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关键词： 禽戊型肝炎病毒   ORF2蛋白   生物信息学   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 旨在分析禽戊型肝炎病毒(aHEV)CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的结构和生物学功能等,并利用大肠杆菌原核表达系统表达ORF2重组蛋白及制备抗ORF2蛋白多克隆抗体,验证重组蛋白的免疫原性和反应原性等。利用生物信息学软件对CaHEV-GDSZ01株ORF2蛋白的理化性质、结构和功能等方面进行分析;通过酶切、连接pET-32a(+)载体与CaHEV GDSZ01株的ORF2基因,构建pET-32a-ORF2-His和pET-32a-ORF2原核表达质粒,并转化至DE3感受态细胞中进行诱导表达,分析其表达形式;ORF2重组蛋白经切胶纯化,利用Western Blot试验验证其反应原性后,免疫新西兰大白兔以获得兔抗ORF2蛋白多克隆抗体,并通过Western Blot方法对多抗进行鉴定分析、利用间接ELISA方法进行抗体效价检测。生物信息学分析结果显示,CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白为亲水性的、不稳定的蛋白,且其存在信号肽的概率高达93.59%,其二级结构主要以无规则卷曲为主,具备结合抗体的结构条件,其保护性抗原整体预测评分则表明ORF2蛋白具备良好的免疫原性。试验成功构建了ORF2重组原核表达质粒,并成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE试验和Western Blot试验显示,诱导表达的蛋白主要为非可溶性蛋白,并具有良好的反应原性;而制备的兔源抗aHEV ORF2蛋白多克隆抗体的效价为1∶102400,且能特异性识别免疫原ORF2蛋白、非免疫原ORF2-His蛋白和截短的sORF2蛋白。以上结果初步分析了ORF2蛋白的理化性质和部分生物学功能,成功表达了aHEV ORF2蛋白,制备了抗ORF2蛋白的兔源多克隆抗体。

关键词： 癌胚抗原   甲胎蛋白   胃泌素-17   血脂指标   结直肠息肉  

摘要： 目的探讨癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、胃泌素(G)-17及血脂指标与结直肠息肉的相关性,以期为早期结直肠癌(CRC)的预测和防控提供新的思路和方法。方法选取2018年9月至2021年6月甘肃省第二人民医院收治的140例结直肠息肉患者为息肉组,另选取同期110例经结肠镜检查无异常者为健康组,进行回顾性分析。比较息肉组与健康组研究对象临床资料,多因素Logistic回归分析影响结直肠息肉发病的独立危险因素,比较不同性别、息肉数量、病理类型结直肠息肉患者的临床资料。结果息肉组研究对象年龄>60岁、男性占比及甲胎蛋白(AFP)、三酰甘油(TG)、尿酸(UA)水平均高于健康组,载脂蛋白(Apo)A1水平低于健康组(均P<0.05)。两组患者吸烟史、饮酒史及癌胚抗原(CEA)、胃泌素(G)-17、总胆固醇(TC)、ApoB水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:年龄>60岁、男性、TG高均为影响结直肠息肉发病的独立危险因素(均P<0.05)。不同性别结直肠息肉患者年龄及CEA、TG、TC、ApoA1水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。140例结直肠息肉患者中男性组AFP、G-17、ApoB水平均低于女性组,UA水平高于女性组(均P<0.05)。不同息肉数量结直肠息肉患者年龄及CEA、AFP、G-17、TG、TC、UA、ApoA1水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。多息肉组患者男性占比高于单发息肉组,ApoB水平低于单发息肉组(均P<0.05)。不同病理类型结直肠息肉患者年龄及CEA、AFP、TG、TC、UA、ApoA1水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。腺瘤性息肉组患者男性占比最高,增生性息肉组患者G-17水平最高、ApoB水平最低(均P<0.05)。结论年龄>60岁、男性、TG高均为影响结直肠息肉发病的独立危险因素。临床还应重点关注AFP、G-17、ApoB水平较低,UA水平较高的人群,尽早筛查和干预,以降低结直肠息肉的发病率。

关键词： Periostin   人源化单克隆抗体   视网膜纤维化  

摘要： 目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚克隆到表达载体PATX-GS2,稳定转染CHO细胞,经MSX加压筛选、有限稀释获得单克隆细胞株。结果:经RT-PCR扩增V_(H)和V_(L)基因,确定轻重链可变区序列,通过CDR移植方法,成功对鼠源单抗进行人源化改造,并构建了真核质粒载体,经转染至CHO细胞表达,成功获得人源化抗periostin抗体,ELISA和Western blot结果证明,制备的人源化抗体具有良好的活性和亲和力。结论:本研究成功制备了抗periostin人源化单克隆抗体,且该人源化抗体可以与体内periostin蛋白特异性结合,具有生物学活性,为精准治疗视网膜纤维化病变、组织器官纤维化病变及恶性肿瘤提供了科学数据。

