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关键词： 视神经脊髓炎谱系疾病   白细胞介素-27   胱抑素C   3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体   病情程度   预后   相关性  

摘要： 目的探讨血清白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)、胱抑素C(cystatin C,CysC)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)抗体与视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)患儿病情程度的关系及对预后的影响。方法选取2019年7月至2023年7月昆明市儿童医院收治的102例NMOSD患儿,另选取同期健康儿童102名,比较NMOSD患儿与健康儿童血清IL-27、CysC、GAPDH抗体水平,对比不同病情NMOSD患儿血清IL-27、CysC、GAPDH抗体水平,分析血清IL-27、CysC、GAPDH抗体与病情、脑脊液标志物的相关性。针对102例NMOSD患儿给予个体化治疗,随访1年,以是否发生疾病复发评估预后,分为复发组与未复发组,比较两组临床资料、血清IL-27、CysC、GAPDH抗体水平,分析血清IL-27、CysC、GAPDH抗体对疾病复发的影响,评价血清IL-27、CysC、GAPDH抗体对疾病复发的预测价值。结果NMOSD患儿血清IL-27、CysC水平低于健康儿童,GAPDH抗体水平高于健康儿童(P<0.05);血清IL-27、CysC与水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)-IgG抗体阳性、脊髓受累节段数、扩展残疾状态量表(Expanded disability status scale,EDSS)评分、脑脊液蛋白含量、白细胞数呈负相关,GAPDH抗体与AQP4-IgG抗体阳性、脊髓受累节段数、EDSS评分、脑脊液蛋白含量、白细胞数呈正相关(P<0.05);随访1年,失访2例,疾病复发21例,疾病未复发79例,分别纳入复发组与未复发组。复发组与未复发组脊髓受累节段数、EDSS评分、脑脊液蛋白含量比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组血清IL-27、CysC水平低于未复发组,GAPDH抗体水平高于未复发组(P<0.05);血清IL-27、CysC、GAPDH抗体与疾病复发显著相关(P<0.05);血清IL-27、CysC、GAPDH抗体预测NMOSD患儿疾病复发的曲线下面积(Area under the curve,AUC)为0.748、0.791、0.747,最佳截断值分别为38.77 pg/mL、0.79 mg/L、55.81 pg/mL;三者联合预测NMOSD患儿疾病复发的AUC为0.900,优于单独预测价值(Z=2.215、2.137、2.220,P=0.024、0.033、0.023)。结论血清IL-27、CysC、GAPDH抗体与NMOSD患儿病情程度和预后显著相关,可有效预测疾病复发风险,且联合检测时能取得更可靠的预测价值。

关键词： β-伴大豆球蛋白   提取纯化   多克隆抗体   酶联免疫吸附试验  

摘要： 本研究通过碱溶酸沉法、切向流过滤(tangentialflowfiltration,TFF)系统对β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin,β-CG)进行分离纯化,并制备兔抗β-CG多克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附和免疫印迹检测抗体效价及其特异性。采用棋盘滴定法明确最佳抗原包被浓度和抗体稀释度。结果显示,经TFF纯化后,β-CG(α’、α和β亚基)占比96.70%,酸性亚基占比3.30%,2S白蛋白和抑制蛋白被去除。自制兔抗β-CG多克隆抗体可有效结合纯化后的β-CG,抗体特异性良好。最终确定的最佳抗原包被质量浓度为1μg/mL,最佳抗体稀释度为1∶9000(V/V)。综上,本研究不仅可为β-CG的提取与纯化提供新的思路,同时也可为今后研究低致敏性β-CG的作用机制、开发低致敏性大豆蛋白产品奠定基础。

