关键词： 脂滴   中性脂   液泡   线粒体   过氧化物酶体   细胞核  

摘要： 细胞器通过接触及分工协作以实现彼此间的物质交换和信息交流。脂滴是细胞内中性脂的主要贮存场所,但功能却远不止于此;它还能与内质网、线粒体、溶酶体、细胞核等多种细胞器发生相互作用,共同完成包括脂代谢调控、膜转运以及信号转导等一系列生理功能。在本研究中,我们分别构建了基于野生型菌株(W303-1A)、中性脂合成缺陷菌株(dga1Δlro1Δ和are1Δare2Δ)及脂滴缺失菌株(dga1Δlro1Δare1Δare2Δ)的多种细胞器荧光标记菌株,以探究脂滴缺陷对胞内其他细胞器在形态、数量乃至功能上造成的影响。通过一系列的显微成像分析,我们发现脂滴的缺陷会引起液泡、线粒体及细胞核形态的异常,同时也可影响胞内过氧化物酶体的数量。进一步的生理生化探究发现,脂滴的缺陷还能够影响到包括液泡表面蛋白Vph1-GFP的降解、自噬小体的生成、线粒体的有氧呼吸及胞内活性氧的清除等生理过程。为进一步分析脂滴缺陷导致胞内其他细胞器发生形态或功能异常的直接原因,我们又构建了甘油三酯水解酶缺失突变菌株(tgl3Δtgl4Δtgl5Δ)、固醇酯水解酶缺失突变菌株(tgl1Δyeh1Δyeh2Δ),通过分析发现脂滴中性脂及其水解产物并不是直接影响细胞器形态及功能异常的主因。随后,我们针对脂滴缺陷可引起液泡及线粒体形态异常的表型,又构建了脂滴表面蛋白的单基因敲除文库,尝试回答脂滴表面蛋白是否参与调控液泡或线粒体的形态;实验结果显示,虽然大部分脂滴表面蛋白的突变并不会影响到液泡及线粒体的形态,但是依旧存在少数脂滴表面蛋白的缺失会导致液泡或线粒体形态异常。通过脂滴对胞内细胞器形态及功能的初步研究,将能拓宽我们对脂滴生物学的认知,也有助于进一步理解代谢性疾病的相关发病机制。

摘要： ~~

关键词： 吴组缃   菉竹山房   镜像   女性群像   对比  

摘要： 吴组缃《菉竹山房》中二姑姑通常被解读为礼教压制下女性悲剧形象之典型。新时期以来，该篇目的研究重心放在了二姑姑的单人形象解读上，忽视了吴组缃塑造的女性群像的审美价值和文学意蕴。本文不仅着眼于二姑姑这位核心人物，还将她与其他女性人物进行横纵向比较。从该文设置的多样身份联系、不同的环境氛围出发，借助吴组缃人物塑造的艺术技巧和行文策略，进一步深入女性复杂的心理世界，从文本架构中理解以二姑姑为首的女性群像悲剧审美意蕴。

摘要： 城市设计与建筑设计城市、建筑、设计三者之间有多种组合模式，也蕴含了多种关系，比如城市设计、建筑设计、城市建筑、设计城市、设计建筑等。这其中，城市设计和建筑设计之间的关系是城市设计院团队关注的重点。有人说城市设计是介于规划和建筑之间的一门学科，有一定道理但不准确。城市设计又称都市设计（urban design），很多设计师和理论家对这一名词的定义都有自己独特的看法。笔者较为认同的观点是“城市设计是一种关注城市规划布局、城市面貌、城镇功能，并且尤其关注城市公共空间的一门学科”。

摘要： 7月6日，国务院总理李克强主持召开国务院常务会议，部署中央预算执行和其他财政收支审计查出问题整改工作。会议指出，按照党中央、国务院部署，有关部门对2021年度中央预算执行和其他财政支出、国有资产管理、重大政策落实等进行了审计，结果已于近期公布。会议要求，强化问题整改，管好用好财政性资金，节用裕民，推动宏观政策落实，稳住经济大盘。一要对审计查出的问题列出清单，印发有关方面。各有关地方、

