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关键词： 血小板和淋巴细胞比值   急性缺血性脑卒中   静脉溶栓   出血转化   预后  

摘要： 目的:探讨老年急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血小板和淋巴细胞比值(platelet/lymphocyte ratio,PLR)与重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓后出血转化(hemorrhagic transformation,HT)及近期预后的关系。方法:选取132例老年AIS患者,收集临床资料,行rt-PA静脉溶栓,依据静脉溶栓后是否发生HT分为HT组和非HT组,依据PLR值分为高水平PLR(≥140.29)组和低水平PLR(<140.29)组,并且随访90 d评定神经功能预后。比较HT组和非HT组患者一般资料、实验室指标。Logistic回归分析老年AIS患者rt-PA静脉溶栓后发生HT的影响因素,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析PLR对老年AIS患者rt-PA静脉溶栓后HT的预测价值。比较高水平PLR组和低水平PLR组患者90 d神经功能预后的差异。结果:HT组患者NIHSS评分、发病至溶栓时间、心房颤动史、PLT、PLR均高于非HT组,LYW低于非HT组(均P<0.05)。老年AIS患者rt-PA静脉溶栓后HT的危险因素包括NIHSS评分、发病至溶栓时间、心房颤动及PLR。ROC曲线显示PLR预测老年AIS患者rt-PA静脉溶栓后HT的截断值为147.415,曲线下面积为0.807,灵敏度为76.2%,特异度为82.9%。高水平PLR组患者90 d神经功能预后不良发生率高于低水平PLR组患者(P<0.05)。结论:PLR是老年AIS患者rt-PA静脉溶栓后HT的独立影响因素,对HT有较好的预测价值,并且高水平PLR可能预示其近期神经功能预后不良。

关键词： 局限期小细胞肺癌   淋巴细胞减少   放疗   预后   生存分析   队列研究  

摘要： 背景与目的:尽管放射性淋巴细胞减少与某些恶性肿瘤的不良生存结局相关,但是关于小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的研究证据仍较少。本研究旨在探讨放疗前后淋巴细胞计数是否能预测局限期SCLC(limitedstage SCLC,LS-SCLC)患者的临床预后。方法:本研究为一项单中心回顾性队列研究。回顾性分析2007年1月—2017年12月在复旦大学附属肿瘤医院接受根治性放化疗的LS-SCLC患者。纳入标准包括:⑴经病理学检查确认为SCLC;⑵通过正电子发射计算机体层成像(positron emission tomography and computed tomography,PET/CT)、脑增强磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)诊断为局限期[美国癌症联合会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)第8版TNM分期M0];⑶接受了根治性放化疗;⑷具有放疗前、放疗期间及放疗后1个月的血常规数据;⑸可获得完整的生存、复发及末次随访信息。排除标准包括:⑴基线远处转移(AJCC第8版TNM分期M1,包括任何远处淋巴结、器官或骨髓转移);⑵放疗剂量小于50 Gy[以等效生物剂量2 Gy/次计算,即生物有效剂量(biological effective dose,BED)<40 Gy];⑶放疗前、放疗期间及放疗后的数据不完整;⑷无法获知生存、复发状态或末次随访记录不完整。本研究获得复旦大学附属肿瘤医院伦理委员会的批准(伦理编号:2303271-15),并豁免了患者的知情同意。采集的临床数据包括患者年龄、性别、美国东部肿瘤协作组体能状态(Eastern Cooperative Oncology Group performance status,ECOG PS)评分、吸烟史、肿瘤TNM分期、化疗方案与周期、放疗剂量与分割方式、是否同步放化疗、是否接受预防性颅脑照射(prophylactic cranial irradiation,PCI);实验室检查数据包括LS-SCLC患者在放疗前、放疗期间及放疗后1个月的淋巴细胞计数,根据不良事件通用术语标准(Common Terminology Criteria for Adverse Events,CTCAE)4.0版对淋巴细胞减少进行分级。使用Kaplan-Meier方法估计无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS),并用log-rank检验进行比较。结果:共纳入170例患者。患者的中位年龄为57岁,男性占77.6%。中位放疗剂量为60 Gy(范围:45~66 Gy)。整组人群的中位PFS为22.0个月,5年PFS率为31.3%,10年PFS率19.8%;中位OS为38.0个月,5年OS率为37.5%,10年OS率24.2%。放疗前,有14例(8.2%)患者出现1~2级淋巴细胞减少;在放疗期间,出现1、2、3、4级淋巴细胞减少的患者分别为7例(4.1%)、22例(12.9%)、111例(65.3%)、24例(14.1%);在放疗后1个月,1级、2级、3级、4级淋巴细胞减少的患者分别有36例(21.2%)、36例(21.2%)、11例(6.5%)、1例(0.6%)。无论放疗前、中、后,各级淋巴细胞减少患者之间的PFS和OS均无显著差异。结论:在免疫治疗前,放疗引起的淋巴细胞减少似乎不影响LSSCLC患者的预后。