关键词： CD82蛋白   单克隆抗体   原核表达   流式细胞术  

摘要： 为研究CD82蛋白在猪病中的功能,提供一种针对猪CD82蛋白的单克隆流式抗体,本研究通过原核表达系统制备猪CD82蛋白大细胞外环结构域(EC2)重组抗原,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠。通过4次免疫和ELISA筛选,获得抗体效价最高的小鼠,用其脾细胞进行细胞融合。对融合细胞上清用流式细胞术进行筛选,选取效果最好的1株杂交瘤细胞株11G3制备腹水并纯化,其抗体亚型为IgG2a型。通过间接ELISA和流式细胞术对纯化后的CD82 mAb进行验证,显示出高亲和力和特异性,能有效标记表达CD82蛋白的猪肺巨噬细胞(PAM)。本研究结果为CD82蛋白在猪病中的功能研究提供了重要的生物学工具,为进一步探索其在免疫调节和抗病毒反应中的作用奠定了基础。

关键词： Dexamethasone   Roflumilast   Phosphodiesterase-4   Inflammatory pathway  

摘要： Introduction: High-dose dexamethasone (DEX) is used for management of severe conditions. However, the multisystem adverse effects induced by glucocorticoids represent a hindering stone toward the effective clinical use of such agents. Various initiatives have been taken to ameliorate these complications with limited success. Aim: The present study aims to explore the beneficial effects of roflumilast (ROF), a phosphodiesterase-4 (PDE-4) inhibitor, to combat DEX-induced steatohepatitis, metabolic abnormalities and aortic degeneration. Results: The application of ROF (2.5 and 5 mg/kg) has reverted the hepatic and aortic histopathological abnormalities as well as the rise in serum liver enzymes induced by DEX. Such palliative effect is probably attributed to PDE-4 inhibition (tcAMP) that subsequently regulates multiple effectors. The chemotaxis of inflammatory cells (MCP-1) was inhibited by ROF treatments which was linked to inhibition of extracellular ROS production (MDA and NO) as well as restoration of cellular antioxidant defense (GSH). DEX challenge was associated with activation of the inflammatory pathways including TNF-alpha/NF-kappa B and NLRP3/IL-1(3 that were significantly dampened in the ROF groups. The oxidative stress as well as activation of inflammatory pathways exerted by DEX has contributed to the activation of endoplasmic reticulum stress (CHOP and PERK) posing more threats to the insulted cells, however, fortunately, ROF treatments showed inhibited activation of ER stress sensors and thereby abstaining the cells from inevitable damage. The metabolic abnormalities induced by DEX including elevated fasting insulin and heightened AUC of blood glucose level upon application of oral glucose tolerance test were significantly improved by ROF treatment. Conclusion: The findings of our study depicted the hepatoprotective and metabolic regulating potentials of ROF in a rat model of DEX- induced steatohepatitis. Thereby, enhancing the overall efficacy and safe

关键词： 梅毒螺旋体   OmpH蛋白   生物信息学分析   蛋白表达与纯化   免疫原性  

摘要： 目的利用生物信息学方法分析预测梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)TpOmpH蛋白的生物学性质,并纯化获得目的蛋白且制备得到多克隆抗体。方法2024年1月至2025年2月湖南中医药高等专科学校附属第一医院(湖南省直中医医院)医学检验科等团队利用生物信息学及动物实验等方法从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)中获得TpOmpH蛋白的编码序列,使用Protparam、Protscale、SignalP 6.0、NetNGlyc-1.0、TMHMM2.0、NetPhos-3.1、SOPMA、AlphaFold3、IEDB、STRING、C-immsim等生物信息学工具预测TpOmpH的生物学特性。构建重组质粒pET28a-TpOmpH,纯化目的蛋白。将TpOmpH蛋白免疫小鼠,获得抗血清并检测抗体滴度。结果TpOmpH是一个相对分子质量为19.7 kDa的疏水性外膜蛋白,稳定性较强。TpOmpH蛋白定位在细胞膜外,含有11个丝氨酸、4个苏氨酸和1个酪氨酸磷酸化位点,但是无糖基化位点。TpOmpH蛋白二级结构77.91%的氨基酸为α-螺旋,8.72%的氨基酸为β片层结构,10.47%的氨基酸为无规卷曲,2.91%的氨基酸为β转角。AlphaFold3预测得到的三级结构处于最佳状态。TpOmpH蛋白有4个细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位、4个线性表位和5个空间表位。TpOmpH蛋白可能与Tp92、MutS、SurA、TPANIC_0600等蛋白发生相互作用,可能参与了Tp入侵。TpOmpH蛋白能够诱导B细胞数量增加、抗体含量升高、Th细胞数量增加、NK细胞数量上升以及能够诱导各种细胞因子表达。通过Ni 2+亲和层析获得了较高纯度的TpOmpH蛋白,与理论相对分子质量相符合。TpOmpH蛋白能诱导小鼠分泌多克隆抗体,抗体滴度高于1∶10000。结论TpOmpH蛋白是一种定位在Tp外膜的疏水性蛋白,能诱导小鼠分泌高滴度抗体,为Tp的致病机制以及疫苗研发提供了实验基础。

