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关键词： 结核分枝杆菌   焦亡   Phage   生物信息学  

摘要： 目的:应用生物信息学软件对结核分枝杆菌Rv1579c基因编码的Phage蛋白结构和功能进行预测分析。方法:从NCBI Gene数据库中获取Rv1579c编码的氨基酸序列;通过ProtParam、ProtScale、NetPhos、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL在线网站分别对Phage蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、跨膜螺旋结构、二级结构以及三级结构建模进行预测分析;利用IEDB、ABCpred、SYFPEITHI等软件预测Phage蛋白的细胞抗原表位;使用NCBI中BLAST数据库、UniProt数据库、MEGA-X软件分析Phage蛋白同源性及进化树的构建;STRING数据库预测其相互作用蛋白。结果:Phage蛋白共含有104个氨基酸,分子式为C_(480)H_(750)N_(140)O_(164)S_(4),原子总数1538,为亲水性蛋白,第22、23位氨基酸疏水性得分最高为-1.433;第94位氨基酸亲水性得分最高为-2.511。该蛋白不稳定指数42.81,为不稳定蛋白;无糖基化位点,含有12个磷酸化位点,无跨膜螺旋结构。另外,Phage蛋白共获得多个优势细胞抗原表位。结论:生物信息学分析Phage蛋白为结核分枝杆菌胞膜亲水性不稳定蛋白,介导结核分枝杆菌焦亡和耐药的发生。同时,该蛋白的多个优势细胞抗原表位,可成为未来结核诊断治疗的新靶标。

关键词： 难治性支原体肺炎   肿瘤坏死因子-α   血清淀粉样蛋白A   诊断  

摘要： 目的:分析外周血和肺泡灌洗液社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(CARDS TX)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清淀粉样蛋白A(SAA)对难治性支原体肺炎(RMPP)儿童的鉴别诊断价值。方法:将2023年06月至2024年06月郑州大学附属儿童医院住院治疗的100例RMPP病儿、100例普通MPP病儿、100例健康查体儿童分别纳入RMPP组、MPP组及对照组。比较MPP组和RMPP组患儿的临床表现、肺外脏器受累情况、影像学变化、支气管镜检查表现,比较三组患儿的血清及肺泡灌洗液内CARDS TX、TNF-α、SAA水平,并ROC曲线分析血清及肺泡灌洗液内CARDS TX、TNF-α、SAA水平对RMPP的诊断价值。结果:与MPP组相比,RMPP组患儿的呼吸音减低、肺外脏器受累、肺实变、胸腔积液、黏膜糜烂、黏膜脱落、黏液栓形成发生率升高(P<0.05)。与对照组相比,MPP组和RMPP组患儿的血清及肺泡灌洗液内CARDS TX、TNF-α、SAA水平均升高,且RMPP组高于MPP组(P<0.05)。ROC曲线分析,肺泡灌洗液CARDS TX诊断RMPP的曲线下面积最大,诊断截点值为,诊断灵敏度和特异度分别为85.02%和78.71%。结论:外周血和肺泡灌洗液CARDS TX、TNF-α、SAA对RMPP患儿均有一定的诊断效能,其中肺泡灌洗液CARDS TX的诊断效能最佳。

关键词： 乳肉兼用牛   荷斯坦奶牛   细胞因子   抗病力   检测  

摘要： 为了解弗莱维赫乳肉兼用牛×荷斯坦奶牛杂交代乳肉兼用牛(以下简称“弗荷牛”)与荷斯坦奶牛(以下简称“荷牛”)在相同环境及饲养管理条件下,抗病力相关细胞因子之间的差异,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验,对白介素、补体、干扰素、免疫球蛋白、主要组织相容性复合体(MHC)等进行了检测。结果显示;弗荷牛血液中的白介素质量浓度高于荷牛,表现出更强的免疫应答能力和抗病力;弗荷牛MHC质量浓度显著高于荷牛,表明弗荷牛在抗病性方面优于荷牛。结果说明,弗荷牛较荷牛表现出更强的抗病力。

关键词： 猪   Treg细胞   FoxP3   抗体制备   单克隆抗  

摘要： 调节性T细胞(Treg)是具有免疫调节活性的淋巴细胞,通过抑制各种效应性淋巴细胞来诱导自身免疫耐受。FoxP3是CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞重要的转录因子,对其分化发育和功能维持有着重要的调控作用,因此联合FoxP3抗原可以更好地识别CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞。为了制备出特异性的猪Treg细胞表面标记物FoxP3的单克隆抗体,本研究选择抗原性较强的基因编码片段,构建了FoxP3抗原表位区段(1~840 bp)的原核表达质粒,诱导表达并纯化后,用目的蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,通过间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光的方法筛选能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞。结果:筛选到了5株效价较高的FoxP3单克隆抗体产生细胞(F4B9、F4A9、F1E12、F1A11和F4A10),均具有良好的特异性,能识别内源性和外源性FoxP3蛋白,且能稳定地分泌抗体,为定性或定量检测猪Treg细胞以及验证Treg细胞的功能奠定了基础。