关键词： 胶质瘤   Erastin   铁死亡   凋亡   焦亡  

摘要： 胶质瘤是一种原发性的颅内肿瘤,是最常见和浸润性极强的肿瘤之一。目前胶质母细胞瘤的标准化治疗是在最大安全范围的手术切除,然后通过单独放疗或化疗后联合替莫唑胺药物治疗,但患者的预后较差且极易复发。因此,亟待为胶质瘤患者寻找有效的治疗策略。铁死亡是2012年新发现的一种非典型的细胞死亡方式,具有铁离子依赖性、脂质过氧化产物和活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累的特点,与细胞凋亡、焦亡、坏死等死亡方式在形态学、生化和发生机制上均不同。临床和实验研究均发现诱导肿瘤细胞铁死亡可抑制其增殖和发展,反之抑制铁死亡通路则促进肿瘤的增殖和恶性转化。已有研究证实,胶质瘤细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)含量显著升高,铁死亡水平降低,因此,通过促进胶质瘤细胞铁死亡的发生是治疗疾病的策略之一。抗肿瘤药物Erastin可通过抑制细胞膜表面的胱氨酸/谷氨酸反转运系统(cystine/glutamate antiporter,system Xc-),抑制细胞内半胱氨酸(cysteine,Cys)的摄取,削弱谷胱甘肽的生物合成并破坏细胞内的氧化还原平衡,从而导致铁死亡。研究发现铁死亡和凋亡、自噬、焦亡等程序性细胞死亡方式密切相关。细胞铁死亡和凋亡的信号通路中会涉及到一些共同的分子,如p53、p38、VDAC2以及BAP1等。肿瘤抑制因子p53可参与细胞应激诱导细胞周期停滞和细胞凋亡,在对表达乙酰化缺陷的p533KR小鼠的研究中发现,p533KR能够抑制胱氨酸/谷氨酸反转运蛋白的关键成分SLC7A11的表达,抑制胱氨酸的摄取并使细胞对铁死亡敏感。由铁死亡介导的促凋亡蛋白Bid裂解会促进细胞凋亡的发生,且铁死亡发生在细胞凋亡的上游。在体外培养的人胰腺癌细胞中,自噬可通过降解细胞的铁蛋白导致铁死亡的发生。Erastin诱导细胞铁死亡的过程中是否伴随其他类型的细胞死亡方式还有待进一步研究。最新的研究表明,铁死亡进程中,细胞不发生破裂,但可以通过渗透机制,释放某种信号或代谢物,传播“死亡信号”诱导相邻的细胞发生铁死亡,但具体的机制尚不明确。那么,在细胞铁死亡过程中所释放的代谢物质,是否也可以通过改变细胞微环境引起其他程序性死亡方式。因此,明确Erastin触发细胞死亡中是否存在多种细胞死亡方式,阐明铁死亡与其他细胞死亡方式的关系及相关机制,将对胶质瘤的临床治疗和药物开发至关重要。为深入探讨上述问题,本实验选用大鼠星形胶质瘤C6细胞系,给予不同浓度(0.1μM、0.5μM、1μM、5μM、10μM、30μM、50μM)Erastin处理,观察铁死亡、凋亡、自噬和焦亡的生化指标及细胞形态变化。应用透射电子显微镜、蛋白质印迹(Western blot)、流式细胞术、CCK-8、荧光染色等实验技术方法,观察不同浓度Erastin处理后细胞形态学特征、检测细胞内脂质过氧化水平、GPX4蛋白的表达变化和线粒体ROS含量的变化,明确Erastin诱导的细胞损伤中铁死亡的发生。检测细胞早期凋亡水平、检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白、抑凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax以及激活的凋亡效应酶cleaved caspase-3蛋白的表达变化,观察Erastin损伤中凋亡现象。透射电子显微镜观察细胞自噬形态学改变,检测LC3蛋白以及p62蛋白表达变化,观察Erastin诱导的细胞损伤中自噬的现象。透射电子显微镜观察细胞焦亡形态学改变,检测Gasdermin-D(GSDMD)、pro caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达变化,观察Erastin损伤中焦亡的现象。然后给予铁死亡特异性抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)处理,再观察上述指标。为研究铁死亡过程中分泌的代谢物质对细胞功能和存活的影响,应用Fer-1预处理Erastin损伤的C6细胞,收集条件培养基,然后处理正常培养的细胞,检测细胞早期凋亡水平、自噬和焦亡相关蛋白的变化。同时,对皮下成瘤后的雄性BALB/c Nude小鼠腹腔注射不同浓度(2.74μg/g、5.47μg/g、16.41μg/g)Erastin药物处理,每日称量小鼠体重、测量肿瘤大小变化,透射电镜观察肿瘤组织中铁死亡、自噬和焦亡的形态学特征,在整体水平探究不同剂量Erastin诱导的胶质瘤细胞的死亡方式和相互关系。研究结果如下:1.不同浓度(0.1μM、0.5μM、1μM、5μM、10μM、30μM、50μM)的Erastin药物处理C6细胞24 hrs,其中5μM、10μM、30μM、50μM组细胞存活率分别降低16.8%、41.4%、79.8%、87.1%、92%和91.9%,与对照组相比,差别具有统计学意义(P<0.001

