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关键词： 感染后咳嗽   气道炎症   小儿久咳合剂   磷酸酯酶修饰因子   白细胞介素-13   大鼠  

摘要： 目的:研究小儿久咳合剂调节感染后咳嗽大鼠SUMF1/SUMF2平衡的效果及其对IL-13分泌水平的调控作用。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(10只)、中药组(10只)及西药组(10只)。通过烟熏暴露、LPS鼻腔滴注联合辣椒素雾化刺激,构建大鼠感染后咳嗽(PIC)模型。中药组灌服1.80 g/mL小儿久咳合剂溶液,西药组予0.08 mg/mL孟鲁司特纳水溶液灌胃,空白组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。通过Masson、PAS及HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中总IgE、特异性IgE及IL-13水平;Western blotting及PCR技术检测肺组织中SUMF1、SUMF2及IL-13的表达。结果:病理切片显示,模型组大鼠出现显著的气管上皮鳞状化生、密集的炎症细胞浸润和肺间质扩张,与空白组形成鲜明对比。肺组织中SUMF1、SUMF1/SUMF2比值及IL-13表达显著升高(P<0.01),而SUMF2表达显著降低(P<0.01),中性粒细胞和巨噬细胞密度显著升高(P<0.01)。血清及BALF中总IgE、特异性IgE及IL-13表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠肺组织炎症细胞浸润及气管上皮损伤显著减轻,SUMF1、SUMF1/SUMF2比值及IL-13表达显著降低(P<0.01),而SUMF2表达显著升高(P<0.01),炎症细胞密度显著降低(P<0.01)。血清及BALF中总IgE、特异性Ig E及IL-13表达亦显著降低(P<0.01)。结论:小儿久咳合剂可通过恢复SUMF1/SUMF2平衡、抑制IL-13的活性和分泌,减轻气道炎症,是其发挥治疗效应的可能机制。

关键词： 川崎病   营养预后指数   静脉免疫球蛋白   耐药性   预测价值  

摘要： 目的:探讨治疗前营养预后指数(prognostic nutritional index,PNI)对川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)耐药性的预测价值。方法:回顾性分析2020年1月至2024年12月在湖南省儿童医院收治的1 323例KD患儿。根据PNI四分位数将患儿分组,比较各组临床特征。采用Logistic回归分析评估PNI与IVIG耐药的关联性,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估PNI的预测效能,并与Kobayashi、Egami评分系统进行比较。采用决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评估临床净获益,通过亚组分析验证结果稳健性。结果:1 323例KD患儿中,202例(15.3%)发生IVIG耐药。随PNI值增加,IVIG耐药率从25.7%降至5.5%(P<0.001)。多因素分析显示PNI是IVIG耐药的独立预测因子(OR=0.92,95%CI:0.89~0.95,P<0.001)。ROC曲线分析显示PNI的曲线下面积(AUC)为0.764(95%CI:0.740~0.786),最佳截断值为52.2,敏感度72.8%,特异度66.7%,阳性预测值29.7%,阴性预测值92.6%。PNI的预测效能与Kobayashi评分(AUC=0.728)和Egami评分(AUC=0.742)相当。DCA显示在阈值概率5%~35%范围内,PNI模型具有临床净获益。亚组分析证实PNI在不同风险分层患儿中均保持显著预测效能,且相对于传统评分系统具有增量预测价值。结论:预治疗PNI是KD患儿IVIG耐药的独立预测因子,PNI值低于52.2的患儿IVIG耐药风险显著增加。PNI作为一项简便易行的临床指标,具有良好的阴性预测价值,可为早期识别IVIG耐药高风险患儿提供参考。

