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关键词： 猪   Treg细胞   FoxP3   抗体制备   单克隆抗  

摘要： 调节性T细胞（Treg）是具有免疫调节活性的淋巴细胞，通过抑制各种效应性淋巴细胞来诱导自身免疫耐受。FoxP3是CD4+CD25+Treg细胞重要的转录因子，对其分化发育和功能维持有着重要的调控作用，因此联合FoxP3抗原可以更好地识别CD4+CD25+Treg细胞。为了制备出特异性的猪Treg细胞表面标记物FoxP3的单克隆抗体，本研究选择抗原性较强的基因编码片段，构建了FoxP3抗原表位区段（1～840 bp）的原核表达质粒，诱导表达并纯化后，用目的蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，通过间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光的方法筛选能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞。结果：筛选到了5株效价较高的FoxP3单克隆抗体产生细胞（F4B9、F4A9、F1E12、F1A11和F4A10）,均具有良好的特异性，能识别内源性和外源性FoxP3蛋白，且能稳定地分泌抗体，为定性或定量检测猪Treg细胞以及验证Treg细胞的功能奠定了基础。

关键词： 热疗   抗肿瘤   肿瘤微环境   联合治疗   细胞因子   免疫治疗  

摘要： 近年来，随着肿瘤发病率和死亡率的显著上升，寻找新的治疗模式以提高疗效成为肿瘤学领域的重要研究方向。热疗是继手术、化疗、放疗和免疫治疗之外的一种肿瘤治疗手段，逐渐受到关注。热疗通过提高肿瘤组织温度，诱导肿瘤细胞坏死，释放肿瘤抗原，改变肿瘤免疫微环境，清除免疫抑制性细胞，从而增强机体的抗肿瘤免疫反应。此外，热疗还可上调肿瘤细胞表面的黏附分子和热休克蛋白的表达，激活细胞毒性T淋巴细胞和其他免疫效应细胞，进一步促进免疫反应。热疗与免疫治疗的联合在多种肿瘤模型中显示出协同效应，显著提高抗肿瘤治疗效果。系统总结热疗对肿瘤免疫功能的作用机制及其与免疫治疗的联合策略，旨在为未来肿瘤治疗的研究和应用提供理论依据和新思路。

关键词： FoxP3   IL-10   实时荧光定量PCR   Treg活化   免疫负调控  

摘要： 旨在建立双重实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法，对叉头框蛋白P3（FoxP3）、白细胞介素10（IL-10）的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针，优化引物浓度、退火温度，建立RT-qPCR方法，检测猪圆环病毒2型（PCV2）感染外周血调节性T淋巴细胞（Treg）和免疫器官中FoxP3和IL-10的mRNA含量；根据Western blot检测蛋白表达验证方法的可靠性。结果：建立的RT-qPCR方法呈现“S”型扩增曲线，相关系数R2≥0.99;转化生长因子-β（TGF-β）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）等基因的核酸模板和阴性对照均无扩增曲线，最低检测浓度10 copies/μL,批内、批间变异系数分别为0.87%、1.84%;PCV2攻毒组外周血Treg细胞中FoxP3和IL-10的mRNA含量均出现明显升高，FoxP3的mRNA含量在攻毒第14天到达峰值，IL-10的mRNA含量在攻毒第10天到达峰值，PCV2感染后导致胸腺、淋巴结和脾脏中FoxP3和IL-10转录水平升高；Western blot检测表明，FoxP3蛋白表达量在攻毒第14天、第28天，IL-10在攻毒第10天和第14天显著高于对照组，与RT-qPCR结果一致。综上，本研究建立的猪FoxP3、IL-10双重RT-qPCR方法具有特异、敏感、检测稳定可靠的特点，对于评价猪体的免疫应答水平和机体免疫稳态具有重要意义。

关键词： ACAP4   Bufalin   Hepatocellular carcinoma   Janus kinase-1   Kupffer cells   Tumor-associated macrophages  