摘要： 奈良美智上海|余德耀美术馆2022年3月5日—9月4日该展览为日本艺术家奈良美智(Yoshitomo Nara)在中国的首次个展，也是他在世界范围内的首次大规模回顾巡展的第二站。本次展览将呈现70多件重要绘画、雕塑、陶瓷、装置作品，以及700多幅纸上作品，包含大量未曾展出的手稿，借此全面回顾艺术家跨越37年的多产艺术生涯。

关键词： 奥斯卡·王尔德   双重叙事运动   矛盾性   颠覆性  

摘要： 奥斯卡·王尔德(1854-1900)是维多利亚晚期唯美主义的代表人物,他坚持“为艺术而艺术”的原则。然而,王尔德的童话似乎是例外,因为大多数童话都涉及明显的道德说教,因此未能像他的戏剧和小说一样吸引广泛的学术关注。尽管如此,他的童话还是取得了很高的艺术成就。王尔德的第一部童话集《快乐王子和其他故事》复杂而充满吸引力,同时表达了顺应和反叛的思想。借助申丹的双重叙事运动理论,《快乐王子和其他故事》中传达的相互矛盾的信息变得清晰。首先,王尔德质疑维多利亚时代社会所宣扬的道德的正确性和真实性。《快乐王子》在宣扬利他主义和牺牲精神的同时,通过揭露这些价值观的无效性,暗中颠覆了这些价值观。《忠实的朋友》公开敦促人们无私而忠实地生活,却又通过揭示语言的局限性,暗中反对维多利亚时代对说教的偏爱。此外,王尔德在《自私的巨人》中挑战所谓的正统基督教信仰,并引导读者重新评估这些主流的解释是否真的是上帝的教导。尽管王尔德公开赞同基督教的义人可以入天堂的宣言,但他却暗地里反对基督教教义,并暗示所有人,甚至是那些被基督教认为有罪的人,都可以进入天堂。此外,王尔德还肯定了在维多利亚文化中平衡对立价值观的必要性。《夜莺与玫瑰》公开呼吁人们对感性的关注,又含蓄地表达了人类容易被感性所迷惑,需要保持理性。《了不起的火箭》公开地肯定了实用的重要性,同时又暗地里揭示了想象是改善不完美现实的一种方式。王尔德作品的矛盾性是必然的,不仅因为王尔德在思想上就是矛盾的,还因为王尔德在童话故事中传达了双重道德准则以调和传统的童话模式和不被时代认可的观点,使其成为儿童和成人都能接受的童话。