关键词： 禽网状内皮组织增生症病毒   囊膜蛋白gp90   原核表达   杂交瘤细胞   单克隆抗体  

摘要： 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。

关键词： 黑色素瘤   帕比司他   MHC   肿瘤免疫性  

摘要： 目的:探究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂帕比司他对黑色素瘤生长和免疫性的影响及其机制。方法:常规培养黑色素瘤细胞B16F0,用不同浓度的帕比司他处理细胞,WB法检测帕比司他对B16F0细胞中HDAC表达的影响,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测帕比司他对B16F0细胞增殖、迁移和侵袭能力,以及细胞凋亡和周期的影响。转录组学检测帕比司他对B16F0细胞基因表达的影响,用qPCR法加以验证。流式细胞术检测帕比司他对B16F0细胞表面MHCⅠ/Ⅱ类分子表达的影响,B16F0与骨髓来源树突状细胞(BMDC)共培养检测帕比司他对BMDC细胞表达CD11c、CD80和CD86的影响,B16F0细胞移植瘤实验检测帕比司他对移植瘤生长和裸鼠免疫功能的影响。结果:帕比司他促进B16F0细胞中组蛋白3(H3)和α-微管蛋白(α-TUB)蛋白乙酰化(P<0.01或P<0.001或P<0.0001),抑制B16F0细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期(P<0.05或P<0.001或P<0.0001),促进B16F0细胞表面表达MHCⅠ/Ⅱ类分子表达并促进共培养BMDC成熟(均P<0.01)。转录组学检测结果显示,帕比司他促进B16F0细胞中E-cadherin和抗原提呈相关基因的表达,抑制Ncadherin、vimentin、c-Myc和CDK1的表达,qPCR法验证了这些结果。帕比司他抑制裸鼠移植瘤的生长并增强荷瘤裸鼠的免疫功能(P<0.05,P<0.0001)。结论:帕比司他可抑制B16F0细胞的恶性生物学行为,促进其凋亡,调控其免疫性,增强荷瘤裸鼠的免疫功能。

关键词： 持续冲洗   负压封闭引流   开放性骨折   创面修复   创面感染  

摘要： 目的探讨持续冲洗联合负压封闭引流(VSD)治疗对开放性骨折患者创面修复和感染发生率的影响。方法选取2021年11月至2024年2月南京医科大学第一附属医院骨科诊治的开放性骨折患者80例,根据随机数表法分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组彻底清创后予以单纯VSD治疗,观察组在对照组基础上联合持续冲洗。随访3个月时评估两组临床疗效,比较两组创面修复情况(创面完全愈合时间和温哥华瘢痕量表评分)、随访期间感染发生情况(感染发生率、感染发生时间和感染持续时间)及炎症水平(C反应蛋白、白细胞介素6、红细胞沉降率),并记录两组其他不良反应情况。结果观察组总有效率高于对照组(95.00%vs 77.50%,P<0.05)。观察组创面完全愈合时间、温哥华瘢痕量表评分低于对照组[(67.84±8.89)d vs(82.96±11.64)d,P<0.05;(5.21±1.56)分vs(7.23±2.51)分,P<0.05]。观察组感染发生率、感染发生时间和感染持续时间低于对照组[7.50%vs 25.00%,P<0.05;(9.16±2.81)d vs(12.15±3.47)d,P<0.05;(12.61±2.89)d vs(18.42±3.57)d,P<0.05]。两组治疗后C反应蛋白、白细胞介素6和红细胞沉降率均随时间推移下降,且观察组各时间点低于对照组(P<0.05)。两组发热、创面出血、引流管堵塞、瘢痕增生、膜下积液等不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在VSD治疗基础上联合持续冲洗治疗开放性骨折疗效确切,可显著缩短创面修复时间,提高创面修复质量,降低创面感染发生率。

关键词： avian influenza virus   polymerase basic 2   mitochondrial antiviral signaling protein   duck   type I interferon  

摘要： TypeⅠinterferon(IFN)-mediated innate immune responses represent the first line of host defense against viral ***,the molecular mechanisms by which avian infuenza virus(AIV)inhibits typeⅠIFN production in ducks are not well ***,we frst found that the polymerase basic 2(PB2)protein of H5N1 subtype AIV inhibited the typeⅠIFN responses by targeting duck mitochondrial antiviral signaling protein(MAVS).We further demonstrated that H5N1-PB2 bound to theΔtransmembrane(ΔTM)domain of duck MAVS,and the polymerase basic 1(PB1)binding domain(PBD)and RNA binding nuclear import domain(RND)of H5N1-PB2 interacted with MAVS to inhibit typeⅠIFN expression in ***,our fndings contribute to understanding the molecular mechanism by which AIV proteins regulate the retinoic acid-inducible geneⅠ(RIG-Ⅰ)-like receptor(RLR)signaling pathway to evade host antiviral immune responses in ducks.

