关键词:
清化瘀热方
IL-33/ST2信号通路
糖尿病视网膜病变
炎症
细胞凋亡
动物实验,大鼠
摘要:
目的探讨清化瘀热方(Qinghua Yure Fang,QHYRF)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠中视网膜细胞炎症、凋亡和氧化应激的影响及信号网络机制。方法通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射建立DR大鼠模型和人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,hRMECs)高糖处理的细胞模型。使用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和透射电镜观察视网膜组织。使用相应试剂盒、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白质免疫印迹分别对hRMEC中氧化应激指标、促炎细胞因子和促凋亡蛋白的表达模式进行表征。蛋白质免疫印迹法分析白细胞介素33(interleukin-33,IL-33)/生长刺激表达基因2(suppression of tumorigenicity 2,ST2)信号通路相关蛋白的表达。结果HE染色结果显示,与假手术大鼠相比,STZ处理的大鼠表现出明显的水肿、毛细血管壁增厚、内皮细胞增生和纤维组织增生,并通过以剂量依赖的方式给予QHRYF治疗后得到部分缓解(P<0.05)。视网膜的超微结构观察结果显示,与假手术大鼠相比,STZ处理大鼠的毛细血管基底膜厚度(basement membrane thickness,BMT)增加,而QHRYF治疗以剂量依赖的方式降低了BMT值(P<0.05)。与假手术大鼠相比,STZ处理的大鼠IL-33和ST2的表达显著降低(P<0.05),QHRYF处理以剂量依赖的方式提高了IL-33和ST2的表达(P<0.05)。与假手术大鼠相比,STZ大鼠视网膜组织中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和3,4-亚甲二氧亚氨基苯丙胺(3,4-methylenedioxyamphetamine,MDA)水平显著升高、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平降低(P<0.05),而这些变化均通过QHRYF以剂量依赖的方式部分逆转(P<0.05)。与假手术大鼠相比,STZ处理的大鼠细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的含量显著增加。与注射磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)的STZ处理大鼠相比,注射QHRYF的STZ治疗大鼠在细胞上清液中IL-6、TNF-α和CRP的表达量显著降低(P<0.05)。与假手术大鼠相比,STZ处理大鼠的视网膜组织中凋亡相关因子cleaved caspase-3蛋白表达更高,QHRYF处理可以以剂量依赖的方式降低该蛋白表达(P<0.05)。结论QHYRF通过激活IL-33/ST2信号通路减轻DR大鼠模型中的视网膜细胞炎症、凋亡和氧化应激。