关键词： 肠道病毒D68型   肠道病毒71型   交叉保护性   荧光定量PCR  

摘要： 背景肠道病毒D68(Enterovirus-D68,EV-D68)属小核糖核酸病毒,肠道病毒科肠道病毒D组,是一种罕见肠道病毒逐渐发展为广泛传播的病原。不同于A-C组经典肠道病毒,EV-D68兼具肠道病毒和鼻病毒的特征,经呼吸道飞沫传播,主要产生呼吸道综合征,如咳嗽、气喘、气促、咽痛等,偶尔可致儿童严重呼吸道疾病,出现神经系统症状,特别是急性弛缓性脊髓炎(Acute Flaccid Myelitis,AFM),尽管病毒感染的主要部位多种多样,包括呼吸道和消化道,以及与这些感染相关的一系列疾病,研究发现EV71感染血清与其它类型的肠道病毒如CA16、CA6、CA10、CA5、CA9、CB3[1]等存在结合反应,具有较弱的中和活性。目前还未见EV-D68与它他肠道病毒是否存在结合反应的相关报道,并且也尚未研发出针对EV-D68的特异性抗病毒药物或疫苗,临床以对症治疗为主,EV-D68在体内引起免疫反应的机制也尚未明了,值得进一步研究。目的探讨肠道病毒EV-D68广东流行株分子特征以及其它肠道病毒感染恢复期血清是否对EV-D68型感染有保护性。方法本实验从本院2014-2018年2503名呼吸道感染住院儿童中筛查到17例EV-D68感染者,挑选其中5例的呼吸道标本(鼻咽拭子),以RD细胞为敏感细胞,进行病毒分离培养,观察到细胞出现病变后,提取培养上清中的病毒核酸,通过荧光定量PCR初步检测,结果显示阳性的标本以EV-D68 VP1区特异性引物进行巢氏PCR扩增联合一代测序,经基因库(GenBank)进行同源性比对,鉴定为EV-D68的标本进一步提取RNA进行二代测序,分析其全基因组序列。2010年通过临床回访,共收集了 30份肠道病毒感染者恢复期血清,包括CA16感染血清7份,EV71型感染血清14份,CA6型感染血清6份,CA10型感染血清1份,其他还未确定型感染血清2份。通过以观察细胞病变为基础的EV-D68型病毒中和实验方法;将EV71、CA6、CA10、CA16感染恢复期血清对EV-D68型病毒进行中和实验,观察其交叉保护性。结果从5例已确定呼吸道感染EV-D68患者的呼吸道标本(鼻拭子)中成功分离培养出三株EV-D68病毒。将这三株病毒进行全基因组测序,成功获得2017年广州流行株(GZ70542)完整的全基因组序列,分析比较其与已公布序列的同源性和变异位点。GZ70542与2015年检出的深圳株KU982558.1较为接近,与最接近的已知毒株相比,在毒株GZ70542的完整基因组区域中未观察到序列插入或缺失。经斑点免疫荧光检测(Immunofluorescence Assay,IFA)鉴定,EV71感染恢复期血清与EV-D68病毒存在交叉反应,EV71、CA6、CA16、CA10感染血清均对EV-D68具有较弱的中和活性,感染效价分别为1:64、1:16、1:256、1:128。肠道病毒产生的保护性抗体会随着时间的推移,效价会降低,感染后短时间内具有保护性。结论GZ70542与深圳2015年检出的KU982558.1较为接近,与最接近的已知毒株相比,在毒株GZ70542的完整基因组区域中未观察到序列的插入或缺失,说明此株在中国南部的流行未出现较大的进化与变异,流行上有地域的局限性。其它类型肠道病毒EV71、CA6、CA16、CA10感染恢复期血清对EV-D68型具有一定的保护性。