关键词： 四物汤   辐射   免疫损伤   PI3k-Akt-mTOR   Sirt1   淋巴细胞  

摘要： 目的探讨四物汤(Siwu decoction,SWD)对^(60)Coγ射线辐射所致小鼠免疫损伤的防护作用及机制。方法将C57BL/6J小鼠随机分为6组:对照组(Control)、模型组(Model)、四物汤低剂量组(SWD-L)、四物汤中剂量组(SWD-M)、四物汤高剂量组(SWD-H)、阳性药白藜芦醇组(resveratrol,Res),于辐照前11 d及辐照后继续给药,单次全身照射4 Gy,照射后3 d检测各指标。检测外周血象及脏器指数变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子(TNF)-α以及免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM,补体蛋白3(C3)、C4的含量。流式细胞术检测小鼠脾脏B淋巴细胞、T淋巴细胞、NK细胞以及胸腺中T淋巴细胞;苏木精-伊红(HE)染色显示脾脏、胸腺病理损伤变化。免疫荧光染色检测辐射后脾脏组织Sirt1蛋白表达,Western blot实验检测脾脏中Sirt1,PI3K,Akt,p-Akt,mTOR蛋白含量变化。结果SWD能明显提高LYMPH%,减轻脾脏和胸腺病理损伤,流式细胞术实验结果表明,SWD能明显提高脾脏中CD19^(+)B淋巴细胞百分比,降低NK淋巴细胞百分比以及脾脏和胸腺中CD4^(+)/CD8^(+)比值。ELISA结果显示,SWD明显降低IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β、TNF-α的含量,以及增强抗炎因子IL-4、IL-10的含量。同时,SWD显著抑制辐射引起的IgA、IgG、IgM,C3、C4的升高。免疫荧光染色和Western blot实验结果表明,SWD能够降低PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白表达,增强Sirt1蛋白表达。结论SWD对^(60)Coγ射线辐射所致小鼠免疫损伤具有明显的预防作用,其机制可能与Sirt1-PI3k-Akt-mTOR有关。

关键词： 猪瘟病毒(CSFV)   单克隆抗体   单个B细胞抗体技术   E^(rns)蛋白  

摘要： 研制猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)结构蛋白单克隆抗体(简称“单抗”),对研究E^(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗,用CSFV E^(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠,通过流式分选技术分选特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞,利用巢式聚合酶链式反应(PCR)扩增IgG抗体重链和轻链可变区基因,分别构建IgG抗体重链和轻链完整基因重组质粒,然后将重链和轻链重组质粒共转染至人胚胎肾细胞(HEK-293T)中进行单抗表达、纯化,并对单抗进行蛋白免疫印记(WB)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)鉴定。流式分选结果显示,本试验分选得到48个特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞。PCR扩增结果显示,从48个B细胞中扩增得到16对配对的IgG抗体重链和轻链可变区基因。WB、间接ELISA和IFA结果显示,本试验成功制备得到13株能与CSFV发生反应的E^(rns)单抗,其中1株(E0M11)仅与CSFV疫苗毒株(HCLV株、Thiverval株)反应,不与CSFV流行毒株(IVDC-HeB-01、IVDC-HuB-06)和牛流行性腹泻病毒(BVDV)反应。结果表明,本试验建立了快速筛选CSFV单抗的技术平台,制备的单抗有望用于CSFV鉴别诊断方法的建立,具有一定的临床应用价值。

关键词： 原发性免疫性血小板减少症   慢性化   儿童   出血症状评分   外周血淋巴细胞亚群   体液免疫  

摘要： 目的探讨儿童原发性免疫性血小板减少症(ITP)慢性化的危险因素,为儿童慢性ITP(cITP)的早发现及干预提供依据。方法回顾性分析2019年1月至2022年3月收住于蚌埠医科大学第一附属医院儿科血液肿瘤组确诊并随访12个月以上的214例ITP患儿的临床资料。将患儿按照发病年龄分为≤10岁组(188例)与>10岁组(26例)。根据ITP患儿是否转化为cITP将其分为非慢性ITP组(181例)与cITP组(33例)。根据患儿年龄将其分为≤1岁组(52例)、1~≤3岁组(54例)、3~≤6岁组(63例)、6~≤10岁组(19例)、>10岁组(26例)。通过单因素和多因素Logistic回归分析影响ITP患儿慢性化的危险因素。结果在214例ITP患儿中,cITP为33例(15.42%),非慢性ITP为181例(84.58%)。非慢性ITP组与cITP组患儿年龄、前驱诱因、起病情况的分布比较,差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为65.704、3.906、116.626,P<0.05)。ITP患儿出血症状评分与血小板计数之间呈明显负相关(r=-0.261,P=0.001)。非慢性ITP组与cITP组患儿的绝对淋巴细胞计数(ALC)、血小板计数比较,差异均有统计学意义(Z值分别为-6.134、-3.220,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:年龄>10岁、隐匿起病是患儿发生cITP的危险因素(OR值分别为6.533、57.978,P<0.05),高水平ALC是患儿发生cITP的保护因素(OR=0.406,P<0.05)。结论年龄>10岁、隐匿起病、ALC低均是cITP患儿的危险因素。