关键词： 原发性胆汁性胆管炎   熊脱氧胆酸   细胞因子   表达  

摘要： 目的检测原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者血浆12种细胞因子的表达水平,探讨细胞因子在PBC中的表达及其与PBC患者疾病活动情况和熊脱氧胆酸(UDCA)治疗效果的关联性。方法回顾性横断面研究。选取2021年12月至2023年11月在北京协和医院就诊的127例PBC患者(PBC组)以及同期进行体检的32名健康志愿者作为健康对照组。通过流式细胞术检测其血浆12种细胞因子的表达情况,比较各组间细胞因子表达水平的差异,利用Spearman分析评价细胞因子水平与5种反映PBC疾病活动性实验室检查指标[包括碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBil)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)]的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价细胞因子鉴别UDCA治疗应答与治疗不应答PBC患者的效能。结果PBC组血浆白细胞介素(IL)-8水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),PBC组血浆干扰素(IFN)-γ水平高于健康对照组(P<0.05)。Spearman分析显示,IL-8与ALP、GGT、TBil、AST、TBA均呈正相关(R^(2)=0.348、0.401、0.406、0.495、0.417;P均<0.01),IFN-γ与ALP、GGT及TBA水平呈负相关(R^(2)=-0.265、-0.253、-0.232;P均<0.05)。UDCA治疗不应答PBC患者(n=52)血浆IL-8水平高于UDCA治疗应答PBC患者(n=56)(P<0.05),而IFN-γ水平低于UDCA治疗应答PBC患者(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血浆IL-8与IFN-γ区分UDCA治疗应答与不应答PBC患者的曲线下面积分别为0.631、0.783,敏感度分别为87.5%、90.5%,特异度分别为44.2%、57.9%。结论血浆IL-8与IFN-γ水平与PBC疾病活动情况具有一定的相关性,且可用于反映PBC患者UDCA的治疗效果。

关键词： 骨质疏松症   孟德尔随机化   炎症因子   流行病学   因果关系  

摘要： 目的运用双向孟德尔随机化(mendelian randomization,MR)方法系统评估循环炎症细胞因子与骨质疏松症(osteoporosis,OP)的因果关系。方法从全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)中获取91种炎症细胞因子和OP的遗传相关数据。采用多种双样本MR方法估计因果效应,包括逆方差加权法(inverse-variance weighting,IVW)、MR-Egger回归、加权中位数法和模式法。使用Cochran's Q检验、MR-Egger截距项和MR-PRESSO评估异质性和多效性。结果IVW方法鉴定出5种与OP风险显著相关的细胞因子:CXCL1(OR=1.100,P=0.020)、CXCL11(OR=1.150,P=0.005)、IL-18(OR=1.087,P=0.012)、TNF(OR=1.108,P=0.014)为危险因素,而ARTN(OR=0.895,P=0.015)为保护因素。敏感性分析支持这些因果关联。反向MR表明,OP可能导致FGF21的循环水平降低(β=-0.076,P=0.003)。结论本研究提供遗传学证据,表明CXCL1、CXCL11、IL-18和TNF可能是OP的危险因素,而ARTN可能是一个新的保护因子。此外,OP本身可能通过抑制FGF21分泌而加重骨丢失。这些发现为OP的发病机制和潜在干预靶点提供了新的见解。

关键词： 日本脑炎病毒   NS1蛋白   多克隆抗体   制备   鉴定  

摘要： 乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的,临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白,能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体,是JE诊断和疫苗研发的主要靶标。本研究以基因Ⅰ型JEV的NS1蛋白为靶标,将构建的重组质粒p ET30a-His-NS1转化Rosetta(DE3)表达菌,以0.5 mmol/L IPTG诱导表达。结果显示,与预期蛋白分子量大小一致的重组NS1蛋白以包涵体形式表达。经亲和层析柱纯化获得浓度为2.568 mg/mL的重组His-NS1蛋白。免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,制备的高效价抗NS1蛋白多克隆抗体能够特异性识别蛋白分子量分别为46和55 ku的天然NS1蛋白。此外,本研究首次发现制备的抗NS1蛋白多克隆抗体与JEV预孵育能够剂量依赖性的显著降低JEV感染BHK-21细胞的病毒产量。将抗NS1蛋白多克隆抗体作为免疫沉淀抗体,用于JEV感染PK-15细胞的免疫沉淀质谱分析。结果表明,NS1蛋白能够与囊膜E蛋白相互作用。总之,本研究为深入了解NS1蛋白的生物学功能、JE诊断方法的建立和疫苗研制提供了基础材料。