关键词： 炎症因子   糖尿病视网膜病变   大鼠模型   组织因子途径抑制剂   相关性  

摘要： 目的通过对糖尿病视网膜病变大鼠外周血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制剂(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)水平的检测,探讨炎症与糖尿病视网膜病变病程发展的关系。方法20只链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病模型,以出现糖尿病视网膜病变的9只大鼠为实验组,未出现糖尿病视网膜病变的11只大鼠为对照组。观察两组眼底及血清中相关因子的变化情况。使用视网膜成像系统对实验组和对照组进行眼底彩照及眼底荧光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)观察不同周期的变化。采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清IL-6、TNF-α、VEGF、TF和TFPI水平,并进行统计学分析。结果实验组的眼底1月后在远离视盘部分区域和2月后在视盘周围区域出现了白色絮状现象,而对照组表现均正常。FFA造影显示,实验组在1月后的眼底出现了点状和棉絮状荧光堆积渗漏;2月后,实验组出现了大面积的荧光渗漏。而对照组未观察到。实验组、对照组IL-6差异无统计学意义(P>0.05),实验组TNF-α、VEGF、TF均高于对照组,但TFPI水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-6、TNF-α、VEGF与TF均为正相关关系,但IL-6、VEGF相关性检验无统计学意义(P>0.05),TNF-α有统计学意义(P<0.05);IL-6、TNF-α、VEGF与TFPI水平均为负相关关系,但VEGF与TFPI具有统计学意义(P<0.05)。提示糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)状态下AUC为TFPI>TF>TNF-α>VEGF>IL-6。结论炎症因子与糖尿病视网膜组织病变有一定的关联性,炎症在糖尿病视网膜病变的发病机制和发展中起着一定作用,临床中可通过控制炎症来预防、治疗糖尿病视网膜病变。

关键词： 隐形矫治   固定矫治   IL-18   IL-37   C反应蛋白  

摘要： 目的:探讨无托槽隐形矫治与固定矫治患者龈沟液(GCF)中C反应蛋白(CRP)与IL-18、 IL-37表达及其相关性。方法:纳入接受无托槽隐形矫治的10例患者作为实验组,接受固定矫治的12例患者作为对照组,ELISA法分别检测患者接受矫治前与接受矫治后24 h、 1个月、 3个月龈沟液中IL-18、 IL-37及CRP的表达水平。结果:正畸治疗前,两组GCF中IL-18、 IL-37及CRP表达水平差异无统计学意义(P>0.05);佩戴矫治器24 h,两组GCF中IL-18、 IL-37及CRP的表达水平均升高,实验组GCF中IL-18、 IL-37及CRP表达水平高于对照组(P<0.05);佩戴矫治器1个月,实验组GCF中IL-18、IL-37及CRP的表达水平低于对照组(P<0.05);佩戴矫治器3个月,组间差异,P>0.05。两组受试者GCF中CRP与IL-18、 IL-37水平呈正相关(P<0.001)。结论:隐形矫治矫治24 h内,由于高应力的刺激GCF中IL-18、 IL-37和CRP水平明显高于固定矫治,提示加力初期隐形矫治对牙周组织的影响可能大于固定矫治。

关键词： 清热通络除痹法   类风湿关节炎   IL-1   IL-6   TNF-α   疾病活动指标  

摘要： 目的探讨清热通络除痹法对类风湿关节炎患者白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平和疾病活动指标的影响。方法选择2018年1月—2023年5月经甲氨蝶呤治疗无效的中重度类风湿关节炎患者62例,随机分两组,对照组采用托法替布,观察组采用清热通络除痹法联合托法替布,持续治疗2个月。比较两组患者的临床疗效和不良反应,治疗前后测定血清类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和IL-1、IL-6以及TNF-α水平。结果观察组总有效率为96.77%(30/31),显著高于对照组的80.65%(25/31),差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者的血清RF、CRP、ESR水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者上述指标均有所下降,且观察组下降幅度大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),显示出观察组在降低炎症指标方面的优势。治疗前两组血清IL-1、IL-6、TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者上述指标均显著降低,且观察组降低幅度大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),显示出观察组在调节炎症因子方面的优势。对照组不良反应发生率为12.90%(4/31),观察组不良反应发生率为16.13%(5/31),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论清热通络除痹法可以提高类风湿关节炎患者的临床疗效,减轻疾病活动指标,抑制IL-1、IL-6、TNF-α水平,安全性高。