关键词： FeNO   Periostin   IL-4   ECP   Acute exacerbation of bronchial asthma   Lung function   Diagnostic value  

摘要：

关键词： 缝隙连接蛋白43   多肽免疫   单克隆抗体   双抗体夹心ELISA法  

摘要： 目的 筛选针对人缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)不同结合位点的单克隆抗体,并建立Cx43蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法,以期应用于全长及截短Cx43蛋白结构、功能及其亚细胞定位的深入研究。方法 采用生物信息学方法分析人Cx43蛋白序列,设计并合成针对不同结构域的多肽片段,偶联血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为免疫原免疫15只雌性BALB/c小鼠。通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,筛选能够稳定分泌抗Cx43蛋白单克隆抗体的细胞株。采用Protein G亲和层析纯化抗体,并鉴定其亚型、亲和力及特异性。以2株高亲和力单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体(用HRP标记),建立双抗体夹心ELISA检测方法,并优化方法的封闭液(5%牛奶-PBS、3%BSA-PBS)、清洗液[0.01 mol/L PBS(pH 7.2)、0.01 mol/L PBS-0.5%Tween 20(pH 7.2)(即PBST)]、样品稀释液[3%BSA-PBS及0.01 mol/L PBS(pH 7.2)],验证方法的线性范围及灵敏度、专属性、精密度、准确度。采用建立的方法检测小鼠脑组织、肠组织、股骨组织、MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞裂解液中的Cx43蛋白含量。结果 共筛选获得3株稳定分泌抗Cx43单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-1E2、2-1G11和3-2G12,抗体亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2b,抗体灵敏度均达0.002μg/mL,其中2-1G11和3-2G12高亲和力更高。以2-1G11为捕获抗体、HRP标记的3-2G12为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA法。最佳封闭液为3%BSA-PBS,清洗液为PBST,样品稀释液为0.01 mol/L PBS(pH 7.2)。Cx43蛋白标准品浓度在3.12~200 ng/mL范围内,与A450均值呈良好的线性关系,R^(2)> 0.98;该方法可特异性检出Cx43蛋白,与KLH蛋白、重组人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及重组人谷氨酰胺转氨酶2(transglutaminase 2,TGM2)均无交叉反应;精密度验证CV为7.72%;高、中、低3个浓度供试品的回收率均在85%~115%范围内。MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞中Cx43蛋白含量较高(58.03 ng/mL),小鼠成骨组织中Cx43蛋白含量较低(38.4 ng/mL)。结论 成功制备了针对人Cx43不同结合位点的特异性单克隆抗体,并建立了灵敏度高、特异性强的双抗体夹心ELISA定量检测方法,为Cx43蛋白的结构与功能研究提供了可靠的检测方法。

