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关键词： 麻黄-桂枝   阿尔茨海默病   核因子-κB   核苷酸结合寡聚化结构域样受体3   半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1   白细胞介素-1β  

摘要： 目的研究麻黄-桂枝对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织损伤、炎症反应及神经细胞凋亡的影响,探究其是否通过核因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路发挥调控作用。方法①动物实验:将50只雄性SD大鼠随机分为对照组、β-淀粉样蛋白(Aβ)组、麻黄-桂枝低剂量组、麻黄-桂枝中剂量组、麻黄-桂枝高剂量组,每组10只。除对照组外,其余组大鼠采用海马CA1区注射Aβ1-42溶液方法构建AD模型。麻黄-桂枝低、中、高剂量组分别给予3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg麻黄-桂枝水提物灌胃,对照组和Aβ组给予等体积生理盐水灌胃,均1次d,共4周。Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马组织病理形态,TUNEL染色分析海马区域神经细胞凋亡情况,免疫组化检测海马组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白阳性表达情况。②细胞实验:取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),实验设对照组、Aβ组、麻黄-桂枝低剂量组、麻黄-桂枝中剂量组、麻黄-桂枝高剂量组、MCC950组。对照组加10%空白血清,其余组均加200μmol/L的Aβ溶液,在此基础上麻黄-桂枝低剂量组加5%麻黄-桂枝含药血清+5%空白血清,麻黄-桂枝中剂量组加8%麻黄-桂枝含药血清+2%空白血清,麻黄-桂枝高剂量组加10%麻黄-桂枝含药血清,MCC950组加100 nmol/L的MCC950,共同孵育24 h。TUNEL染色分析细胞凋亡情况,ELISA法测定细胞中IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测细胞中NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达情况。结果①与对照组比较,Aβ组大鼠Morris水迷宫实验第5天的潜伏时间明显延长(P<0.05),在平台所在象限的停留时间明显缩短(P<0.05),运动距离、穿越次数均明显减少(P均<0.05),海马组织出现病理损伤,神经细胞凋亡明显,海马组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白阳性表达平均光密度值均明显升高(P均<0.05)。与Aβ组比较,麻黄-桂枝各剂量组大鼠实验第5天的潜伏时间均明显缩短(P均<0.05),在平台所在象限的停留时间均明显延长(P均<0.05),运动距离、穿越次数均明显增加(P均<0.05),海马组织病理损伤减轻;麻黄-桂枝中剂量组和麻黄-桂枝高剂量组海马组织中神经细胞凋亡减少,海马组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白阳性表达平均光密度值均明显降低(P均<0.05)。②Aβ组染色阳性细胞百分率和细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05);麻黄-桂枝中剂量组、麻黄-桂枝高剂量组和MCC950组染色阳性细胞百分率均明显低于Aβ组(P均<0.05),麻黄-桂枝各剂量组和MCC950组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达量均明显低于Aβ组(P均<0.05)。结论麻黄-桂枝对AD大鼠神经元损伤具有保护作用,机制与抑制NF-κB/NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路,从而降低炎症因子水平,减少细胞凋亡有关。

关键词： 肠道菌群   肠神经系统   肠神经免疫网络   便秘   儿童  

摘要： 目的探讨便秘患儿肠道菌群改变调控先天免疫淋巴细胞3(ILC3)、白细胞介素(IL)-22及胶质源性神经营养因子(GDNF)表达影响肠神经发育机制。方法选取2020年12月至2022年12月选取河北医科大学第二医院小儿外科收治便秘患儿20例,男12例,女8例,年龄(3.8±2.4)岁,分为先天性巨结肠(HD)组和慢传输性便秘(STC)组,各10例;另选取外伤结肠造瘘术后关瘘患儿10例作为对照组,男7例,女3例,年龄(3.9±2.8)岁。于术前分别收集患儿血液、粪便标本,通过16SrRNA测序分析不同组肠道菌群丰度及差异,采用Kruskal-Wallis秩和检验筛选组间差异最大菌属;多重免疫微球法测定机体炎性因子水平,采用Spearman相关分析筛选便秘相关性最高炎性因子;多重免疫荧光染色法检测各组结肠标本ILC3、IL-22及GDNF表达,线性回归分析其与炎性因子关系。观察比较不同类型便秘患儿肠道菌群如何调控机体炎症微环境,继而通过ILC3/IL-22/GDNF通路影响肠神经发育。两组比较采用Mann-Whitney U检验或Wilcoxon秩和检验,多组比较采用Kruskal-Wallis H检验。结果肠球菌属丰度从低到高依次为对照组、STC组、HD组(P<0.05),普拉梭菌属丰度从高到低依次为对照组、STC组、HD组(P<0.05)。炎性因子IL-6、IL-1β、IL-8、IL-12p70与便秘相关度最高(H=21.099,H=19.954,H=13.443,H=19.912,P<0.01)。在属水平上肠球菌属与IL-1β、IL-6、IL-8炎性因子呈正相关,普拉梭菌属与IL-1β、IL-6、IL-8炎性因子呈负相关,IL-12p70则可能与其他菌属相关。不同类型便秘肠壁ILC3、IL-22、GDNF表达不同,各组ILC3、IL-22、GDNF吸光度值差异均有统计学意义(H=25.836,H=24.362,H=25.055,P<0.01)。肠壁ILC3、IL-22和GDNF表达从高到低依次均为对照组、STC组、HD组,各组间三者表达比较差异均有统计学意义(P<0.01)。单因素回归分析IL-6、IL-1β、IL-8、IL-12p70均与肠壁ILC3、IL-22、GDNF水平呈负相关(P<0.01);多因素回归分析肠壁ILC3(F=26.411,P<0.01)、IL-22(F=14.821,P<0.01)、GDNF(F=26.328,P<0.01)表达与IL-6、IL-1β水平呈负相关,与IL-8、IL-12p70水平无关(F=26.411,F=14.821,P>0.05)。结论肠道内容物堆积导致菌群谱改变,通过调控肠壁ILC3/L-22/GDNF通路影响肠神经系统功能,致使便秘发生或加重。

