9.8±2.4)pg/mL,显著高于健康人【(6.1±1.5)pg/mL,P<0.05】;在治疗6个月末,PCB患者血清MMP-1水平升高,而血清IL-6水平降低(P<0.05);17例LudwigⅢ/Ⅳ期PBC患者基线血清MMP-1水平显著低于,而血清IL-6水平显著高于35例LudwigⅠ/Ⅱ期PBC患者(P<0.05);本组获得完全应答(CR)者31例(59.6%),不完全应答(ICR)者21例(40.4%);ICR组LudwigⅢ/Ⅳ期(76.2%对3.2%)、合并脂肪肝(47.6%对9.7%)和血清AMA阴性占比(38.1%对12.9%)及血清总胆红素【(37.6±11.4)μmol/L对(19.1±1.6)μmol/L】、MMP-1【(7.6±1.5)ng/mL对(9.3±1.7)ng/mL】和IL-6水平【(11.4±2.8)pg/mL对(9.0±1.8)pg/mL】与CR组比,存在显著性差异(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,LudwigⅢ/Ⅳ期、血清胆红素水平高、MMP-1水平降低和IL-6水平升高均为影响接受UDCA治疗的PBC患者短期应答的因素(P<0.05);ROC分析显示,血清MMP-1水平低于8.0 ng/mL或/和IL-6水平高于10.6pg/mL预示治疗应答不完全(P<0.05)。结论 监测接受UDCA治疗的PBC患者血清MMP-1和IL-6水平变化可能有助于及时预判治疗应答,值得深入研究。

关键词： 细胞免疫治疗   实体瘤   肿瘤微环境  

摘要： 复发难治性实体肿瘤的治疗一直是肿瘤治疗领域的重大挑战。常规化疗、放疗、免疫治疗及靶向治疗效果不佳,单一或单纯免疫细胞治疗实体肿瘤存在很大局限性。主要原因为肿瘤负荷重,肿瘤细胞的异质性、血管的适应性调节、肿瘤免疫微环境等发生了相应的改变。不断变换的肿瘤治疗手段导致的治疗相关性免疫失衡,进而导致机体不能启动有效的肿瘤免疫应答反应等等。我们团队依据27年细胞免疫治疗的临床研究与实践,不断更新迭代细胞免疫治疗,从大剂量根治性化疗联合干细胞移植、化疗后细胞免疫功能的重建、化疗联合细胞免疫治疗、特异性肿瘤CTL细胞等直到建立了SHAPE-T细胞免疫疗法(无创深部电磁波热疗+自体免疫细胞治疗+/-低剂量免疫诱导化疗),不仅可以打破复杂的肿瘤微环境,还可以改善人体的免疫缺陷状态,因此对复发、难治性实体瘤取得了明显的临床治疗效果。但是新的问题及挑战也随之而来,包括如何维持T细胞的稳态活力,T细胞的新陈代谢、T细胞的脂代谢和糖代谢对肿瘤细胞杀伤能力的影响等等也将是我们面临的问题。该文系统性地评述细胞治疗对于实体肿瘤的现状及发展方向,期望对同行及生物企业的研发提供基于临床实践的新思路和新方向。

关键词： 柯萨奇病毒B组5型   病毒蛋白1   表位疫苗   生物信息学  

摘要： 目的对柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)的病毒蛋白1(viral protein 1,VP1)进行生物信息学分析,以期为后续免疫监测、表位疫苗设计和疾病研究提供科学依据。方法应用ProtParam、SignalP-6.0、DeepTMHMM-1.0、NetPhos-3.1、NetNGlyc1.0、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、BCPred和IEDB在线网站预测分析VP1的物理化学性质、结构特征和线性B细胞抗原表位。结果CV-B5 VP1是不稳定且呈碱性的亲水性蛋白,无信号肽结构,有1个跨膜结构域。预测该蛋白可能存在33个磷酸化位点和15个糖基化位点。VP1二级结构以无规则卷曲为主,存在多个潜在的优势B细胞抗原表位。结论利用生物信息学工具对CV-B5 VP1进行预测分析,初步判断了VP1的生物学功能及线性抗原表位。

