课程文献中心 更多>>

关键词： 柔嫩艾美耳球虫   多表位重组质粒   真核表达   DNA疫苗  

摘要： 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

关键词： 关节炎,类风湿   阿巴西普   自噬   T淋巴细胞  

摘要： 目的探讨难治性中重度类风湿关节炎(RA)患者阿巴西普治疗前后PBMCs中自噬相关基因(ATG)3、ATG5、ATG12、ATG16、微管相关蛋白轻链3(LC3)和Beclin-1的表达水平及差异,并探讨其临床意义。方法收集2020年6月至2022年6月在川北医学附属医院就诊的符合纳排标准的30例RA患者治疗前后外周血标本,通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测自噬相关基因、蛋白印迹法检测自噬相关蛋白表达水平。运用SPSS26.0和GraphPad Prism 9.0行统计学分析,统计学分析采用独立样本t检验,变量间的相关关系采用Spearman相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果①与治疗前ATG12(0.0076±0.0059)、ATG16(0.0031±0.0022)、LC3(0.0382±0.0171)的mRNA表达水平相比,阿巴西普治疗24周后ATG12的mRNA表达水平(0.0114±0.0031)、ATG16的mRNA表达水平(0.0042±0.0007)升高(t=-2.49,P=0.042;t=-2.15,P=0.038),LC3的mRNA表达水平(0.0226±0.0083)降低(t=3.28,P=0.003)。②与治疗前相比,治疗24周后缓解组的ATG16 mRNA表达水平(0.0048±0.0008)较未缓解组(0.0038±0.0003)升高(t=-3.41,P=0.003);LC3 mRNA表达水平(0.0273±0.0073)较未缓解组(0.0179±0.0065)降低(t=3.69,P=0.017)。③ATG5 mRNA表达水平与关节压痛数(TJC)、ESR、抗CCP抗体水平呈正相关(r=0.75,P=0.049;r=0.43,P=0.044;r=0.97,P=0.011);ATG12 mRNA表达水平与DAS28、ESR、hsCRP呈负相关(r=-0.46,P=0.025;r=-0.51,P=0.226;r=-0.41,P=0.031);ATG16 mRNA表达水平与ESR、hsCRP呈正相关(r=0.50,P=0.030;r=0.40,P=0.024);Beclin-1 mRNA表达水平与TJC、RF-IgG、抗CCP抗体呈负相关(r=-0.51,P=0.025;r=-0.42,P=0.035;r=-0.81,P=0.043);LC-3 mRNA表达水平与ESR、hsCRP呈正相关(r=0.55,P=0.028;r=0.56,P=0.024)。④与治疗前ATG12的蛋白表达水平(0.6753±0.0363)相比,治疗24周后表达水平(1.5477±0.0805)升高(t=-7.80,P=0.001);与治疗前ATG16(0.8171±0.0890)、LC3Ⅱ(0.8071±0.0721)、IL-1β(1.1297±0.1189)的蛋白表达水平相比,阿巴西普治疗24周后ATG16(0.4246±0.1035)、LC3Ⅱ(0.3537±0.0569)、IL-1β(0.3467±0.0508)的蛋白表达水平降低(t=2.62,P=0.042;t=2.88,P=0.045;t=2.25,P=0.038)。结论ATG表现出与RA患者多个临床指标、疾病活动度指标呈相关性,提示自噬可能参与RA发病。阿巴西普可能通过调控包含ATG12、ATG16、LC3在内的自噬相关基因、蛋白的表达调节自噬,可能是潜在的自噬调节剂。

关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)   胶体金检测试纸条   单克隆抗体  

摘要： 为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。

关键词： 四君子汤   含药血清   抗PD-1免疫治疗   肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞   免疫细胞因子   Ras-MEK-ERK信号通路  

