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关键词： 鲍曼不动杆菌   溶血素共调节蛋白   免疫组库   单细胞测序   单克隆抗体  

摘要： 目的基于单个记忆B细胞测序技术制备针对鲍曼不动杆菌的人源化单克隆抗体,构建出Hcp蛋白的免疫组库,表达具有结合活性的单克隆抗体。方法构建带有pGEX-6p-1-Hcp重组质粒的BL21-Hcp菌液,采用蛋白质表达和蛋白质亲和层析技术获得目的蛋白Hcp;6~8周龄雌性SPF级的BALB/c小鼠(体质量18~20 g),Hcp抗原肌肉注射免疫小鼠产生特异性记忆B细胞;采用流式细胞术分选单个特异性记忆B细胞;采用单细胞测序技术构建Hcp的免疫组库,并对测序结果进行生物信息学分析;采用抗体人源化改造技术获得单克隆抗体;采用ELISA实验检测抗体体外结合活性。结果表达并纯化出纯度大于95%的目的蛋白Hcp;成功构建了Hcp的免疫组库,分析得到了该免疫组库的BCR克隆型鉴定和分析结果、CDR3区域特征分析结果、V-J基因配对特征分析结果;人源化改造了7种单克隆抗体(IgG1-1、IgG1-2、IgG2-1、IgG2-2、IgG3-1、IgG4-1、IgG4-2);ELISA结果显示,IgG1-1、IgG3-1、IgG4-1、IgG4-2抗体结合效价均为1∶1280,IgG2-2的抗体效价为1∶10240,IgG2-1的抗体效价为1∶5120,IgG1-2的抗体效价为1∶160。结论利用单细胞测序技术可以快速、准确、高效率地构建含有大量抗体信息的Hcp蛋白免疫组库,利用免疫组库可以表达具有结合活性的单克隆抗体。

关键词： 前列腺炎   炎症因子   孟德尔随机化  

摘要： 目的采用单核苷酸多态性(SNP)为工具变量,基于双样本孟德尔随机化方法探究炎症细胞因子和前列腺炎的因果关系。方法以41种炎症细胞因子作为暴露因素,以前列腺炎作为结局变量,采用双样本孟德尔随机化(MR)分析炎症细胞因子和前列腺炎的因果关系。样本的数据集均来自全基因组相关联研究(GWAS)汇总数据集。炎症细胞因子的数据来自8293例芬兰人的全基因组联合研究,提供了与41种细胞因子和生长因子相关的基因组变异关联;前列腺炎数据集来自2021年MRC Integrative Epidemiology Unit(IEU)的欧洲人GWAS数据,其中包括72799例健康男性(设为对照组)及1859例前列腺炎患者(设为前列腺炎组)。获取的SNPs位点为16377460。采用逆方差加权法(IVW)进行双样本孟德尔随机化分析。采用异质性检验、多效性检验、Leave-one-out检验进行敏感性分析,采用OR值及95%CI对炎症因子和前列腺炎的因果关系进行解释。结果IVW分析结果得出TRAIL与前列腺炎之间存在着负相关关系(OR=1.166,95%CI:1.038~1.310,P=0.009),而白细胞介素-18(IL-18)、血管内皮生长因子(VEGF)和前列腺炎之间存在着正相关关系(OR=0.868、0.883,95%CI:0.767~0.982、0.791~0.985,P=0.024、0.026)。结论炎症细胞因子与前列腺炎之间存在着因果关系。这些显著的细胞因子可以为前列腺炎的诊断、治疗提供重要的参考价值。

关键词： 邻苯二甲酸二丁酯   单克隆抗体   免疫学检测  

摘要： 以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为研究目标,通过重氮化法合成了人工抗原DBAP-KLH、DBAP-BSA,经紫外光谱扫描分析鉴定,证实人工抗原合成成功。动物免疫后,经细胞融合和筛选得到杂交瘤细胞,制备出抗DBP单克隆抗体。研究结果表明,单克隆抗体DBP-2C7具有较高的亲和力和灵敏度,其效价为1∶1024000,对DBP的半数抑制浓度为24.3μg/L。特异性分析显示,该抗体与半抗原的交叉反应率为28.6%,与其他邻苯二甲酸酯类化合物的交叉反应率小于1%。本研究制备了DBP人工抗原和单克隆抗体,为邻苯二甲酸二丁酯免疫测定方法的建立和应用提供了重要的实验依据和基础原料。