摘要： Tumor-associated macrophages (TAMs), which differentiate from tissue-resident macrophages, are recognized for their ability to influence cancer progression and metastasis. However, the specific role of Kupffer cells (KCs), the intrinsic macrophages of the liver, in the progression of hepatocellular carcinoma (HCC) remains unclear. In this study, we describe a novel mechanism by which exosomes derived from HCC cells induce KCs to transition into TAMs, thereby facilitating the metastasis of HCC in an IL6-JAK1-ACAP4 axis-dependent manner. Mechanistically, the exosome-mediated domestication of KCs by hepatoma cells constitutes one of the primary sources of IL6 production in the HCC microenvironment. IL6 then activates JAK1 to phosphorylate its downstream effector ACAP4 at Tyr843, a novel phosphorylation site identified in this context, which in turn promotes ARF6-GTPase activity and hepatoma cell migration. Furthermore, we found that the levels of IL6, as well as the phosphorylation of JAK1 and ACAP4 at Tyr843, were significantly greater in tumor tissues from HCC patients than in adjacent tissues. These findings suggest that the IL6-JAK1-ACAP4 axis may be a promising therapeutic target for HCC. Importantly, we screened bufalin, an active ingredient derived from Venenum Bufonis, and discovered that it inhibits JAK1 and disrupts the IL6-induced phosphorylation of ACAP4. This inhibition not only impairs hepatoma cell migration but also prevents the metastasis of HCC. These findings demonstrate the interplay between hepatoma cells and KCs through the IL6-JAK1-ACAP4 axis, thereby promoting HCC metastasis, and reveal the therapeutic potential of bufalin for the treatment of HCC through JAK1 inhibition.

关键词： 多房棘球蚴   Calpain A   序列分析   基因克隆   表达纯化   多克隆抗体  

摘要： 目的 分析并克隆多房棘球蚴Calpain A(Em-Calpain A)基因开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)序列，进行体外诱导表达并制备兔多克隆抗体。方法 从WormBase数据库下载多房棘球绦虫Em-Calpain A基因ORF序列。采用ProtParam、SMART等在线工具对其理化性质、蛋白结构域等进行分析和预测；利用MEGA 7.0软件的邻接法构建系统进化树。提取原头蚴总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增Calpain A基因，构建pET28a-Em-Calpain A原核表达载体，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白，纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，采用10%SDS-PAGE、Western blot和ELISA对重组蛋白纯度和抗体滴度及反应性进行鉴定。结果 序列分析表明Em-Calpain A基因ORF长度为2 469 bp,编码822个氨基酸，推测理论分子质量约92.13 ku,等电点为5.3。蛋白结构分析显示Em-Calpain A具有1个高度保守的钙蛋白酶样硫醇蛋白酶结构域(CysPc)、1个钙蛋白酶Ⅲ结构域(Calpain Ⅲ)和2个E、F的螺旋-环-螺旋结构(EF-hand),说明其属于钙蛋白酶家族。系统进化分析显示Em-Calpain A序列与带科绦虫聚于一类，与肝片吸虫、日本血吸虫、人、犬、牛及原虫亲缘关系较远。重组蛋白主要以包涵体形式表达，蛋白分子质量约为93 ku,与预测分子质量大小基本一致。ELISA检测结果显示制备的多克隆抗体效价达1∶262 144;该抗体可特异性识别His-Em-Calpain A和原头蚴天然Calpain A蛋白。结论 成功构建Em-Calpain A基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体，为研究该基因的功能奠定了基础。

摘要： Genetic polymorphisms in interleukin-13 () gene have been associated with asthma susceptibility in different ethnicities. We investigated the association of two polymorphisms in the gene [rs1800925 (c.-93+487C>T), and rs20541 (***144Arg)] with asthma susceptibility among Sudanese patients. A case-control study was conducted at Al-Shaab Teaching Hospital between April and October 2022. Involving fifty asthmatic patients and fifty controls. The genotypes were determined using an allele-specific polymerase chain reaction. For rs1800925, a significant association with asthma in multivariate analysis (aOR=3.15, 95% CI: 1.13-8.76; p=0.028). The T allele was the most frequent in cases and showed a significant association with asthma (aOR=1.99, 95% CI: 1.13-3.5; p=0.016). The rs20541 did not show any association with asthma. The rs1800925 is associated with an increased risk of asthma in Sudanese patients.

