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关键词： 老年冠心病   慢性心力衰竭   贝那普利   曲美他嗪   炎性细胞因子   心功能  

摘要： 探讨对于冠心病同时伴慢性心力衰竭(CHF)老年病例,在进行进治疗上,选择贝那普利、曲美他嗪联合下作用效果。方法 84例研究对象入组,分成两组(各42例)进行对比。在对患者的治疗上,入院之后都是做基础性的干预,对于对照组药用方式,主要是予以贝那普利口服,观察组则同时为贝那普利及曲美他嗪一同服用。在服药3个月后进行疗效的比较,且就干预前后患者在炎性细胞因子、心功能的指标变化差异评价。结果 疾病治疗效果上,相比对照组,观察组更高的治疗有效率(P<0.05);经治疗后1个月、3个月的IL-6、TNF-α、NT-proBNP指标,观察组比对照组低,而观察组在经治疗后的LVEF要比对照组高,指标的差异显著(P<0.05)。结论 冠心病伴CHF的治疗,联合应用贝那普利、曲美他嗪,这一干预方案作用效果突出,有利于提升疗效,缓解炎症并对心功能提升效果突出。

关键词： Th1细胞   Th2细胞   术后腹腔粘连   清肠合剂   炎症反应  

摘要： 目的探讨清肠合剂改善大鼠术后腹腔粘连的效果及其可能的作用机制。方法75只SD大鼠随机分为5组:空白组、假手术组、模型组、清肠合剂组及透明质酸钠组。除空白组和假手术组外,其余3组采用盲肠刮擦法建立腹腔粘连大鼠模型;透明质酸钠组用2 mL透明质酸钠凝胶均匀涂抹受损的腹壁及盲肠后关腹。清肠合剂组造模成功后每日予2 mL清肠合剂(14.58 g/kg)灌胃1次,其余4组予等体积生理盐水灌胃。每组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,采用Nair’s评分评估腹腔粘连情况,并收集术后7 d粘连组织或正常腹膜组织,应用荧光定量PCR法检测白细胞介素(IL)-4、信号转导和转录激活因子6(STAT-6)及干扰素-γ(IFN-γ)的mRNA表达水平;Western blot检测IL-4、IL-10、STAT-6及IFN-γ的蛋白表达情况;苏木精-伊红染色后光镜下观察各组粘连组织病理变化,评估炎症和纤维形成情况。结果与空白组和假手术组相比,模型组粘连组织中IL-4、STAT-6的mRNA和蛋白表达水平以及IL-10的蛋白表达水平下降,IFN-γ的mRNA和蛋白表达水平、炎症评分及纤维评分均升高(P<0.05)。与模型组相比,清肠合剂组和透明质酸钠组的IL-4和STAT-6的mRNA和蛋白表达水平以及IL-10蛋白表达水平均升高;Nair’s评分、炎症评分、纤维评分以及IFN-γ的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论清肠合剂可以抑制术后腹腔粘连的形成,其机制可能与调控辅助性T细胞1、辅助性T细胞2相关的细胞因子,降低炎症反应水平有关。

关键词： 核因子-κB   基质金属蛋白酶抑制因子-1   白细胞介素-8   儿童   幽门螺杆菌   胃炎  

摘要： 目的分析血清核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、白细胞介素-8(IL-8)与儿童幽门螺杆菌(***)感染相关性胃炎的关系。方法选取2021年7月至2023年7月就诊的60例***感染相关性胃炎患儿设为观察组,另选取同期体检中心的60例健康体检儿童设为健康组,检测、比较2组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,比较观察组患者不同炎性活动度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,比较观察组患者治疗前后血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平,绘制受试者工作曲线(ROC),分析血清NF-κB、TIMP-1、IL-8对***感染相关性胃炎的诊断效能。结果观察组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于健康组(P<0.05)。重度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平均高于轻度组(P<0.05)。治疗后血清NF-κB、TIMP-1、IL-8水平低于治疗前(P<0.05)。血清NF-κB、TIMP-1、IL-8联合检测诊断***感染相关性胃炎的AUC是0.904,95%CI可信区间是0.856~0.951,联合检测的灵敏度(94.82%)、特异度(90.13%)均高于单一检测(73.82%、71.62%)、(72.26%、68.18%)、(70.18%、64.74%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论***感染相关性胃炎患儿血清NF-κB、TIMP-1、IL-8呈异常高表达,血清NF-κB、TIMP-1、IL-8表达量与炎性活动度及疗效存在密切联系,联合检测可提高对***感染相关性胃炎的诊断效能,值得借鉴。