关键词： 衍生的中性粒细胞-淋巴细胞比率   血小板-淋巴细胞比率   胃癌   免疫治疗   非手术   预后  

摘要： 目的分析衍生的中性粒细胞-淋巴细胞比率(derived neutrophil to lymphocyte ratio,dNLR)和免疫预后指数对胃癌非手术患者预后的预测价值。方法回顾性分析2021年1月20日至2022年3月16日在我院肿瘤防治中心接受抗PD-1治疗的152例转移性或不可切除胃癌患者的数据,并随访至2024年3月1日。主要结局为总生存期(overall survival,OS),定义为首次使用抗PD-1药物治疗到死亡或最后一次随访的日期。收集临床数据和实验室指标,根据中位值确定dNLR、血小板-淋巴细胞比率(platelet to lymphocyte ratio,PLR)和预后营养指数(prognostic nutritional index,PNI)的临界值。通过Cox比例风险模型分析标志物的预后价值。结果Cox比例风险模型分析显示,高肿瘤分期、高T分期、dNLR>3.50、PLR>205.2、CA19-9>33.0 ng/mL可作为OS的独立影响因素(P<0.05)。dNLR>3.50患者的总体生存概率显著低于dNLR≤3.50患者(Log-rank=28.485,P<0.001),PLR>205.2患者的总体生存概率显著低于PLR≤205.2患者(Log-rank=23.569,P<0.001)。dNLR>3.50患者的PLR水平显著高于dNLR≤3.50患者(P<0.05),PNI水平显著低于dNLR≤3.50患者(P<0.05)。PLR>205.2患者的高肿瘤分期、T 4分期、N 3分期、dNLR水平显著高于PLR≤205.2患者(P<0.05),PNI水平显著低于PLR≤205.2患者(P<0.05)。结论高dNLR、PLR水平是接受免疫治疗的转移性和不可切除胃癌患者OS的独立预测因子。

关键词： 视神经脊髓炎谱系疾病   免疫治疗   单克隆抗体   生物靶向治疗   自身免疫性脱髓鞘疾病  

摘要： 靶向免疫治疗目前已经成为一种十分具有前景的治疗手段。一些针对特定靶点的单克隆抗体或抗体片段已经在视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者中完成了相关临床试验,并且部分已经获得美国食品药品监督管理局的批准上市。这些生物靶向药物能够迅速、显著且持续地改善NMOSD患者的临床症状,减少激素的使用量,展现出良好的耐受性和安全性,正在逐步成为治疗NMOSD的有力工具,并有望为NMOSD的治疗带来革命性的变化。该文就目前已应用的B细胞、白细胞介素6受体和补体3种不同靶点NMOSD免疫靶向治疗药物进行阐述,并对新的靶向治疗药物进行汇总,期望为NMOSD未来的精准化治疗带来新希望。

关键词： 特发性膜性肾病   红细胞   补体受体1  

摘要： 目的:探讨特发性膜性肾病(IMN)患者红细胞补体受体1(CR1)表达调节及其与临床病理之间关系。方法:选取2023年1月~2024年1月在广西壮族自治区南溪山医院肾内科住院确诊为IMN的患者44例作为研究组,另随机选取门诊无偿献血屋健康献血者41例作为对照组进行前瞻性研究,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法分别测定两组红细胞膜唾液含量,同时收集病例组相关临床病理资料。结果:研究组患者的血红蛋白含量淋巴细胞计数、红细胞膜CR1含量明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组内比较,红细胞膜CR1含量与24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)呈负相关(r<0,P<0.05),与血红细胞计数、血白细胞计数、血红蛋白含量、血淋巴细胞计数、血中性粒细胞、血清IgG、血清白蛋白、肾脏免疫病理C3沉积等呈正相关(r>0,P<0.05);与肾脏病理分期、免疫病理IgG、IgG3、IgG4、IgM沉积阳性强度无相关性(P>0.05)。结论:IMN患者红细胞膜唾液酸表达下调,与临床关系较为紧密,对于临床具有重要价值。