关键词： 抑郁症   重度   成人   甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇   白细胞介素-17C   C-C基序趋化因子-26   临床症状   自杀意念  

摘要： 目的探讨血清甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇(triglyceride to high-density lipoprotein cholesterol,TG/HDL-C)比值、白细胞介素-17C(interleukin-17C,IL-17C)及C-C基序趋化因子-26(C-C motif chemokine-26,CCL-26)与重度抑郁症患者临床症状及自杀意念的关系。方法前瞻性选取2021年1月至2024年12月菏泽市第三人民医院收治的重度抑郁症患者186例(重度抑郁症组),其中男66例,女120例,年龄19~68(36.5±11.9)岁。另选取同期性别、年龄匹配的体检健康且精神心理健康志愿者93例(对照组),其中男38名,女55名,年龄19~65(35.6±9.5)岁。根据是否有自杀意念将重度抑郁症患者分为自杀意念组(80例)和非自杀意念组(106例)。检测全体受试者血清TG/HDL-C比值、IL-17C、CCL-26水平,计算临床症状评分[汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Rating Scale,HAMD_(17))、汉密尔顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Rating Scale,HAMA)、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)]。通过Spearman秩相关分析重度抑郁症患者血清TG/HDL-C比值、IL-17C、CCL-26水平与临床症状评分的相关性,广义加性模型回归分析重度抑郁症患者血清TG/HDL-C比值、IL-17C、CCL-26水平与临床症状评分的非线性相关性,应用多因素非条件Logistic回归分析重度抑郁症患者自杀意念的影响因素。构建重度抑郁症患者自杀意念的列线图预测模型,用H-L检验模型拟合优度,受试者工作特征曲线计算曲线下面积(area under the curve,AUC)评价其预测能力,C指数评价区分其能力,校准曲线评价其一致性,决策曲线评价其临床适用性。结果与对照组比较,重度抑郁症组血清TG/HDL-C比值、IL-17C水平和HAMD_(17)评分、HAMA-14评分、PSQI评分升高,CCL-26水平降低(P<0.001)。重度抑郁症患者血清TG/HDL-C比值、IL-17C水平与HAMD_(17)评分、HAMA评分、PSQI评分呈正相关(r_(s)=0.74、0.74、0.75、0.78、0.78、0.79,均P<0.001),CCL-26水平与HAMD_(17)评分、HAMA评分、PSQI评分呈负相关(r_(s)=-0.62、-0.63、-0.65,均P<0.001)。重度抑郁症患者血清TG/HDL-C比值、IL-17C、CCL-26水平与HAMD_(17)评分、HAMA评分、PSQI评分存在非线性关系(P<0.001)。186例重度抑郁症患者自杀意念发生率为43.01%(80/186)。自杀未遂史、HAMD_(17)评分增加、HAMA评分增加、PSQI评分增加、TG/HDL-C比值升高、IL-17C升高为重度抑郁症患者自杀意念的独立危险因素[OR(95%CI)分别为10.89(2.27~52.25)、1.81(1.19~2.74)、1.23(1.08~1.40)、1.53(1.15~2.02)、6.64(2.71~16.24)、1.46(1.18~1.81)],CCL-26升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.22(0.11~0.43)]。根据上述影响重度抑郁症患者自杀意念的独立因素构建重度抑郁症患者自杀意念的列线图预测模型,其预测重度抑郁症患者自杀意念的AUC为0.93(95%CI:0.88~0.96),C指数为0.93(95%CI:0.92~0.93),决策曲线显示预测概率与理想曲线贴合,决策曲线显示阈值概率>0.10时,临床净获益>0。结论重度抑郁症患者血清TG/HDL-C比值和IL-17C水平升高、CCL-26水平降低,与抑郁、焦虑和睡眠障碍及自杀意念有关;基于血清TG/HDL-C比值、IL-17C及CCL-26水平构建的列线图预测模型对自杀意念具有较高预测价值。