关键词： 慢性乙型肝炎   miR-340-5p   miR-155-5p   Th1/Th2细胞因子  

摘要： 目的探讨慢性乙型肝炎患者血清微小RNA(miR)-340-5p、miR-155-5p的表达情况及与Th1/Th2细胞因子水平的关系。方法选取2021年10月至2023年10月该院收治的128例慢性乙型肝炎患者作为研究组,另选取同期该院96例体检健康者作为对照组。采用荧光定量PCR(qPCR)法检测两组血清miR-340-5p、miR-155-5p表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清Th1/Th2细胞因子表达水平,Pearson法分析miR-340-5p、miR-155-5p与Th1/Th2细胞因子的关系,Logistic回归分析血清miR-340-5p、miR-155-5p对慢性HPV感染发生的影响。结果与对照组相比,研究组患者血清miR-340-5p、miR-155-5p、IL-4、IL-13水平均降低(P<0.05),IFN-γ和IL-12水平升高(P<0.05);血清miR-340-5p与IFN-γ、IL-12呈负相关(r=-0.315、-0.293,均P<0.05),与IL-4、IL-13呈正相关(r=0.413、0.412,均P<0.05);血清miR-155-5p与IFN-γ、IL-12呈负相关(r=-0.406、-0.375,均P<0.05),与IL-4、IL-13呈正相关(r=0.343、0.407,均P<0.05);血清miR-340-5p(OR=0.735,95%CI:0.590~0.915)和miR-155-5p(OR=0.612,95%CI:0.416~0.900)表达水平升高均是慢性乙型肝炎发生的保护因素,IFN-γ(OR=1.652,95%CI:1.170~2.333)、IL-12(OR=1.063,95%CI:1.012~1.116)水平升高是慢性乙型肝炎的危险因素(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者血清miR-340-5p、miR-155-5p通常呈低表达,二者与Th1细胞因子水平呈负相关,与Th2细胞因子水平呈正相关。

关键词： ERAS ultra-fast-track   Minimally invasive mitral valve surgery   Mitral valve   Mitral valve repair  

摘要： Background. The introduction of transcatheter procedures has focused on patient expectations for treatments with a less invasive approach and faster recovery. The aim of this study was to assess the short- and medium-term results in patients who underwent trans-axillary mitral valve repair with application of the ultra-fast-track protocol. Methods. Data from 431 patients undergoing isolated trans-axillary mitral valve repair or associated with tricuspid valve treatment between January 2018 and December 2023 were prospectively collected. Results. The mean age of the population was 63 ± 11 years and the average EuroSCORE II was 1.21 ± 1%. Mitral valve repair for degenerative mitral regurgitation was performed in 93.3% of cases. In 52 cases (12.6%) concomitant tricuspid valve repair was performed. The 30-day mortality rate was 0.2% (n=1), the postoperative stroke rate was 0.2% (n=1). A total of 351 patients (81.4%) were extubated within 6 h of the procedure;in 218 cases (50.6%) extubation occurred in the operating room, at the end of the surgical treatment. Overall, 70.8% (n=305) of patients left the intensive care unit on the first postoperative day;222 patients (51.6%) were discharged home without the need for any further rehabilitation. Postoperative mitral regurgitation was absent/negligible in 97% of cases (n=418). Survival at 1 year and 5 years was 98.9% and 97.9%, respectively. Conclusions. The trans-axillary approach for mitral valve repair was associated with low rates of in-hospital mortality and postoperative complications. The application of our ultra-fast-track protocol in more than 80% of cases allowed early extubation, short intensive care unit stay and reduced hospitalization with a high rate of patients able to be discharged home with no need of any further period of rehabilitation. The medium-term outcomes support the safety and efficacy profile of the trans-axillary approach. © 2025 Il Pensiero Scientifico Editore.

关键词： 支原体肺炎   难治性   儿童   清热解毒方   纤维支气管镜   用力肺活量   肿瘤坏死因子-α   免疫球蛋白  

摘要： 目的探究清热解毒方联合纤维支气管镜治疗难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)痰热闭肺证患儿的效果及对肺功能、炎性因子和免疫功能的影响。方法选取2024年1月至2024年8月收治的106例RMPP痰热闭肺证患儿,依据不同治疗方案分为观察组(清热解毒方联合纤维支气管镜治疗)和对照组(纤维支气管镜治疗)各53例。2组治疗2周后评估治疗效果和支气管黏膜损伤修复情况,比较2组治疗前、治疗2周后肺功能指标、中医证候积分、炎性因子、免疫功能指标以及不良反应发生情况。结果治疗2周后,观察组愈显率高于对照组(P<0.05),且观察组治疗后支气管黏膜修复效果优于对照组。治疗2周后,2组最大呼气流量、第一秒用力呼气容积、用力肺活量较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。2组治疗2周后咳嗽、发热、咳黄黏痰、气喘积分低于治疗前,且观察组各项积分均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。治疗2周后,2组血清肿瘤坏死因子-α、淀粉样蛋白A/C反应蛋白、白细胞介素-23、γ-干扰素水平较治疗前降低,且观察组较对照组低(P<0.05,P<0.01)。2组治疗2周后CD3+、免疫球蛋白A、CD4+/CD8+、免疫球蛋白G水平高于治疗前,且观察组高于对照组(P<0.05,P<0.01)。2组治疗期间不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论清热解毒方联合纤维支气管镜治疗能抑制RMPP痰热闭肺证患儿体内炎症反应,改善临床症状及免疫功能,增强肺功能,且安全较好。