关键词： 白花蛇舌草   肾癌   TGF-β/Smad信号通路   Th1/Th2  

摘要： 目的:探究白花蛇舌草提取物调控TGF-β/Smad信号转导通路影响肾癌细胞增殖、侵袭及肾癌小鼠Th1/Th2细胞因子表达的机制。方法:以小鼠肾癌Renca细胞为研究对象,用白花蛇舌草提取物干预后,在细胞水平采用划痕实验检测其对小鼠肾癌细胞迁移能力的影响;CCK-8实验观察白花蛇舌草提取物对小鼠肾癌细胞增殖能力的作用。采用右侧腋下皮下处接种方法建立小鼠肾癌模型,研究白花蛇舌草提取物在小鼠体内对肾细胞癌增殖和侵袭作用的影响。HE染色观测小鼠移植瘤块组织形态;Western blot检测小鼠移植瘤组织TGF-β/Smad通路蛋白TGF-β、Smad2和p-Smad2表达;ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-10水平,研究白花蛇舌草提取物对Th1/Th2肾癌免疫偏移是否有抑制作用。结果:CCK-8实验结果表明:白花蛇舌草提取物抑制了小鼠肾癌Renca细胞的增殖能力(P<0.05);划痕实验结果表明:白花蛇舌草提取物有效抑制了小鼠肾癌Renca细胞的愈合能力(P<0.05);通过构建小鼠肾癌模型发现白花蛇舌草提取物可抑制小鼠移植瘤体积的增长(P<0.05);HE染色显示:模型组瘤细胞致密、核大分裂相多、坏死少,白花蛇舌草组和通路抑制剂组癌细胞坏死增多,核固缩或溶解;Western blot结果表明:与模型组相比,白花蛇舌草提取物组和通路抑制剂组TGF-β、p-Smad2表达降低(P<0.001);ELISA结果显示:与模型组比较,白花蛇舌草提取物组和通路抑制剂组血清IL-2表达升高(P<0.0001)。白花蛇舌草提取物组IL-10表达降低(P<0.05),通路抑制剂组IL-10表达降低(P>0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可能通过抑制TGF-β/Smads信号通路蛋白表达,进一步调控Th1/Th2细胞因子的分泌,从而抑制小鼠肾癌细胞体内外的增殖和迁移。

关键词： 糖类抗原125   原发性肝癌   经动脉化疗栓塞术   疗效   预后  

摘要： 目的:探讨血清糖类抗原125(CA125)水平与经动脉化疗栓塞术(TACE)治疗原发性肝癌(HCC)患者的疗效和预后的关系。方法:选取2020年1月—2022年6月于信阳市中心医院接受TACE治疗的86例HCC患者作为研究对象,根据术前血清CA125水平情况将其分为低CA125组和高CA125组,每组各43例。术后1个月复查血清CA125水平,并经影像学检查评估手术疗效;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算曲线下面积(AUC),分析血清CA125水平,评估TACE有效性的预测价值;术后随访18个月,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析血清CA125水平与预后的关系。结果:两组患者血清CA125水平、肿瘤大小、有远处转移情况比较,差异均有统计学意义(t=7.990、-2.052,P<0.05;χ^(2)=4.440,P<0.05)。HCC患者术后血清CA125整体水平及有效患者血清CA125水平低于术前,差异均有统计学意义(z=-3.041、-3.271,P<0.05)。血清CA125水平评估HCC患者有效性的AUC为0.728(95%CI:0.551~0.906),敏感性为0.727,特异性为0.707。随访18个月后,高CA125组患者生存时间低于低CA125组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血清CA125水平可以作为预测TACE治疗HCC患者的疗效及预后的指标,为患者的个体化治疗提供依据。