关键词： 鼠李糖乳酪杆菌Glory LG12   便秘   润肠通便效果   炎性细胞因子   胃肠调节肽   干细胞因子/C-kit信号通路  

摘要： 目的：基于干细胞因子（stem cell factor,SCF）/C-kit信号通路探讨鼠李糖乳酪杆菌Glory LG12的润肠通便作用。方法：雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组以及鼠李糖乳酪杆菌Glory LG12低剂量（1.5×10～6 CFU/只）、中剂量（1.5×10～7 CFU/只）和高剂量（1.5×10～8 CFU/只）组，各组小鼠分别连续灌胃相应的药物15 d后，灌胃盐酸洛哌丁胺混悬液（4 mg/kg）建立便秘模型，测定各组小鼠的体质量、首粒黑便排出时间、5 h内黑便排出数量及质量、小肠推进率、血清中胃肠调节肽和炎性细胞因子水平及小鼠结肠组织SCF、C-kit转录水平，并观察结肠病理结构。结果：与模型组相比，中、高剂量的鼠李糖乳酪杆菌Glory LG12均能缩短小鼠的首粒黑便排出时间（P<0.001），增加小鼠5 h内排黑便的粒数和质量（P<0.01、P<0.001），提高小肠内的墨汁推进率（P<0.001）；升高小鼠血清中胃动素、胃泌素、P物质和白细胞介素（interleukin,IL)10的质量浓度，降低内皮素1、生长抑素、血管活性肠肽和IL-6的质量浓度；增加结肠组织中SCF和C-kit mRNA相对表达量（P<0.01、P<0.001）；修复受损结肠屏障。结论：鼠李糖乳酪杆菌Glory LG12能够通过调节SCF/C-kit通路，进而影响胃肠调节肽和炎性细胞因子的释放，发挥其促进胃肠蠕动的功能，改善便秘症状。

关键词： IL-12   antitumor immunity   neoantigen-reactive T cells   osteosarcoma  

摘要： Purpose:Despite the proven clinical benefits of cytokine therapy in cancer treatment, systemic administration of cytokines such as IL-12 is constrained by dose-limiting toxicities and short half-lives. To address these challenges, we explored a localized cytokine delivery strategy using engineered neoantigen-reactive T (NRT) cells as carriers in a murine model of osteosarcoma. Materials and Methods:We used a neoantigen from K7M2 osteosarcoma cells to retrovirally transduce NRT cells to express an inducible form of IL-12. We evaluated the engineered NRT cells' antitumor activity and the production of IL-12 and IFN-γ upon in vitro co-culture with tumor cells. We systemically administered NRT-IL-12 cells in a mouse model of osteosarcoma to assess their impact on tumor growth and survival. Results:assays demonstrated that the engineered NRT cells exhibited enhanced antitumor activity and produced elevated levels of IL-12 and IFN-γ. In the mouse model of osteosarcoma, systemic administration of NRT-IL-12 cells resulted in a significant reduction in tumor growth and an increase in survival rates compared to the administration of control NRT cells. Further analysis revealed that NRT-IL-12 cells induced a profound increase in CD8+ T-cell infiltration and a decrease in Treg cells within the tumor microenvironment. Conclusion:Our study presents a novel and efficacious strategy for osteosarcoma immunotherapy by harnessing NRT cells as targeted cytokine delivery vehicles.

关键词： 单克隆抗体   不良事件   细胞因子释放综合征   数据挖掘   利妥昔单抗   莫妥珠单抗  

摘要： 目的 基于美国FDA不良事件报告系统（FAERS），评估和比较不同抗肿瘤单克隆抗体和细胞因子释放综合征之间的关系，以期为该类药物的安全合理使用提供参考。方法 收集FAERS建库至2024年第一季度以抗肿瘤单克隆抗体作为首要怀疑药物，细胞因子释放综合征作为首选术语的病例报告。采用报告比值比（ROR）和综合标准法（MHRA）研究抗肿瘤单克隆抗体与细胞因子释放综合征之间的关系，并进一步研究细胞因子释放综合征导致的严重结局和死亡率。结果 共收集到3 182份细胞因子释放综合征的报告，上报国家以美国为主（23.79%），上报人员以医务人员为主（95.76%）。患者年龄以18～64岁占比最高（35.42%），男性占比较女性高（49.31%vs 34.54%）。细胞因子释放综合征最常见报道为利妥昔单抗治疗（865例）；莫妥珠单抗在抗肿瘤单克隆抗体治疗中信号最强[ROR=972.56,95%CI=665.75～1 420.78；比例报告比值比法（PRR）=748.85，χ2=25 161.11]；细胞因子释放综合征相关死亡率以奥加伊妥珠单抗最高（31.25%）。结论 抗肿瘤单克隆抗体相关细胞因子释放综合征后果较为严重，临床在使用抗肿瘤单克隆抗体时应警惕患者发生细胞因子释放综合征的可能，尤其是患有血液系统肿瘤的患者。

关键词： 系统性红斑狼疮   靶向制剂   细胞免疫  

摘要： 系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及全身的系统性慢性自身免疫性疾病。一部分SLE患者应用传统的皮质类固醇和免疫抑制剂疗效欠佳。近年来，随着对自身免疫疾病发生的分子机制的深入认识，诸多潜在的治疗靶点逐渐被发现。靶向B细胞、T细胞、干扰素，抑制布鲁顿酪氨酸激酶，阻断JAK-STAT通路等相关药物临床研究及细胞免疫治疗相关研究正在进行中或已完成。本文将对新型靶向制剂和新型细胞免疫治疗SLE领域的研究进展做一综述。