摘要： 目的通过体外实验探究四君子汤含药血清(SJZDCS)联合PD-1抗体对肺癌肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞免疫功能的影响和机制。方法取雄性SD大鼠,连续ig四君子汤6 d,麻醉取血,制备含药血清。取雄性C57BL/6J小鼠,建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,饲养第18天后处死小鼠,提取肿瘤并分离肿瘤浸润淋巴细胞,磁珠分选肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞。建立Lewis细胞与肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞共培养体系,CCK-8法检测Lewis细胞的增殖,筛选SJZDCS的最佳作用浓度和时间。建立Lewis细胞与肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞间接共培养体系,分为对照组、PD-1抗体(20μg·mL^(−1))组、SJZDCS(20%)组、SJZDCS(20%)+PD-1抗体(20μg·mL^(−1))组,干预72 h;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测共培养细胞上清中免疫功能相关细胞因子乳酸脱氢酶(LDH)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6和IL-10表达水平,Western blotting检测肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞中PD-1和Ras-MEK-ERK通路蛋白表达水平。结果20%SJZDCS干预肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞72 h对抑制共培养Lewis细胞的增殖效果最佳。与对照组相比,PD-1抗体组TNF-α、IFN-γ、IL-2和TGF-β1水平显著升高(P<0.01),IL-4、IL-6、IL-10和LDH水平显著降低(P<0.05);SJZDCS组IL-2水平显著升高(P<0.01),IL-4、IL-6、LDH和TGF-β1水平显著降低(P<0.05、0.01);SJZDCS+PD-1抗体组TNF-α、IFN-γ和IL-2水平显著升高(P<0.01),IL-4、IL-6、LDH和TGF-β1水平降低(P<0.01)。与PD-1抗体组相比,SJZDCS+PD-1抗体组TNF-α、IFN-γ、IL-2升高水平和IL-4、IL-6和TGF-β1的降低水平更显著(P<0.01)。与SJZDCS组相比,SJZDCS+PD-1抗体组TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的水平更高(P<0.01)。与对照组相比,PD-1抗体组、SJZDCS组、SJZDCS+PD-1抗体组CD4^(+)T淋巴细胞中PD-1蛋白表达显著降低(P<0.01),p-MEK1/2和MRK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05、0.01);PD-1抗体组、SJZDCS+PD-1抗体组Ras和P-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.01)。与PD-1抗体组相比,SJZDCS+PD-1抗体组ERK1/2、p-MEK1/2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.01),Ras蛋白表达显著降低(P<0.01)。与SJZDCS组相比,SJZDCS+PD-1抗体组Ras、p-MEK1/2、MEK1/2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论SJZDCS单用或与PD-1抗体联用,可在体外调节肺癌肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞免疫功能,其机制与调控PD-1及下游Ras-MEK-ERK通路表达有关。

关键词： 人免疫球蛋白   罗红霉素   百日咳   炎症-免疫功能  

摘要： 观察人免疫球蛋白同步罗红霉素治疗对百日咳患儿炎症-免疫功能的影响。方法 将本院2023 年 6 月-2024 年 6 月纳入的82例百日咳患儿作为研究对象,参照组和观察组分别实行单一用药和联合用药方案,对比应用情况。结果 和参照组相比较,治疗后观察组炎症指标水平明显降低;观察组患者中,其免疫指标均高于参照组;参照组治疗有效率和观察组相比较明显降低(P<0.05)。结论 对于百日咳患儿来说,联合用药方面有利于患儿炎症指标水平的改善,有利于提高免疫指标,进而提高其治疗有效率,确保患者用药安全,临床中值得对此进行大力推广。

关键词： 乳腺肿瘤   三阴型乳腺癌   TSR   FF   sTILs   新辅助治疗   MP分级   pCR  

摘要： 目的探讨肿瘤间质比(tumor-stroma ratio,TSR)联合纤维化中心(fibrotic focus,FF)、肿瘤间质浸润淋巴细胞(stromal tumor-infiltrating lymphocytes,sTILs)与三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)新辅助治疗后病理完全缓解(pathological complete response,pCR)的相关性和预后价值。方法收集170例TNBC的临床资料,由两位高年资病理医师采用双盲法阅片,复核所有病例的病检资料,评估TSR、FF、sTILs结果和CD4、CD8的表达,分析其与pCR、预后的关系。结果170例TNBC经新辅助治疗后57例为pCR,113例为非pCR(non-pCR)。pCR组和non-pCR组中TSR、FF、sTILs、CD4、CD8、Ki67、脉管内癌栓、淋巴结转移差异有统计学意义;不同Miller-Payne(MP)分级中TSR、FF和sTILs差异也有统计学意义。TSR、sTILs、TSR联合FF、TSR联合sTILs、Ki67与pCR呈正相关;同时,前三者还与MP分级呈正相关,而FF、脉管内癌栓、淋巴结转移与pCR呈负相关,且FF与MP分级也呈负相关;TSR>1、G0 FF和sTILs>50%时患者的预后最佳;TSR联合FF、sTILs时pCR组预后均优于non-PCR组。结论TSR、FF、sTILs有望成为预测TNBC新辅助治疗疗效及预后的指标,为TNBC患者的治疗和科研提供新思路。