关键词： 急性淋巴细胞白血病   儿童   复发   危险因素   最小残留病  

摘要： 目的分析儿童B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)复发的危险因素。方法收集了2021年1月至2023年3月期间在医院就诊的81名患有B-ALL的患者纳入研究,为复发组(21人)和未复发组(60人)。比较两组的基本临床特点和白血病病例特点。使用Logistic回归分析B-ALL复发的相关因素。结果在21例复发B-ALL病例中,18例(85.71%)为单纯骨髓复发,2例(9.52%)为中枢神经系统复发,1例(4.76%)为睾丸复发。两组的年龄,化疗引起的白细胞减少时间(天)、新诊断时外周血白细胞计数、33天的最小残留病(MRD)和12周的MRD具有显著差异。因素Logistic回归分析结果发现年龄≥10岁(调整后OR=2.54,95%CI 1.14~5.23,P=0.002)、12周的MRD>10^(-4)(调整后OR=2.34,95%CI 1.53~5.21,P=0.001)为B-ALL患者复发的独立危险因素。结论儿童年龄≥10岁和12周的MRD>10^(-4)为B-ALL患者复发的独立危险因素。

关键词： 补脾强力复方   实验性重症肌无力   Notch通路   Th17/Treg  

摘要： 为探讨补脾强力复方对实验性重症肌无力大鼠胸腺淋巴细胞Th17/Treg分化的影响,用CCK-8法筛选10%的浓度作为后续实验血清浓度。再将细胞分为8组,分别为正常组(Control)、正常+空白血清组(Control+BS)、实验性重症肌无力模型组(Model)、实验性重症肌无力模型+空白血清组(Model+BS)、实验性重症肌无力模型+低剂量补脾强力复方含药血清组(Model+LBPQL)、实验性重症肌无力模型+中剂量补脾强力复方含药血清组(Model+MBPQL)、实验性重症肌无力模型+高剂量补脾强力复方含药血清组(Model+HBPQL)、实验性重症肌无力模型+强的松含药血清组(Model+Prednisone)。血清处理细胞24 h后流式细胞术检测各组细胞中Th17及Treg的比例;ELISA试剂盒检测各组细胞上清液中IL-17及TGF-β含量;Western blotting检测各组细胞中Notch1、Hes1、Hes5、Hey1蛋白含量。结果显示,和实验性重症肌无力模型组比较,实验性重症肌无力模型+高剂量补脾强力复方含药血清组及实验性重症肌无力模型+强的松含药血清组Th17占比显著下降(P<0.05),Treg占比显著上升(P<0.05),细胞上清液中IL-17表达显著下降(P<0.05),TGF-β表达显著上升(P<0.05),细胞中Notch1、Hes1、Hes5、Hey1蛋白表达显著下降(P<0.05)。该研究提示补脾强力复方可调控实验性重症肌无力大鼠胸腺淋巴细胞Th17/Treg的免疫失衡状态,其机制可能与其调节Notch通路相关。

关键词： 多发性骨髓瘤   肾损伤   预后   中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白   T细胞免疫球蛋白粘蛋白受体1   血管细胞黏附分子1   激活素A   免疫球蛋白轻链  