关键词： 单克隆抗体   毕赤酵母   分子伴侣  

摘要： 目的利用毕赤酵母底盘宿主表达单克隆抗体,并探索多种表达优化策略以提高抗体产量。方法以毕赤酵母为底盘细胞,用甲醇诱导型系统PAOX1和乙醇诱导型系统E1分别尝试多种单克隆抗体蛋白的重组表达,并通过分子伴侣过表达和培养基组分优化进一步提升产量后,经3 L反应器高密度发酵培养验证重组菌株生产能力。结果乙醇诱导表达的依普奈珠单克隆抗体产量可达12.4 mg/L。分子伴侣Ppi1和Biph的过表达分别使依普奈珠单克隆抗体产量提升约22.5%和23.0%;添加1.0 g/L硫酸铵、0.05 mol/L磷酸钾缓冲对和80 mmol/L苏氨酸也分别使依普奈珠单克隆抗体产量提升约57.1%、25.8%和58.1%。在3 L生物反应器水平,Biph过表达菌株的完整抗体产量相较于摇瓶水平提升约5.9倍,最高产量达74.1 mg/L。结论依普奈珠单克隆抗体在毕赤酵母底盘宿主中可成功表达,并且通过多种表达调控策略能够有效提升抗体产量,为毕赤酵母表达单克隆抗体提供了新的思路和方向。

关键词： 猫泛白细胞减少症病毒   VP2蛋白   单克隆抗体   双抗体夹心ELISA  

摘要： 为了建立一种能够检测猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的双抗体夹心酶联检测(ELISA)方法,本研究首先构建了FPV VP2蛋白的原核表达载体并进行了VP2蛋白的原核表达。经SDS-PAGE实验验证及反应原性检测后,以VP2重组蛋白作为免疫原,通过间接ELISA方法筛选出2株能特异性识别VP2蛋白的高亲和力单克隆抗体,分别命名为2F10和3D2。通过对捕获抗体包被浓度、酶标检测抗体使用浓度等最适反应条件进行摸索,建立了FPV的双抗体夹心ELISA检测方法,并对方法的敏感性、特异性及与PCR方法的符合率进行验证。结果显示该方法的最低检测限为10^(3.2) TCID_(50)/mL,高于市售商品化试纸条,且与猫杯状病毒(Feline calici virus,FCV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus type 1,FHV-Ι)均无交叉反应,特异性较好,与FPV标准检测方法PCR的符合率为98.9%,且操作简便、检测快速,为FPV的检测提供了一种有效的工具,为进一步开发FPV检测试剂盒奠定了基础。

关键词： B cell   Myositis   JAK   Plasma cell   Tofacitinib  

摘要： BackgroundIdiopathic inflammatory myopathies (IIM) are autoimmune disorders characterized by muscle inflammation and autoreactive B cell responses. The Janus kinase (JAK)-signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway is essential for B cell functions, making it a promising therapeutic target. This study explores the potential of tofacitinib, a JAK1/JAK3 inhibitor, to modulate B cell activity in *** B cell populations from dermatomyositis (DM), anti-synthetase syndrome (ASyS) and overlap myositis (OM) patients were analyzed by flow cytometry. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) or sorted memory B cells were cultured with tofacitinib and stimulated with combinations of CD40, IL-21, IL-2, BAFF and CpG. B cell proliferation, differentiation and (auto)antibody, cytokine/chemokine production were assessed by flow cytometry, Luminex, and ELISA/ELiA *** IIM peripheral B cell compartment had elevated transitional and naive B cells, with reduced Bmem frequencies compared to healthy donors. Tofacitinib significantly inhibited CD40/IL-21-induced B cell proliferation, plasmablast formation and function in PBMC and B cell-only cultures across all IIM subgroups, predominantly affecting the IL-21-induced differentiation and antibody production. Remarkably, tofacitinib reduced the levels of anti-Jo1 autoantibodies, as well as of CXCL10 and CXCL13 in ASyS memory B cell *** findings highlight the B cell involvement in IIM, evidenced by altered peripheral B cell composition in active disease and the effective inhibition of essential B cell responses, including proliferation, differentiation, and (auto)antibody production, by tofacitinib in vitro. This positions the JAK/STAT pathway as a promising new therapeutic target to modulate B cell activity in IIM.