关键词： A型肉毒神经毒素   杂交瘤   单克隆抗体   酶联免疫吸附测定  

摘要： 目的筛选高亲和力的抗A型肉毒神经毒素单克隆抗体,建立A型肉毒神经毒素快速检测方法。方法以A型肉毒神经毒素类毒素为免疫原免疫小鼠获得单克隆抗体,对所得单克隆抗体进行效价检测、类和亚类鉴定以及特异性相关检测。利用交叉搭配试验筛选最佳标记抗体,并确定兔多抗的包被浓度和标记抗体的稀释倍数,建立夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对该法的专属性、精密度、准确度和线性进行初步研究。结果本研究共获得6株单克隆抗体,9C_(2)和3F6的效价最高;5D3、9C_(2)、1B5和6D6均为IgG1类抗体且显示A型特异性;9C_(2)、1B5和7G11对A型肉毒神经毒素的型特异阻断能力强。以5μg/mL兔多抗为包被抗体、1∶2000稀释的9C_(2)为酶标二抗建立方法,A型肉毒神经毒素蛋白浓度在6~100 ng/mL范围内呈现线性关系(R=0.995),重复性CV值为4.4%;中间精密度CV值为2.6%;回收率均在85%~118%之间。结论初步建立了快速检测A型肉毒神经毒素的夹心ELISA方法。

关键词： 子痫前期   中性粒细胞/淋巴细胞   妊娠中期   疾病预测  

摘要： 目的探究妊娠中期中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)在轻度子痫前期、重度子痫前期及健康孕妇之间的差异关系,以及NLR在子痫前期筛查中潜在的预测价值。方法选取了2018年1月1日至2021年1月30日在济宁医学院附属医院就诊的所有孕妇1115例,其中轻度子痫前期395例,重度子痫前期339例,正常妊娠孕妇381例。同时,收集患者年龄、BMI、外周血NLR、收缩压及舒张压等资料,探究子痫前期与NLR的关系。结果轻/重度子痫前期组外周血中NLR数值均高于正常妊娠组,并且重度子痫前期组NLR高于轻度子痫前期组(P<0.001),在调整BMI、年龄、血压等变量因素后,发现NLR仍是子痫前期的独立危险因素(OR=2.814,95%CI=2.130~3.717)。结论妊娠中期外周血的NLR增高是子痫前期的独立危险因素。因此,NLR对子痫前期的发生可能具有预测作用。

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV)   p30蛋白   生物信息学分析   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 【目的】目前国内流行的变异非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)表现出毒力低,传染性强,隐蔽性强的特点,非洲猪瘟(African swine fever,ASF)临床表现不明显,早期诊断难度大,快速灵敏的早期诊断试剂盒对于非洲猪瘟防控至关重要,而p30的研究及其多克隆抗体的制备可以为早期诊断试剂盒的开发提供重要的理论依据。【方法】根据中国农业科学院哈尔滨兽医研究所分离的非洲猪瘟毒株Pig/Heilongjiang/HRB1/2020(GenBank:MW656282)提供的p30的氨基酸序列,利用生物信息学软件对该序列的理化性质,亲/疏水性,跨膜区,信号肽及二三级结构进行分析预测,由生物公司优化密码子并合成重组质粒pET-28a-p30。将p30克隆到pET-32a(+)原核表达载体中,将其转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,对异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导温度及诱导时间进行优化,用纯化所得的p30蛋白对小鼠进行3次免疫,获取多克隆抗体并检测效价。【结果】由生物信息学分析结果得出p30蛋白含194个氨基酸,分子式为C_(1001)H_(1575)N_(259)O_(308)S_(7),p30蛋白为亲水性蛋白,不含跨膜区,无信号肽,二三级结构中含大量的α-螺旋。蛋白表达结果显示,当诱导时间为6 h,IPTG终浓度为0.05 mmol/L,诱导温度为34℃时,p30重组蛋白表达量达到最佳,浓度高达0.9 mg/mL以上,1 L菌液可产53 mg重组蛋白。通过间接ELISA测得小鼠血清抗体效价高达1:10000000。Western Blotting结果显示,制备的p30蛋白具有较好的特异性。【结论】经过表达优化p30蛋白产量得到明显提高,并获得效价较高的多克隆抗体,且具有很好的特异性。对研发针对p30更加灵敏的诊断试剂盒提供了重要的理论依据。