关键词： 过敏性鼻炎   舌下特异性免疫治疗   免疫炎症调节作用   不良反应  

摘要： 分析舌下特异性免疫治疗过敏性鼻炎的可能机制及免疫炎症调节作用。方法 纳入近四年(2020.10至2023.12)至南华大学附属第一医院耳鼻咽喉科诊疗的70例过敏性鼻炎病人,随机数字表法分组,其中50%的病人纳入参照组,其他病人纳入治疗组,两组均接受辅舒良常规治疗,治疗组另给予舌下特异性免疫治疗。统计学比较治疗结果。结果 治疗前,两组比较症状评分、药物积分、血清炎症指标、免疫功能指标,P>0.05;治疗后,症状评分、药物积分以及各项血清炎症指标,治疗组明显更低(P<0.05);治疗后治疗组免疫功能指标更优(P<0.05)。两组患者均未出现不良反应。结论 过敏性鼻炎采用舌下特异性免疫治疗可更好的缓解症状,降低机体炎症,改善免疫功能,安全性显著。

摘要： Host genetics shape immune responses and influence severity of infectious diseases. The HLA-B -21 M/T dimorphism tunes the functionality of natural killer (NK) cells expressing the inhibitory receptor NKG2A. NKG2A+ NK cells have been reported to recognize SARS-CoV-2-infected cells, but it remains unclear whether the HLA-B -21 M/T dimorphism associates with COVID-19 severity. Here, we investigated the influence of the HLA-B -21 M/T dimorphism in a cohort of 230 unvaccinated patients hospitalized with COVID-19 and requiring respiratory support. We found that HLA-B -21 M/M genotypes were more prevalent in patients with moderate compared to severe COVID-19 (6.0% vs. 0.9%). Comparison of age- and sex-matched sub-groups revealed that patients with M/M genotypes required mechanical respiratory support less frequently (OR = 0.13, 95% CI = 0.01-0.76, P = 0.013). Furthermore, patients with M/M genotypes showed a coordinately shifted signature of clinical laboratory parameters, coinciding with elevated serum levels of the anti-viral cytokine IFN-gamma. These findings demonstrate that HLA-B variants associate with COVID-19 severity and suggest that the robust functionality of NKG2A+ NK cells in patients carrying the M/M genotype may contribute to protection from severe disease.

关键词： 心肌梗死   CD8^(+)T细胞   Tc17细胞   炎症   细胞因子  

摘要： 目的:检测急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)早期外周血中表达IL-17A的CD8^(+)T细胞,即Tc17细胞的表型和功能。方法:收集健康人和STEMI患者外周血白细胞,流式细胞术检测CCR6、CD161、CCR5、IL-23R、RORγt表达确定Tc17细胞。流式细胞术检测Tc17细胞活化状态、细胞因子表达和增殖状况。结果:健康志愿者和STEMI患者CCR6^(+)CD161^(+)CD8^(+)T细胞均高表达CCR5、IL-23R和RORγt,被鉴定为Tc17细胞。与健康志愿者相比,STEMI患者Tc17细胞在总CD8^(+)T细胞中的比例升高,且表型上更偏向于效应型记忆性T细胞。健康志愿者Tc17细胞主要表达IL-17A和IL-22,而STEMI患者Tc17细胞不仅表达IL-17A和IL-22,也表达IL-10和TGF-β。但健康志愿者和STEMI患者Tc17细胞均不表达IFN-γ、IL-5、Foxp3和Ki67。结论:STEMI早期Tc17细胞表达IL-17A和IL-22同时上调IL-10和TGF-β表达,可能参与和调节STEMI后急性炎症反应。

关键词： Antibody-drug conjugate   metastatic triple negative breast cancer   sacituzumab govitecan   trastuzumab deruxtecan   triple negative breast cancer  

摘要： Triple-negative breast cancer (TNBC) continues to be the most aggressive molecular subtype of breast cancer and the optimal therapeutic management is still a challenge. Due to the lack of “traditional” molecular targets, for decades, systemic treatment has been characterized by the use of classic cytotoxic drugs. In recent years, it has been proved that TNBC is not represented by a single pathology lack of specific features, but of different entities with distinct genetic, histological and clinical alterations. This allowed to optimize and improve the therapeutic management of the disease, with the approval of multiple anti-tumor agents, including antibody-drug conjugates (ADC). The clinical case we present illustrates the “journey” of a patient affected by metastatic TNBC, of the therapeutic choices made among the options available over the years, from the standard options to the innovative strategies. © 2024 Il Pensiero Scientifico Editore s.r.l.. All rights reserved.