关键词： 白细胞介素-3   小胶质细胞   极化   脊髓损伤  

摘要： 目的 观察白细胞介素(IL)-3在脊髓损伤(SCI)中的作用,并探讨其机制。方法 选取6~8周SD大鼠48只,随机分为Sham组、SCI组、IL-3组,比较3组大鼠行为学、大鼠脊髓组织缺损面积,并采取蛋白质印迹法(WB)及实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)分析3组大鼠脊髓组织细胞凋亡情况。为进一步探讨IL-3作用机制,采取qPCR检测小胶质细胞极化指标(M1型:iNOS;M2型:Arg-1)及炎症因子表达水平,分析小胶质细胞极化情况。结果 IL-3组建模后第7、14、21、28天BBB评分及最大倾斜角均高于SCI组(P<0.01),且IL-3组大鼠脊髓空洞面积小于SCI组(P<0.01),IL-3干预抑制了脊髓打击造成细胞凋亡(P<0.05)。IL-3组iNOS蛋白及转录水平均低于SCI组(P<0.01),Arg-1蛋白及转录水平高于SCI组(P<0.01),且促炎因子表达水平更低(P<0.01)。结论 IL-3促进SCI大鼠功能恢复,具有神经元保护效应,且其机制可能与促进大鼠小胶质细胞M2极化缓解炎症反应有关。

关键词： 高级别鳞状上皮内病变   宫颈癌   细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A   B淋巴细胞诱导的成熟蛋白1  

摘要： 目的探讨宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组织中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)和B淋巴细胞诱导的成熟蛋白1(Blimp-1)表达及与病情进展的关系。方法选取2019年1月至2022年1月山西省儿童医院收治的接受宫颈锥切术治疗的815例HSIL患者,根据术后病理结果将患者分为进展组和非进展组。取手术切除的宫颈组织,检测CDKN2A mRNA、Blimp-1 mRNA表达。采用Pearson方法分析CDKN2A mRNA与Blimp-1 mRNA的相关性。多因素Logistic回归分析HSIL病情进展的危险因素。受试者工作特征曲线分析CDKN2A mRNA、Blimp-1 mRNA诊断HSIL病情进展的价值。结果815例HSIL患者中97例(11.9%)在术后病理证实进展为宫颈癌,为进展组,其余718例(88.1%)为非进展组。进展组宫颈组织CDKN2A mRNA表达水平低于非进展组[(0.53±0.13)比(1.43±0.27)],Blimp-1 mRNA表达水平高于非进展组[(2.65±0.71)比(1.27±0.24)],差异均有统计学意义(均P<0.001)。宫颈组织CDKN2A mRNA表达与Blimp-1 mRNA表达呈负相关(r=-0.650,P<0.05)。人乳头瘤病毒16/18感染、宫颈上皮内瘤变3级、高表达Blimp-1 mRNA是HSIL病情进展为宫颈癌的危险因素(均P<0.05),高表达CDKN2A mRNA是保护因素(P<0.05)。CDKN2A mRNA、Blimp-1 mRNA诊断HSIL病情进展的曲线下面积分别为0.777、0.759,联合诊断曲线下面积为0.920,高于单独诊断(均P<0.05)。结论宫颈组织中CDKN2A mRNA低表达和Blimp-1 mRNA高表达是HSIL进展为宫颈癌的危险因素,联合CDKN2A mRNA、Blimp-1 mRNA可预测HSIL病情进展的风险。

关键词： 宫颈癌   白细胞介素-6   丙酮酸激酶M2型   同步放化疗   预后  

摘要： 目的探讨血清白细胞介素-6(IL-6)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)在宫颈癌患者中的表达及其与临床预后的相关性。方法回顾性收集2019年6月至2021年5月新乡医学院第一附属医院接受同步放化疗的112例宫颈癌患者资料,根据随访3 a生存情况分为预后不良组(31例)和预后良好组(81例)。比较两组治疗前血清IL-6、PKM2表达及其他资料,分析治疗前血清IL-6、PKM2表达与临床预后的相关性。结果预后不良组国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ期占比及鳞状细胞癌抗原(SCCA)、IL-6、PKM2表达高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。经Cox回归模型分析,结果显示,FIGO分期为Ⅲ期及SCCA、IL-6、PKM2高表达为宫颈癌患者临床预后不良的危险因素(HR>1,P<0.05)。经限制性立方样条法分析,宫颈癌患者治疗前血清IL-6、PKM2表达与临床预后不良风险呈线性剂量反应关系(P<0.05)。结论宫颈癌患者治疗前血清IL-6、PKM2表达与临床预后有关。