关键词： 大豆分离蛋白   挤压膨化   抗原性   蛋白质结构  

摘要： 旨在为开发大豆蛋白的脱敏技术提供参考,对大豆分离蛋白(SPI)进行挤压膨化处理,对不同挤压膨化温度下SPI的抗原性、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、氨基酸组成、溶解度、紫外吸收光谱、内源荧光光谱及表面疏水性进行分析。结果表明:随着挤压膨化温度的升高,SPI抗原性呈现先降低再升高的趋势,145℃时SPI的抗原性下降最为显著;SPI中抗原蛋白β-伴大豆球蛋白的α、α′、β亚基以及大豆球蛋白的酸性亚基和碱性亚基均发生明显降解;SPI的氨基酸组成、必需氨基酸含量与氨基酸总量比值无明显变化,营养性保持良好;SPI溶解度降低;氢键、二硫键、疏水相互作用均是维持SPI空间结构的分子作用力,其中氢键起主要作用;SPI的紫外光谱和内源荧光光谱均出现不同程度的红移,紫外吸收强度及荧光强度发生变化,表面疏水性显著下降,SPI的三级结构发生改变。综上,挤压膨化能够在一定程度上降低SPI的抗原性,并影响其空间结构。

关键词： 远距离运输   应激   西门塔尔牛   临床指标   细胞因子   肠道菌群  

摘要： 【目的】旨在探究远距离运输对西门塔尔牛主要临床和血液相关指标及肠道菌群的影响。【方法】试验选取70头8月龄临床检查健康、体况相近的西门塔尔牛,采用上下层有篷运输车,密度约为1.04 m2/头,从内蒙古自治区通辽市运往四川省泸定县,随机选取上层12头为研究对象并标记。运输装车当天和到达目的地以及到达后第2~7天分别标记为Tb、Ta和D2~D7。测定并记录Tb至D7主要临床指标,统计发病率和死亡率。分别采用ELISA法和16S rDNA检测牛Tb和Ta血清炎性、免疫、氧化、应激等因子水平和肠道粪便菌群变化。【结果】远距离运输后较运输前,西门塔尔牛脱水程度、体温、心率、呼吸频率和发病率均极显著升高(P<0.01),而体重和单次反刍咀嚼次数极显著下降(P<0.01),主要以呼吸道疾病(13头,发病率为19%)和消化道疾病(11头,发病率为16%)为主;血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10和CRP水平极显著下降(P<0.01),而Ig A、IgG和CAT水平极显著上升(P<0.01),IL-6和SAA水平均显著下降(P<0.05),而IgM水平显著上升(P<0.05);肠道菌群在门水平上,拟杆菌门、Spirochaetota菌门丰度显著下降(P<0.05),放线菌门(Actinobacteria)、蓝细菌门(Cyanobacteria)丰度显著上升(P<0.05),脱硫弧菌门(Desulfobacterota)丰度极显著上升(P<0.01)。在属水平上,Rikenellaceae_RC9_gut_group、Alistipes、Monoglobus和Prevotellaceae_UCG-004丰度显著下降(P<0.05),NK4A214_group丰度显著上升(P<0.05)。【结论】远距离运输易造成西门塔尔牛严重脱水,体重下降,体温、心率和呼吸频率显著上升,并影响反刍,导致呼吸道和消化道疾病发病率升高;引起免疫力降低,发生炎症反应和氧化应激;肠道菌群多样性和丰富度显著下降,且有益菌丰度显著下降,而有害菌丰度显著上升。

关键词： 绵羊肺炎支原体   免疫功能   免疫球蛋白   细胞因子   ELISA  

摘要： 旨在研究绵羊肺炎支原体(Mo)感染盘羊杂交羊后免疫功能的变化。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测免疫球蛋白(Ig)、核因子κB(NF-κB)信号通路相关细胞因子以及CD4浓度和CD8浓度;按照前期建立的绵羊支原体肺炎发病模型的方法,对6只盘羊杂交羊人工感染发病,设为感染组,另外6只盘羊杂交羊注射等量PBS为对照组;在攻毒第0、7、14、21和28天分别采集静脉血,分离血清,检测IgG、IgA、IgM、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-18(IL-18)、CD4与CD8的浓度。结果:与对照组相比,Mo感染导致盘羊杂交羊血清中IgA与IgM在14 d后显著升高(P<0.05),IgA、IgM、IgG在21 d后极显著升高(P<0.01);NF-κB与IL-1β水平在14 d显著升高(P<0.05),在21、28 d极显著升高(P<0.01);IL-17水平在28 d极显著提升(P<0.01);IL-18水平在21 d后极显著提升(P<0.01);CD4浓度及CD4/CD8比值在14 d显著降低(P<0.01),CD8浓度在14 d后显著升高(P<0.01)。综上,Mo感染盘羊杂交羊后,可刺激宿主的IgA、IgG、IgM水平升高,NF-κB、IL-1β、IL-17和IL-18表达水平上升,CD4浓度降低,CD8浓度升高,使宿主的细胞免疫与体液免疫功能均出现了异常。

关键词： 鸭坦布苏病毒   非结构蛋白   亚细胞定位   IFN-β信号通路  

摘要： 【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。