关键词： 滋养细胞表面糖蛋白抗原2   嵌合抗原受体T细胞   T细胞耗竭   抗肿瘤活性  

摘要： 目的设计并构建靶向滋养细胞表面糖蛋白抗原2(trophoblast cell surface antigen2,Trop2)的嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)细胞,通过重复抗原刺激构建体外细胞耗竭模型,并探究其抗肿瘤活性及耗竭特性。方法基于靶向Trop2的戈沙妥珠单链抗体可变区片段(single-chain variable fragment,scFv)序列构建二代CAR质粒,进行逆转录病毒载体颗粒包装。采用Ficoll法分离健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经OKT-3/IL-2活化后转导CAR病毒载体颗粒制备Trop2 CAR-T细胞,流式细胞术检测MYC标签评估CAR表达率。原代T细胞(primary T cell,P-T)组仅接受相同条件的培养基处理。体外建立人卵巢癌细胞(SKOV3)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)及人肺癌细胞(A549)3种典型的实体肿瘤细胞模型,流式细胞术验证Trop2抗原表达,将CAR-T组、P-T组分别与肿瘤细胞共培养,通过荧光素酶法检测不同效应细胞与靶细胞数量比例时的杀伤效率。构建体外耗竭CAR-T模型,利用Incucyte活细胞成像系统动态监测CAR-T长期杀伤能力。流式细胞术检测CAR-T细胞的PD-1和TIM3表达水平,CBA法分析细胞因子分泌水平,结合转录组测序和RT-qPCR验证耗竭相关差异基因。结果成功构建了靶向Trop2的二代CAR-T细胞,标签蛋白MYC显示的CAR阳性率为55.42%,体外实验显示,与P-T组相比,其对Trop2高表达肿瘤细胞(MDA-MB-453、SKOV3)具有抗原特异性及剂量依赖性杀伤效应(P<0.001)。通过体外重复肿瘤刺激建立的CAR-T细胞耗竭模型分析表明,耗竭状态的Trop2 CAR-T细胞对肿瘤的杀伤能力降低,而P-T细胞几乎无杀伤作用。与原始状态相比,耗竭状态CAR-T细胞表面抑制性受体PD-1和TIM-3表达上调(P<0.001),细胞因子分泌功能减弱,转录组分析揭示耗竭细胞出现多个差异表达基因,涉及免疫应答、T细胞受体信号通路等过程呈现下调趋势,而凋亡相关通路呈现激活状态,RT-qPCR分析进一步表明IL3、IL5、IL13等免疫调节基因亦异常表达(P<0.05)。结论靶向Trop2的二代CAR-T细胞在体外重复抗原刺激诱导的耗竭进程中,表现出抗肿瘤活性下降以及效应功能减弱、耗竭相关分子表达上调等典型耗竭特性。

关键词： 长链非编码RNA   多发性骨髓瘤   IL-6   IL-6R   细胞生长   细胞黏附  

摘要： 目的探究长链非编码RNA结直肠差异化表达(CRNDE)对多发性骨髓瘤(MM)细胞生长、黏附的影响及作用机制。方法MM细胞株KMS11细胞系使用质粒转染构建CRNDE正常表达的对照组和CRNDE敲除组。观察敲除CRNDE后甲基噻唑基二苯基溴化四唑(MTT)实验细胞增殖及黏附变化,散点图分析CRNDE下游转录因子。进行白介素-6(IL-6)刺激,一半培养物使用基本培养基,另一半使用含有2 ng/ml的IL-6的培养基进行培养,流式细胞术检测平均荧光强度(MFI)降低倍数,观察细胞的增殖能力变化。另选取免疫缺陷型小鼠进行体内致瘤实验,比较对照组、CRNDE敲除组小鼠肿瘤直径。结果培养8 d,CRNDE敲除组MTT细胞增殖OD值(0.32±0.12)低于对照组(0.65±0.16);CRNDE敲除组细胞黏附实验OD值(0.08±0.01)低于对照组(0.19±0.02),差异均有统计学意义(P<0.001)。IL-6刺激实验显示,无IL-6培养基对照组和CRNDE敲除组的MFI降低倍数比较,差异无统计学意义(P>0.05);在有IL-6培养基中培养6和8 d,RNDE敲除组与对照组MFI降低倍数分别为(65.29±11.58)vs.(101.25±12.37)、(124.57±13.49)vs.(213.45±19.42),差异均有统计学意义(P<0.001)。小鼠实验显示,CRNDE敲除组肿瘤直径(1.84±0.13)mm,低于对照组(9.53±0.10)mm,差异均有统计学意义(t=148.26,P=0.000)。结论Lnc RNA CRNDE表达与MM细胞增殖、黏附具有密切联系,敲除CRNDE可抑制MM细胞增殖、黏附,降低致瘤作用。其作用机制可能与IL-6信号通路有关。

关键词： 血栓形成   中性粒细胞与淋巴细胞比值  

摘要： 本研究分析中性粒细胞与淋巴细胞(NLR)是否对血栓形成具有预测价值,现将结果报道如下。一、资料与方法1.一般资料与方法:分析2021年2月至2024年5月收治的160例原发性骨髓纤维化患者的临床资料。统计患者的性别、年龄、PLT、WBC、Hb、NLR、合并脾肿大、LDH升高、JAK2 V617F突变、既往血栓形成史。随访记录患者血栓形成情况和无进展生存期(PFS)。

关键词： 青少年发病的成人糖尿病   B淋巴细胞激酶   杂合突变  

摘要： 青年人中的成年发病型糖尿病(maturityoneset diabetes of the young,MODY)是常染色体显性遗传的单基因糖尿病,是临床、遗传和病理生理异质性的内分泌疾病。它占所有糖尿病病例的1%~5%,占30岁以下诊断的所有病例的3.5%[1]。根据欧洲队列数据,全球MODY患病率估计为每10000人中有1~5例[2]。