摘要： 背景多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性浆细胞病,近半数患者在就诊时存在MM相关肾损害(KI),与患者死亡率增加有关。早期识别和治疗KI,有可能逆转肾功能,改善患者生存状况。中性粒细胞明胶酶相关运载蛋白(NGAL)、T细胞免疫球蛋白粘蛋白受体1(TIM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和激活素A与细胞增殖、侵袭和KI等病理过程相关。上述指标有希望成为MM相关KI早期诊断的指标。目的探讨新型生物标志物NGAL、TIM-1、VCAM-1和激活素A在新诊断MM(NDMM)合并KI的病情演变、分期和预后中的意义。方法选取2017年1月—2022年2月首都医科大学附属北京朝阳医院石景山院区血液科住院的70例NDMM患者,包括62例症状性MM和8例冒烟型MM(SMM);同时纳入12例意义未明单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)患者、7例肾脏意义的单克隆免疫球蛋白血症(MGRS)患者及20例健康对照(HC)。收集纳入者的临床资料及MGUS、MGRS、NDMM患者骨髓穿刺活检、M蛋白检查、影像学检查结果;应用酶联免疫吸附法检测尿NGAL(uNGAL)、尿TIM-1(uTIM-1)、血清TIM-1(sTIM-1)、尿VCAM-1(uVCAM-1)、尿激活素A水平。根据疾病状态将研究对象分为MGUS组、MGRS组、NDMM组和HC组,根据KI情况将患者分为MGUS组、MGRS组、KI组和非肾损伤(NKI)组,KI组依据动态疾病治疗状态分为治疗前MM亚组、治疗后达到部分治疗反应(PR)以上(>PR)亚组、复发MM亚组。各指标的相关性采用Spearman秩相关分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线以分析各指标对NDMM合并KI的诊断价值,计算最佳截断值;依据各指标的最佳截断值分为高于最佳截断值组及低于最佳截断值组,采用Kaplan-Meier方法分析各指标在高于最佳截断值组和低于最佳截断值组的总生存期(OS);并采用COX比例风险回归分析NDMM合并KI患者全因死亡的影响因素。结果NDMM组的uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、sTIM-1和尿激活素A水平高于MGUS组和HC组(P<0.05),MGRS组的uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、sTIM-1和尿激活素A水平高于MGUS组(P<0.05),KI组的uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、sTIM-1和尿激活素A水平高于NKI组(P<0.05),治疗前MM亚组、复发MM亚组的uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、sTIM-1和尿激活素A水平高于>PR亚组(P<0.05)。uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、sTIM-1及尿激活素A与肌酐、β2-微球蛋白、R-ISS分期呈正相关(P<0.05),与估算肾小球滤过率呈负相关(P<0.05)。uNGAL、uTIM-1、sTIM-1、尿激活素A与24 h尿轻链水平呈正相关(P<0.05),uNGAL、uTIM-1与克隆性浆细胞比例呈正相关(P<0.05)。根据ROC曲线得出诊断MM相关KI的uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、尿激活素A最佳截断值分别为14.774 ng/mL、1.978 ng/mL、144.400 ng/mL、33.730 pg/mL。Kaplan-Meier结果显示,高于uNGAL、uTIM-1、sTIM-1、uVCAM-1、尿激活素A各自最佳截断值的患者OS更差(P<0.05);多因素COX比例风险回归分析结果显示,uNGAL、R-ISS分期是NDMM合并KI患者全因死亡的影响因素(P<0.05)。结论uNGAL、uTIM-1、uVCAM-1、尿激活素A可能与MM病情进展和KI有关,是肾小管损伤的早期标志物,有利于MM合并KI患者的早期诊治,且与R-ISS分期、24 h尿轻链、克隆性浆细胞比例等肿瘤负荷指标和MM患者总体生存相关。

关键词： IL-33   CD8(+) T lymphocytes   mitophagy   listeriosis   perinatal infection  

摘要： Listeriosis is a foodborne disease caused by Listeria monocytogenes (Lm) that usually leads to serious adverse outcomes in pregnant women. Interleukin (IL)-33/serum stimulation (ST)2 axis has an important impact on infectious diseases, but its role in listeriosis is rarely studied. Here, the immunomodulatory effects of IL-33/ST2 axis during perinatal Lm infection were investigated. In our study, the perinatal Lm infection model was constructed by injecting Lm into the tail vein of C57BL/6J mice. IL-33/ST2 axis was blocked by intraperitoneal injection of anti-IL-33R alpha/ST2 antibody. In vitro, mouse cytotoxic T lymphocyte cell line (CTLL)-2 cells were activated by using CD3/CD28 antibodies. Perinatal Lm infection caused massive necrosis of liver tissue. Blocking IL-33/ST2 axis in pregnant mice inhibited the infiltration of CD8(+) T lymphocytes into the site of infection and further aggravated liver damage. We also found that IL-33 promotes mitochondrial autophagy in activated CTLL-2 cells in vitro. Mitochondrial autophagy was beneficial to the clearance of damaged mitochondria and reduced the production of reactive oxygen species. IL-33/ST2 axis affects the immune function of CD8(+) T lymphocytes by regulating mitophagy, which plays a very important role in the occurrence and development of perinatal Lm infection. Immunomodulation targeting IL-33/ST2 axis may be an effective way to adjuvant treatment of perinatal Lm infection.