关键词： 胃癌   加速外科康复护理   术后恢复   细胞因子  

摘要： 目的 分析加速外科康复护理对老年胃癌根治术患者术后恢复的影响及可能机制。方法 将80例胃癌根治术患者分为对照组和实验组各40例。术后对照组行常规护理,实验组行加速外科康复护理。护理后观察两组术后拔管时间、下床活动时间及并发症发生率,并检测血清中细胞因子白细胞介素(IL)-1、 IL-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果 与对照组比较,实验组术后拔管时间显著缩短,下床活动时间显著增长(均P<0.05);实验组并发症发生率低于对照组,但无显著差异(P>0.05);与对照组比较,实验组术后血清IL-1、IL-2和TNF-α水平均显著降低(均P<0.05);相关分析显示,实验组术后下床活动时间与血清IL-1、IL-2水平均有负相关性(P<0.05),而与TNF-α无相关性(P<0.05)。实验组血清IL-1与IL-2和TNF-α水平有正相关性(P<0.05),而IL-2与TNF-α无相关性(P>0.05)。结论 加速外科康复护理能够提升老年胃癌根治术患者术后康复和满意度,其机制与降低应激相应细胞因子水平有关。

关键词： 补体   非典型溶血尿毒综合征   治疗  

摘要： 非典型溶血尿毒综合征(aHUS)是一组临床表现为微血管病性溶血性贫血(MAHA)、血小板减少和急性肾损伤(AKI)的临床综合征,属于血栓性微血管病(TMA),病情常危重,未经有效治疗常致死亡或肾衰竭。根据2016—2022年我国病案首页数据,aHUS(含病因不明的溶血尿毒症综合征)患者约为7.05/百万住院人数,存在儿童及育龄期女性两个年龄高峰。近年来,补体抑制剂的使用大幅改善了aHUS患者预后。随2022年11月首个补体抑制剂在中国内地正式上市,并纳入医保支付,补体抑制剂治疗也将惠及越来越多的中国aHUS患者。本文将回顾补体抑制剂治疗aHUS的临床进展,并对临床面临的挑战及未来可能的研究方向予以展望。

关键词： 单增李斯特菌   超氧化物歧化酶(SOD)   氧化应激   多克隆抗体  

摘要： 【目的】通过构建sod基因缺失株,阐明超氧化物歧化酶编码基因sod对单增李斯特菌10403S抗氧化应激能力的影响。【方法】本研究采用同源重组方法构建sod基因缺失株。通过生长试验分析亲本株10403S、缺失株10403SΔsod、回补株10403S CΔsod的生长能力。通过氧化应激试验测定sod基因对单增李斯特菌氧化应激能力的影响。通过Western blotting测定氧化应激条件对SOD蛋白表达水平的影响。【结果】PCR结果显示,10403SΔsod和10403S CΔsod目的片段大小分别为1 468和1 875 bp,符合预期,成功构建sod基因缺失株10403SΔsod和回补株10403S CΔsod。生长试验结果显示,sod基因缺失不影响10403S的生长能力。抗氧化应激试验结果显示,在20 mmol/L H_(2)O_(2)条件下,sod基因缺失极显著降低了10403S的抗氧化应激能力(P<0.01)。Western blotting结果显示,在氧化应激条件下单增李斯特菌SOD蛋白的表达水平极显著上调(P<0.01)。【结论】sod基因缺失不影响单增李斯特菌10403S正常生长,但会导致氧化应激能力下降,且在20 mmol/L H_(2)O_(2)条件下10403S中SOD蛋白表达水平极显著升高。

关键词： 恶性腹水   洛铂   金水葶苓汤   T淋巴细胞亚群   疗效  

摘要： 目的观察健脾补肾法联合洛铂治疗恶性腹水的疗效及对T淋巴细胞亚群的影响。方法将84例肿瘤伴恶性腹水患者按随机数字表法分为两组。对照组给予腹腔穿刺引流并洛铂灌注治疗,观察组在对照组基础上使用金水葶苓汤。对比两组临床疗效、T淋巴细胞亚群、腹围、尿量、中医证候积分、卡氏功能(KPS)评分、血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)]及不良反应。结果观察组总有效率为88.10%,高于对照组的69.05%(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后两组患者CD3+、CD4+水平均升高,CD8+水平降低,且观察组更明显(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后两组患者腹围降低,尿量增多,且观察组改善更明显(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后两组患者中医证候积分降低,KPS评分升高,且观察组改善更明显(均P<0.05)。两组患者治疗前后血清CEA、CA125差异无统计学意义(P>0.05)。对照组恶心呕吐、腹痛腹泻、骨髓抑制、肝肾功能损害不良反应发生率高于观察组(P<0.05)。结论健脾补肾法的金水葶苓汤联合抽液治疗恶性腹水的疗效及安全性较好,能改善患者临床症状和T淋巴细胞亚群水平,减少恶性腹水生成,提高生活质量。