关键词： 水晶兰苷   Pumilio RNA结合家族成员1   Toll样受体4   髓样分化因子88   炎症   软骨细胞  

摘要： 目的研究水晶兰苷对大鼠膝软骨细胞中Pumilio RNA结合家族成员1(Pumilio RNA-binding family member 1,PUM1)-Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response 88,MyD88)信号通路及白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α相关炎性因子的影响,探讨水晶兰苷对大鼠膝骨关节炎软骨细胞的作用机制。方法将大鼠软骨细胞随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组,除对照组外,其余3组均通过10 ng/mL的IL-1β诱导细胞炎症,构建大鼠膝关节炎模型;低剂量组、高剂量组分别给予25μg/mL、50μg/mL水晶兰苷进行24 h干预。酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测软骨细胞中PUM1、TLR4和MyD88的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测软骨细胞中PUM1、TLR4和MyD88的蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组上清液中IL-1β、IL-6及TNF-α含量均升高(P<0.05),PUM1的mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),TLR4和MyD88的mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量组和高剂量组的IL-1β、IL-6及TNF-α含量均降低(P<0.05),PUM1的mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),TLR4和MyD88的mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论水晶兰苷通过上调PUM1表达,抑制TLR4和MyD88信号通路的传递,进而降低下游炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6表达。

关键词： 半夏泻心汤   寒热错杂   浅表性胃炎   胃肠激素   细胞免疫功能   炎性因子  

摘要： 目的:探讨半夏泻心汤联合四联疗法对寒热错杂型慢性浅表性胃炎的治疗作用,并观察其对外周血T淋巴细胞亚群、胃肠激素和炎症因子水平的影响。方法:选取寒热错杂型慢性浅表性胃炎并幽门螺杆菌检查为阳性的患者86例,随机分为对照组(n=43)和观察组(n=43),对照组接受常规西医四联治疗,观察组在常规西医四联治疗的基础上给予半夏泻心汤治疗。治疗前和治疗后4周对两组患者进行中医症状评分,并测定T淋巴细胞亚群、血清胃肠激素和血清炎症因子。结果:治疗后观察组患者中医症状评分、患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)和IL-32水平较对照组显著降低(P<0.05),症状改善总有效率、血清胃动力素和生长抑素水平、外周血CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平总有效率显著升高(P<0.05)。结论:半夏泻心汤联合四联疗法治疗寒热错杂型慢性浅表性胃炎表现出较好的临床疗效,其机制可能与调节胃肠激素分泌和细胞免疫功能以及下调炎性因子水平有关。

关键词： 细胞因子   自身免疫性疾病   ANCA相关性血管炎   溃疡性结肠炎   青少年特发性关节炎   特应性皮炎   银屑病  

摘要： 细胞因子在不同自身免疫性疾病中作用可能有所不同,在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性血管炎中,不同的细胞因子谱可反映特定器官受累程度;在溃疡性结肠炎(UC)中发病、进展和晚期不同疾病进程中有不同细胞因子谱的水平升高;在青少年特发性关节炎(JIA)中细胞因子风暴参与巨噬细胞激活综合征的发生;在特应性皮炎中细胞因子可通过影响脂质代谢酶导致表皮屏障缺陷;在银屑病中细胞因子又可介导微生物群失衡导致血管生成和慢性炎症。

摘要： Objective • To examine the therapeutic effects of vitamin E combined with recombinant human epidermal growth factor on recurrent oral ulcers as well as on the levels of serum superoxide dismutase (SOD), interleukin-10 (IL-10), and tumor necrosis factor-(TNF-α), to provide evidence to facilitate medical management. Method • From June 2021 to May 2022, 84 patients with recurrent oral ulcers assessed and treated in our hospital were assigned to the control group and observation group with 42 cases in each group. Vitamin E was administered to the control group, while recombinant human epidermal growth factor and vitamin E were administered to the observation group. The clinical efficacy, serum SOD level, inflammatory factor level (IL-10, TNF-α), immune function index, clinical symptom improvement, pain disappearance time, healing time of ulcer surface, and adverse reactions were examined. Results • Clinical efficacy of the observation group (92.86%) was considerably greater than the control group (73.81%), (P <.05). Following treatment, the observation group had comparatively higher levels of serum SOD and significantly decreased TNF-α and IL-10 concentrations compared to the control group (P <.05). Similarly, post-treatment, the observation group had substantially higher CD3+, CD4+, and CD4+/CD8+ concentrations and lower CD8+ concentrations compared to the normal control (P <.05). In contrast to the control group, the observation group’s pain degree score, ulcer diameter, duration for pain relief, and ulcer surface healing time duration were reduced substantially (P <.05). Notably, the incidence of adverse reactions was fairly similar in both groups (P >.05). Conclusion • Vitamin E combined with recombinant human epidermal growth factor has a significant clinical effect on recurrent oral ulcers, can achieve rapid improvement of symptoms in patients, and is relatively safe to be used as a clinical therapy. © 2024, InnoVision Communications. All rights reserved.