关键词： T淋巴细胞   B淋巴细胞   血管内皮生长因子   急性心肌梗死   诊断   预后  

摘要： 目的分析T/B淋巴细胞计数及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平对急性心肌梗死诊断和疾病预后的预测价值。方法回顾性选取2021年1月—2024年1月于武警河南总队医院接受治疗的80例急性心肌梗死患者作为病例组,同时选取同期进行体检的30例心脏健康人群为对照组。对病例组患者治疗后进行为期5个月的随访工作,根据患者的预后情况,将其分为预后良好组58例和预后不良组22例。统计学分析患者的T/B淋巴细胞计数、VEGF水平。受试者工作曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析T/B淋巴细胞计数、VEGF水平对急性心肌梗死诊断和疾病预后的预测价值。结果两组T淋巴细胞、(CD19^(+))、B调节细胞(B10)、B1a计数和VEGF水平均有明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC结果显示,CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、CD19^(+)、B10、B1a、VEGF对急性心肌梗死患者的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.762、0.689、0.763、0.665、0.636、0.632、0.626、0.649,对应的灵敏度分别为55.0%、67.5%、53.8%、92.5%、71.3%、47.5%、51.3%、65.0%,特异度分别为93.3%、66.7%、90.0%、36.7%、56.7%、80.0%、76.7%、63.3%。预后不良组患者T淋巴细胞中CD3^(+)T淋巴细胞CD3^(+)、CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+))、CD8^(+)T淋巴细胞(CD8^(+))计数均低于良好组,CD4^(+)/CD8^(+)高于良好组;B淋巴细胞中,不良组的CD19^(+)B淋巴细胞(CD19^(+))计数高于良好组,B10、B1a低于良好组;不良组患者的VEGF水平较良好组显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。ROC结果显示,CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(^(+))/CD8^(+)、CD19^(+)、B10、B1a、VEGF对急性心肌梗死患者发生不良预后AUC分别为0.808、0.780、0.830、0.682、0.860、0.856、0.825、0.863,对应的灵敏度分别为86.40%、77.30%、81.82%、68.18%、90.91%、95.45%、95.45%、68.18%,特异度分别为82.41%、70.69%、79.31%、70.69%、68.97%、65.52%、63.79%、89.66%。结论确诊为急性心肌梗死和发生不良预后患者的CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)计数均低,CD4^(+)/CD8^(+)高,B淋巴细胞中的CD19^(+)计数高,B10、B1a计数均低,VEGF水平较高,T/B淋巴细胞计数、VEGF水平对急性心肌梗死诊断和疾病预后有一定的预测价值。

关键词： 系统性红斑狼疮   嵌合抗原受体T细胞疗法   B细胞清除   免疫系统重置  

摘要： 系统性红斑狼疮(SLE)是一种影响全身多系统的自身免疫疾病,其特征是广泛的炎症和器官损害。传统免疫抑制治疗存在长期不良反应和复发率高等局限,疾病管理面临挑战。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法通过基因工程手段改造T细胞,特异性识别并清除致病B细胞,在肿瘤治疗中取得成功后被引入SLE研究。初步临床探索显示,CAR-T疗法在难治性SLE患者中能够有效介导快速和深度的疾病缓解,并且耐受性良好。随着更多、更大规模临床试验的开展,CAR-T疗法有望在安全性、靶点选择及生物标志物等方面进一步优化,为SLE患者提供新的精准治疗策略。

关键词： 当归贝母苦参丸   慢性细菌性膀胱炎   肠道菌群   白细胞介素-6   肿瘤坏死因子-α  

摘要： 目的观察当归贝母苦参丸对慢性细菌性膀胱炎(chronic bacterial cystitis,CBC)大鼠膀胱炎症的反应,通过大鼠肠道菌群和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)指标的变化探讨当归贝母苦参丸治疗CBC的作用机制。方法将40只SPF级SD雌大鼠随机分为5组,每组8只。对照组膀胱灌注0.1 mL生理盐水,模型组、低、中、高剂量组灌注等量大肠埃希菌悬浮液(1×10^(7)个/mL)建立CBC大鼠模型。造模成功后,对照组、模型组灌胃2 mL生理盐水,低、中、高剂量组灌入等量当归贝母苦参丸煎剂(2.9 g/kg、5.8 g/kg、11.6 g/kg),每天1次,连续14天。灌胃结束后取材,苏木精—伊红染色观察各组膀胱病理形态学变化,酶联免疫吸附检测血清中IL-6、TNF-α水平,免疫荧光染色法检测IL-6、TNF-α在膀胱的分布表达,免疫印迹法检测IL-6、TNF-α蛋白表达,16S rDNA测序肠道粪便分析各组肠道菌群的差异。结果模型组大鼠血清IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01),低、中、高剂量组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组大鼠膀胱尿路上皮IL-6、TNF-α平均强度值显著增强(P<0.01),低、中、高剂量组IL-6、TNF-α平均强度值降低(P<0.01)。模型组大鼠IL-6、TNF-α蛋白表达升高(P<0.01),低、中、高剂量组IL-6、TNF-α蛋白表达降低(P<0.01)。16S rDNA测序:各组大鼠肠道菌群在菌群组成的丰富度、稳定性、内部的差异程度上存在明显不同,且这些差异具有统计学意义。结论当归贝母苦参丸煎剂对CBC大鼠膀胱炎症有抑制作用,作用机制可能是通过下调膀胱IL-6、TNF-α表达和调控肠道菌群来缓解CBC症状。

关键词： 传染性法氏囊病毒   单克隆抗体   检测方法   双抗体夹心ELISA  

摘要： 旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性,与REV、AEV、ALV和EDSV均无交叉反应;能检测病毒的最小量为1.585×10^(3) ELD50;批间和批内重复性试验显示,该方法具有良好的重复性;通过该方法对49份临床样品进行检测,与商品化的IBDV抗原检测卡进行比较,符合率达94.18%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的快速检测,为制备商品化的IBDV检测试剂盒奠定基础。

关键词： 间充质干细胞   细胞因子   体细胞   菌落  

摘要： 为研究奶牛脐带间充质干细胞治疗奶牛乳房炎的效果,该试验利用细胞分离技术培养奶牛脐带间充质干细胞,将干细胞与抗生素分别注入患乳房炎奶牛体内,通过比较二者血清中IL-6、CRP、8-OHdG、SOD、TNF-α含量变化和乳汁组成变化,探究脐带间充质干细胞对奶牛乳房炎的治疗效果。结果显示,注射干细胞奶牛血清中IL-6降低11.74%,CRP升高11.02%,8-OHdG降低3.17%,SOD升高3.83%,TNF-α降低10.61%,乳汁中菌落数和体细胞数均下降明显;与注射抗生素奶牛血清中IL-6、CRP、8-OHdG、SOD、TNF-α含量变化存在差异。试验证明脐带间充质干细胞具有治疗奶牛乳房炎效果,且在抑制炎症、恢复乳汁品质、降低组织损伤和修复乳腺组织方面均具有一定功效。